EarI
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产品编号 D6292L
数量
¥ 2498.00
产品包装:
400U 2kU 10kU 40kU
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碧云天自主研发生产的EarI,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1],是Bst6I、Eam1104I、Ksp632I+的同裂酶(Isoschizomers),其基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
CTCTTC(N)1^ 1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37ºC 65ºC 20min 有时有干扰
GAGAAG(N)4^ 50-100 20-50 0-20 0-20 100 0-20

碧云天生产的EarI酶切DNA双链的效果请参考图1。

图1.碧云天EarI (D6292)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的EarI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的EarI,在1X Buffer Y中酶切含一个EarI位点的300bp的DNA片段,37ºC孵育1小时进行酶切反应,酶切产物为两个长度不等的长度分别为200bp和100bp的片段,随后65ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

酶储存液组成为:10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 300mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 500µg/ml BSA, 50% Glycerol。

1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37ºC),10mM Magnesium acetate,66mM Potassium acetate,0.1mg/ml BSA。

酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,> 95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of EarI required to digest 1µg of λDNA in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6292S-1 EarI (20U/µl) 20µl
D6010Y-80µl 10X Buffer Y 80µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6292M-1 EarI (20U/µl) 100µl
D6010Y-400µl 10X Buffer Y 400µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6292L-1 EarI (20U/µl) 500µl
D6010Y-2ml 10X Buffer Y 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6292XL-1 EarI (20U/µl) 2ml
D6010Y-8ml 10X Buffer Y 8ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

特别注意:甘油含量大于5%,低盐浓度,pH > 8.0或超量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.单酶切时可以参考如下反应体系进行:
Reagent Volume
DNA Substrate xµl (≤1µg)
Ultrapure water (18-x-y)µl
10X Buffer Y 2µl
EarI yµl (0.5-1µl)
Total volume 20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight
注:请把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。按照以上体系酶切质粒,会有少量切刻状态的质粒酶切不完全。
2.双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
参考文献:
1.Polisson C, Morgan RD. Nucleic Acids Res. 1988. 16(20):9872.
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D6055S/M/L/XL BamHI 10/40/200/800kU
D6095S/M/L/XL BglII 2/10/40/200kU
D6128S/M/L/XL BsaI 1/5/20/200kU
D6132S/M/L/XL BspQI 400U/2kU/10kU/40kU
D6176S/M/L Cfr9I 2/10/40kU
D6257S/M/L/XL DpnI 500U/2.5KU/10KU/50KU
D6272S/M/L DraI 4/20/100kU
D6292S/M/L/XL EarI 400U/2kU/10kU/40kU
D6333S/M/L/XL EcoRI 10/40/200/800kU
D6339S/M/L/XL EcoRV 4/20/100/400kU
D6392S/M/L/XL HindIII 10/40/200/1000kU
D6418S/M KpnI 4/20kU
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