EcoRI
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产品编号 D6330
数量
¥ 236.00
产品包装:
2000U 5000U
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使用说明
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EcoRI内切酶为进口分装,基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
G^AATTC
CTTAA^G
1X EcoRI 1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37℃ 65℃ 
20min
有时有干扰
100 0-20 NR 100 100* NR 100

*,Star activity,当酶量5倍或以上过量时会产生星号活性,即产生非特异性酶活性。
NR,不推荐使用这种缓冲液,因为会产生很高的星号活性。
根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
酶储存液组成为:10mM potassium phosphate(pH7.4 at 25℃),300mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,0.2mg/ml BSA,0.15% Triton X-100 and 50% glycerol。
1X Buffer EcoRI组成为:50mM Tris-HCl(pH7.5 at 37℃),10mM MgCl2,100mM NaCl,0.02% Triton X-100,0.1mg/ml BSA。
1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,0.1mg/ml BSA。
酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
活性单位定义:在37℃,50微升反应体系中反应1小时,将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D6330-1 EcoRI(10U/μl) 5000U
D6330-2 10X Buffer EcoRI 1ml
D6010Y  10X Buffer Y 1ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项: 
内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:

待酶切DNA 不超过1μg
双蒸水或Milli-Q水 适量
10X Buffer EcoRI 2μl
EcoRI 0.5-1μl
总体积 20μl
37℃孵育1小时或更长时间

说明:请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。

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使用本产品的文献:
1. Li Y, Li Y, Wu Y, Lu F, Chen Y, Gao W.
Biosens Bioelectron 2017 Mar 15;89(Pt 1):585-91. (IF 10.257)
2. Li X, Guan Y, Li Y, Wu D, Liu L, Deng Q, Li X, Wang Z, Liu G.
GEN COMP ENDOCR 2016 Jan 15;226:82-7. (IF 2.426)
3. Wang T, Yang Z, Zhou N, Sun L, Lv Z, Wu C.
SCI REP-UK 2017 Jan 6;7:40247. (IF 3.998)
5. Sun W, Hu S, Hu J, Qiu J, Yang S, Hu B, Gan X, Liu H, Li L, Wang J
BIOSCIENCE REP. 39(3). pii: BSR20182152. (IF 2.942)