碧云天生产的BeyoFast™系列快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5-15分钟内仅使用一种缓冲液就能快速完成DNA酶切的高品质限制性内切酶。
BeyoFast™系列快速内切酶适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
BeyoFast™系列快速内切酶具有如下优点。(1) 5-15分钟内就能完成酶切;(2) 所有BeyoFast™系列内切酶共用一种酶切缓冲液CutEZ™ Buffer,大大简化酶切反应体系,方便进行双酶切或多酶切;(3) 针对不同酶在CutEZ™ Buffer中活性存在差异的问题,调整了不同酶的浓度,可以统一按照每20μl体系加入1μl酶量的用量进行酶切反应;(4) Alkaline Phosphatase、Antarctic Phosphatase、T4 DNA Ligase、T4 Polynucleotide Kinase、T4 PNK (3' phosphatase minus)等很多修饰酶等都100%兼容CutEZ™ Buffer (具体的兼容性表请参考https://www.beyotime.com/product/D6018.htm),使“酶切-连接”和“酶切-修饰-连接”等反应体系可以兼容,支持一管化反应;(5) 良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。
酶活性检测:最适反应温度下,在20μl反应体系中,1μl BeyoFast™ SpeI能够在15min内完全消化1μg pUC19-SpeI DNA。
长时间酶切检测:最适反应温度下,将1μl BeyoFast™ SpeI与1μg pUC19-SpeI DNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1μl BeyoFast™ SpeI消化底物,回收酶切产物,在22℃下使用适量T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测:最适反应温度下,将1μl BeyoFast™ SpeI与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
蓝白斑检测:将含有单一lacZα基因的载体以1μl BeyoFast™ SpeI消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于BeyoFast™系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。
BeyoFast™ SpeI快速内切酶基本信息如下:
识别序列 |
同裂酶 |
酶切温度 |
失活条件 |
甲基化干扰? |
5'-A^CTAGT-3'
3'-TGATC^A-5' |
AhlI, BcuI |
37℃ |
80℃ 20min |
有时有干扰 |
BeyoFast™ SpeI快速内切酶在不同反应缓冲液中的活性(缓冲液兼容性)如下:
Beyotime CutEZ™ Buffer |
Beyotime Easy-Load™ CutEZ™ Buffer |
Thermo FastDigest Buffer |
NEB CutSmart® Buffer |
Takara QuickCut™ Buffer |
100% |
100% |
100% |
100% |
100% |
注:活性数据来自碧云天BeyoFast™系列快速内切酶的标准反应体系下的检测。
BeyoFast™ SpeI快速内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:
Dam |
Dcm |
CpG |
EcoKI |
EcoBI |
无影响 |
无影响 |
无影响 |
序列可能重叠 剪切可能受影响 |
序列可能重叠 剪切可能受影响 |
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D5913-50μl |
BeyoFast™ SpeI |
50μl |
D6018-1ml |
10X CutEZ™ Buffer |
1ml |
D6020-1ml |
Easy-Load™ 10X CutEZ™ Buffer |
1ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20ºC保存,两年有效。
注意事项:
内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
不含核酸酶的超纯水推荐选购碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。