SDS-PAGE凝胶一步法配制试剂盒(红色上层胶)
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产品编号 P0901S
数量
¥ 179.00
产品包装:
30-50gels 150-250gels
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使用说明
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碧云天生产的SDS-PAGE凝胶一步法配制试剂盒(红色上层胶),即SDS-PAGE Gel One-step Preparation Kit (Red Stacking Gel),提供了一步法配制SDS-PAGE凝胶(即SDS聚丙烯酰胺凝胶)所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可连续灌注下层胶和上层胶通过一步法配制SDS-PAGE胶[1]。本试剂盒也可以用于配制非变性PAGE胶。

本试剂盒使用一步法配胶,快速高效。本试剂盒优化了配方,按照使用说明将相应溶液混合,补充适量蒸馏水,再加入适量10%凝胶聚合催化剂溶液,混匀后即可灌胶。灌注下层胶(即分离胶)后,无需液封可直接加入上层胶(又称浓缩胶、堆积胶或积层胶),一步完成制胶,节约配胶时间。

本试剂盒无须添加TEMED,避免异味。TEMED易挥发,有腐蚀性,有臭味,本试剂盒进行了优化,相应试剂中预添加了易挥发TEMED液体的替代物,正常情况下,配胶过程中无须再额外添加TEMED。

本试剂盒上层胶为红色,指示清晰。本试剂盒的上层胶缓冲液含电泳时无迁移的红色染料,可使蛋白上样孔一目了然,便于上样,且易于判断上样孔是否歪曲或破损。该红色染料可以稳定存在于上层胶中,不会随着电泳进入下层胶,不影响电泳和染色效果,有助于电泳后辨别并切除上层胶,便于后续转膜等实验的进行。

本试剂盒配制的SDS-PAGE凝胶,具有优良的分离效果。电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利,特别是小分子蛋白质条带更清晰。

本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶,也可用于配制非变性(Native) PAGE凝胶。

本试剂盒小包装约可配制30-50块常规大小的PAGE胶,中包装约可配制150-250块凝胶。具体可以配制的凝胶数量与凝胶的浓度、厚薄以及凝胶的大小有关。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0901S-1 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
P0901S-2 1M Tris-HCl, pH8.8 100ml
P0901S-3 10% SDS 5ml
P0901S-4 凝胶聚合催化剂 0.5g
P0901S-5 1M Tris-HCl, pH6.8 (红色) 15ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P0901M-1 30% Acr-Bis (29:1) 500ml
P0901M-2 1M Tris-HCl, pH8.8 500ml
P0901M-3 10% SDS 25ml
P0901M-4 凝胶聚合催化剂 2.5g
P0901M-5 1M Tris-HCl, pH6.8 (红色) 75ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,至少一年有效。30% Acr-Bis (29:1)、1M Tris-HCl, pH8.8、1M Tris-HCl, pH6.8 (红色) 4ºC避光保存。10% SDS、凝胶聚合催化剂可以室温保存。凝胶聚合催化剂配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC保存,通常半年内有效。

注意事项:

凝胶聚合催化剂配制成10%溶液后,应当-20ºC保存,推荐使用超纯水配制。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。凝胶聚合催化剂每次应适量配制,并尽量使用新鲜配制的10%凝胶聚合催化剂溶液。超纯水推荐使用ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。

本产品相应试剂中预添加了TEMED替代物,如需进一步加速凝胶,可按需补充适量TEMED。

1M Tris-HCl, pH6.8 (红色)长期静置后可能会出现沉淀,不影响正常使用,使用前请摇晃均匀。

30% Acr-Bis (29:1)对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的下层胶(即分离胶)。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:
SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
6%胶 50-150kDa
8%胶 30-90kDa
10%胶 20-80kDa
12%胶 12-60kDa
15%胶 10-40kDa
2.称取适量凝胶聚合催化剂,用超纯水或其它高纯度的水配制10%凝胶聚合催化剂溶液。例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用超纯水溶解并定容到1ml,即为10%凝胶聚合催化剂溶液。注:凝胶聚合催化剂配制成溶液后容易失效,建议分装后置于-20ºC保存,通常半年内有效。超纯水推荐使用ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。
3.配制一块常用PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算,上层胶按1.5厘米高度计算,均含约0.3ml的冗余量)参见下表。
凝胶厚度 下层胶体积 上层胶体积
0.75mm 4.0ml 1.0ml
1.0mm 5.4ml 1.5ml
1.5mm 8.0ml 2.0ml
注:下层胶体积已包含适量冗余,请勿全部用于灌制下层胶,以免灌胶时上层胶高度不够。
4.参考下表,配制不同浓度的SDS-PAGE下层胶。适当混匀后倒入到制胶模具中,无须等待下层胶凝固,可直接将配制好的上层胶紧贴玻璃板均匀注入,随后小心插入梳子等待凝固,通常10-30分钟内胶会凝固。也可以用蒸馏水或异丙醇封住液面,直至下层胶充分凝固后再加入上层胶。
注1:具体的凝固时间和温度及光照有关,说明书中10%凝胶聚合催化剂的推荐用量是室温为25ºC时的用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当加大10%凝胶聚合催化剂用量或额外补加适量TEMED以加快凝固速度;当室温高于25ºC时,可以适当减少10%凝胶聚合催化剂用量以减缓凝固速度。
注2:如果配制非变性胶,参考下表配方,不加10% SDS即可配制成非变性PAGE胶。
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
6%胶 5 10 15 20 30 50
超纯水或蒸馏水 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0
30% Acr-Bis (29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
8%胶 5 10 15 20 30 50
超纯水或蒸馏水 1.7 3.3 5 6.7 10.0 16.7
30% Acr-Bis (29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
10%胶 5 10 15 20 30 50
超纯水或蒸馏水 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3
30% Acr-Bis (29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
12%胶 5 10 15 20 30 50
超纯水或蒸馏水 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0
30% Acr-Bis (29:1) 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
成分 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶 5 10 15 20 30 50
超纯水或蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 5.0
30% Acr-Bis (29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 25.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%凝胶聚合催化剂 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
5.按照如下表格配制4%或5%的SDS-PAGE上层胶。下层胶灌注后,直接将配制好的上层胶紧贴玻璃板均匀轻柔注入到下层胶上,小心插入梳子等待凝固。
注1:含红色染料的1M Tris-HCl, pH6.8使用前须摇匀。
注2:一步法直接加入上层胶时建议配制4%的上层胶以达到更好的分层效果,也可根据需求自行配制不同浓度的上层胶。
注3:一步法直接加入上层胶混合液时一定要轻缓并左右平移加入,而不是集中在一个位置灌制,以免上层胶溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度,建议使用1ml移液器缓慢、均匀、左右平移加入。
注4:一步法直接加入上层胶混合液,上下层胶分界线的平整度可能会稍差于液封法,但不影响后续电泳结果。
成分 配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(毫升)
4%胶 2 3 4 6 8 10
超纯水或蒸馏水 1.44 2.16 2.89 4.33 5.77 7.22
30% Acr-Bis (29:1) 0.27 0.4 0.53 0.8 1.07 1.33
1M Tris, pH6.8 (红色) 0.25 0.38 0.5 0.75 1.0 1.25
10% SDS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
10%凝胶聚合催化剂 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
成分 配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶 2 3 4 6 8 10
超纯水或蒸馏水 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5 6.8
30% Acr-Bis (29:1) 0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.7
1M Tris, pH6.8 (红色) 0.25 0.38 0.5 0.75 1.0 1.25
10% SDS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
10%凝胶聚合催化剂 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
6.配制好的凝胶如果当天不能使用,可在4ºC保存1-2天后使用,但通常新鲜配制凝胶的电泳效果更佳。
7.具体的电泳及Western实验操作可以参考如下网页:https://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Laemmli UK. Nature. 1970. 227(5259):680-5.
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产品编号 产品名称 包装
P0901S SDS-PAGE凝胶一步法配制试剂盒(红色上层胶) 30-50gels
P0901M SDS-PAGE凝胶一步法配制试剂盒(红色上层胶) 150-250gels
P0903S SDS-PAGE凝胶一步法快速配制试剂盒(红色上层胶) 30-50gels
P0903M SDS-PAGE凝胶一步法快速配制试剂盒(红色上层胶) 150-250gels
P0906-250ml SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液 250ml
P0906-500ml SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液 500ml
P0908-250ml SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液 250ml
P0908-500ml SDS-PAGE一步法蓝色上层胶预混液 500ml
P0912S 6% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0915S 8% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0917S 10% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0919S 12% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0921S 15% SDS-PAGE凝胶一步法超快速配制试剂盒(红色上层胶) 125gels
P0932-250ml 6% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0932-500ml 6% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0935-250ml 8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0935-500ml 8% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0937-250ml 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0937-500ml 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0941-250ml 12% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0941-500ml 12% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0943-250ml 15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 250ml
P0943-500ml 15% SDS-PAGE一步法下层胶预混液 500ml
P0012A SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 可制30-50块胶
P0012AC SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0670-250ml 10% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0670-500ml 10% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0672-250ml 12% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0672-500ml 12% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0675-250ml 15% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0675-500ml 15% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0676-250ml 6% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0676-500ml 6% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0678-250ml 8% SDS-PAGE下层胶预混液 250ml
P0678-500ml 8% SDS-PAGE下层胶预混液 500ml
P0683-250ml SDS-PAGE上层胶预混液 250ml
P0683-500ml SDS-PAGE上层胶预混液 500ml
P0686 6% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0688 8% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0690 10% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0692 12% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0695 15% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 可制30-50块胶
P0701-0.2ml PAGE上层胶蓝色染料(500X) 0.2ml
P0701-1ml PAGE上层胶蓝色染料(500X) 1ml
P0705-0.2ml PAGE上层胶红色染料(500X) 0.2ml
P0705-1ml PAGE上层胶红色染料(500X) 1ml
P0712-0.2ml PAGE上层胶红色染料(500X, 无迁移) 0.2ml
P0712-1ml PAGE上层胶红色染料(500X, 无迁移) 1ml
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