pET-N-His-PreScission-SUMO
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产品编号 D2918-1μg
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1μg 100μg
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pET-N-His-PreScission-SUMO是一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化,而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠,增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签,也可以通过SUMO Protease (P2312)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。

如果通过无缝克隆技术(Seamless Cloning Kit, 无缝克隆试剂盒)在SUMO标签酶切位点后插入目的蛋白ATG起始的序列,SUMO Protease酶切后,可以确保表达的目的蛋白氨基端(N端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始,不会增加或减少任何一个氨基酸,实现目的蛋白的完美正确表达。

本质粒为卡那霉素抗性。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。

本载体在N端His标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签,但在SUMO融合蛋白的N端还会保留两个额外的氨基酸GP。在用SUMO Protease酶切除去SUMO标签的时候,SUMO Protease识别的是SUMO蛋白的空间结构,通过无缝克隆的方式在CAGATTGGTGGA (对应氨基酸为QIGG)序列后插入目的蛋白的基因序列,在用SUMO Protease进行酶切的时候,其正好在QIGG后产生酶切,因此可以产生不带任何额外氨基酸的目的蛋白,而这是很多做蛋白结构和功能研究的研究人员所梦寐以求的。

可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。

pET-N-His-PreScission-SUMO质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
His tag coding sequence 5088-5105
PreScission recognition site sequence 5115-5138
SUMO tag coding sequence 5151-5441
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5442-5486
T7 Terminator 5554-5600

pET-N-His-PreScission-SUMO质粒(5625bp)的图谱如下:

pET-N-His-PreScission-SUMO的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO.pdf

pET-N-His-PreScission-SUMO中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-PreScission-SUMO once)包括:

AflII C`TTAA,G 5336 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041
AleI CACNN|NNGTG 5483 NotI GC`GGCC,GC 5473
AlwNI GAG,NNN`CTG 1729 NruI TCG|CGA 1286
AsiSI GCG,AT`CGC 943 PaeR7I C`TCGA,G 5481
BamHI G`GATC,C 5442 PciI A`CATG,T 2141
Bg1I GCCN,NNN`NGGC 3182 PflFI GACN`N,NGTC 2399
Bg1II A`GATC,T 5251 PpuMI RG`GWC,CY 3136
BmtI G,CTAG`C 5145 PshAI GACNN|NNGTC 3401
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2258 PsiI TTA|TAA 370
BssHII G`CGCG,C 3831 PspXI VC`TCGA,GB 5481
BssSI C`ACGA,G 1968 PvuI CG,AT`CG 943
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563 SacI G,AGCT`C 5460
BstEII G`GTNAC,C 4060 SalI G`TCGA,C 5448
BstZ17I GTA|TAC 2374 SapI GCTCTTCN`NNN, 2258
DraI TTT|AAA 5227 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
DraIII CAC,NNN`GTG 242 SmaI CCC|GGG 1069
EagI C`GGCC,G 5473 SphI G,CATG`C 4771
Eco53kI GAG|CTC 5462 StyI C`CWWG,G 5564
EcoRI G`AATT,C 5454 TspMI C`CCGG,G 1067
FspI TGC|GCA 3164 Tth111I GACN`N,NGTC 2399
HindIII A`AGCT,T 5466 XbaI T`CTAG,A 5034
HpaI GTT|AAC 3740 XhoI C`TCGA,G 5481
MluI A`CGCG,T 4242 XmaI C`CCGG,G 1067
NheI G`CTAG,C 5145

pET-N-His-PreScission-SUMO的全序列信息:pET-N-His-PreScission-SUMO全序列.txt

不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:

http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2918-1µg pET-N-His-PreScission-SUMO 1μg
D2918-100µg pET-N-His-PreScission-SUMO 100μg
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-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-N-His-PreScission-SUMO质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,或者也可以同无缝克隆技术在SUMO标签之后插入目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株进行表达纯化。
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