pTac-His-MBP-PreScission是碧云天自行研发的一种用于在目的蛋白N端同时融合表达His标签(His tag)和MBP标签(MBP tag)的双标签,并在标签与目的蛋白之前有PreScission酶切位点的原核表达质粒。MBP标签的融合表达有利于提高目的蛋白的表达量和蛋白稳定性,促进蛋白的可溶性和正确折叠;而His标签有利于通过镍柱进行目的蛋白MBP融合蛋白的分离纯化。使用本质粒,在镍柱纯化后获得的含有His和MBP双标签的目的蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签和MBP标签。
本质粒含有Tac启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和MBP双标签的目的蛋白。
本质粒在MBP标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签和MBP标签,在理想的情况下剩余目的蛋白的N端还会仅保留两个额外的氨基酸GP (Gly-Pro)。
可采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)或BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等纯化本质粒表达的目的蛋白融合蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。
本质粒为氨苄青霉素抗性。
pTac-His-MBP-PreScission质粒(6669bp)的图谱如下:
pTac-His-MBP-PreScission质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
LacI promoter | 3-80 |
LacI coding sequence | 81-1163 |
Tac promoter | 1406-1434 |
Lac operator | 1442-1458 |
His-tag coding sequence | 1531-1560 |
MBP-tag coding sequence | 1561-2658 |
PreScission Protease recognition site sequence | 2671-2694 |
Multiple cloning sites (EcoRI -XhoI) | 2696-2752 |
M13 forward primer (M13 fwd) | 2760-2776 |
Ampicillin resistance ORF | 3441-4301 |
f1 origin | 4401-4856 |
pBR322 origin | 4967-5555 |
pTac-His-MBP-PreScission的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5001 pTac-His-MBP-PreScission.pdf。
pTac-His-MBP-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pTac-His-MBP-PreScission)包括:
AatII | AflII | AgeI | AleI | AscI | AsiSI | AvrII |
BaeI | BbvCI | BmtI | BseRI | BspDI | BsrGI | BstBI |
Bsu36I | ClaI | CspCI | EagI | EcoNI | FseI | MfeI |
NheI | NotI | NruI | PacI | PaqCI | PmeI | PmlI |
PshAI | RsrII | SbfI | SexAI | SfiI | SgrAI | SnaBI |
SpeI | SphI | SrfI | StuI | XmnI | ZraI |
pTac-His-MBP-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pTac-His-MBP-PreScission)包括:
Acc65I | G`GTAC,C | 2739 | NdeI | CA`TA,TG | 1526 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 4227 | NgoMIV | G`CCGG,C | 4726 |
BamHI | G`GATC,C | 2733 | NsiI | A`TGCA,T | 1528 |
BglII | A`GATC,T | 1917 | PaeR7I | C`TCGA,G | 2751 |
BlpI | GC`TNA,GC | 2344 | PciI | A`CATG,T | 5611 |
BmgBI | CAC|GTC | 2100 | PflFI | GACN`N,NGTC | 5869 |
Bpu10I | CC`TNA,GC | 6506 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 10 |
BsiWI | C`GTAC,G | 1848 | PluTI | G,GCGC`C | 1070 |
BsmI | GAATG,CN` | 2176 | PspXI | VC`TCGA,GB | 2751 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 5728 | PstI | C,TGCA`G | 2719 |
BstEII | G`GTNAC,C | 612 | SacI | G,AGCT`C | 2664 |
BstZ17I | GTA|TAC | 5844 | SacII | CC,GC`GG | 2504 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 4622 | SalI | G`TCGA,C | 2707 |
Eco53kI | GAG|CTC | 2666 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 5728 |
EcoRI | G`AATT,C | 2695 | ScaI | AGT|ACT | 3747 |
EcoRV | GAT|ATC | 881 | SfoI | GGC|GCC | 1072 |
HindIII | A`AGCT,T | 2701 | SmaI | CCC|GGG | 2729 |
HpaI | GTT|AAC | 937 | StyI | C`CWWG,G | 2745 |
KasI | G`GCGC,C | 1070 | SwaI | ATTT|AAAT | 4400 |
KpnI | G,GTAC`C | 2739 | TspMI | C`CCGG,G | 2727 |
MluI | A`CGCG,T | 431 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 5869 |
MscI | TGG|CCA | 6644 | XbaI | T`CTAG,A | 2713 |
NaeI | GCC|GGC | 4728 | XhoI | C`TCGA,G | 2751 |
NarI | GG`CG,CC | 1071 | XmaI | C`CCGG,G | 2727 |
NcoI | C`CATG,G | 2745 |
pTac-His-MBP-PreScission的全序列信息:D5001 pTac-His-MBP-PreScission.txt。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D5001-1µg | pTac-His-MBP-PreScission | 1µg |
D5001-100µg | pTac-His-MBP-PreScission | 100µg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。