pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒)是碧云天自行研发的基于分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)用于检测NFκB转录活性水平的报告基因质粒。该报告基因质粒对pNFκB-luc (D2206)进行了改造,用蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原firefly luciferase进行了替换。pNFκB-GLuc-Dura在其多克隆位点插入了多个NFκB结合位点,可以高灵敏度地检测NFκB的激活水平。
Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时,无需裂解细胞,可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。
Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比,使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势:分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;发光强度高,是其它萤光素酶的1000倍;反应无须ATP,不受ATP影响;稳定性高,对温度、pH值等耐受性强。
与野生型Gaussia Luciferase相比,突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时,不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点,还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。
本质粒为氨苄青霉素抗性。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pISRE-TA-GLuc-Dura质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
NFκB response element (κB) | 26-65 |
GLuc (MT) reporter gene | 111-668 |
SV40 late poly (A) signal | 703-924 |
SV40 early enhancer/promoter | 972-1390 |
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region | 1415-2209 |
Synthetic poly (A) signal | 2234-2282 |
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region | 2349-2368 |
ColE1-derived plasmid replication origin | 2606 |
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 3397-4257 |
Synthetic poly (A) signal/transcriptional pause site | 4362-4515 |
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region | 4464-4483 |
pNFκB-GLuc-Dura质粒(4515bp)的图谱如下:
pNFκB-GLuc-Dura的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2204 pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒).pdf
pISRE-TA-GLuc-Dura中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pISRE-TA-GLuc-Dura)包括:
AatII | AclI | AflII | AscI | AseI | AsiSI | AvaI |
BmgBI | BsaAI | BsaI | BsiWI | BsoBI | BspEI | BsrGI |
BssHII | CspCI | DraIII | Eco53kI | EcoRI | EcoRV | MluI |
NdeI | PacI | PaeR7I | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI |
PspXI | RsrII | SacI | SbfI | SmaI | SnaBI | SrfI |
SwaI | TspMI | Tth111I | XcmI | XhoI | XmaI | ZraI |
pISRE-TA-GLuc-Dura中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pISRE-TA-GLuc-Dura)包括:
Acc65I | G`GTAC,C | 14 | BstZ17I | GTA|TAC | 3980 |
AflIII | A`CRYG,T | 2548 | Bsu36I | CC`TNA,GG | 3826 |
AgeI | A`CCGG,T | 2219 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 1889 |
AleI | CACNN|NNGTG | 3390 | Esp3I | CGTCTCN`NNNN, | 4312 |
ApaI | G,GGCC`C | 1485 | FspI | TGC|GCA | 973 |
BaeI | ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 1615 | HindIII | A`AGCT,T | 77 |
BamHI | G`GATC,C | 935 | HpaI | GTT|AAC | 833 |
BbvCI | CC`TCA,GC | 2100 | KpnI | G,GTAC`C | 19 |
BciVI | GTATCC(N)5,N` | 2750 | MfeI | C`AATT,G | 842 |
BcoDI | GTCTCN`NNNN, | 4312 | NheI | G`CTAG,C | 21 |
BglI | GCCN,NNN`NGGC | 9 | NotI | GC`GGCC,GC | 3368 |
BglII | A`GATC,T | 67 | NruI | TCG|CGA | 216 |
BmtI | G,CTAG`C | 20 | PciI | A`CATG,T | 2548 |
BpmI | CTGGAG(N)14,NN` | 289 | PsiI | TTA|TAA | 813 |
BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 103 | PspOM | G`GGCC,C | 1485 |
BsmAI | GTCTCN`NNNN, | 4312 | PvuII | CAG|CTG | 1045 |
BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 4312 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 5 |
BspHI | T`CATG,A | 3268 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 1631 |
BssSI | C`ACGA,G | 2721 | SpeI | A`CTAG,T | 4299 |
BstBI | TT`CG,AA | 2284 | StuI | AGG|CCT | 1368 |
BstEII | G`GTNAC,C | 339 | XmnI | GAANN|NNTTC | 372 |
BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 3388 |
pNFκB-GLuc-Dura质粒可使用的测序引物序列如下:
RVprimer3 (4464-4483): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pNFκB-GLuc-Dura的全序列信息:D2204 pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒).txt。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2204-1µg | pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒) | 1μg |
D2204-100 | pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒) | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。