Mito-Tracker Deep Red 633是一种新型的可以检测线粒体膜电位的深红荧光探针，能够特异性地染色活细胞中的线粒体。只需简单地与细胞孵育，即可通过被动运输穿过细胞膜并聚集在有生物活性的线粒体中，从而可以产生明亮的深红荧光。

Mito-Tracker Deep Red 633，分子量为586.23，最大激发波长为622nm，最大发射波长为648nm。Mito-Tracker Deep Red 633的激发光谱和发射光谱参考图1。

图1. Mito-Tracker Deep Red 633的激发光谱和发射光谱。

Mito-Tracker Deep Red 633可以用作线粒体特异性的荧光探针。和Rhodamine 123或JC-1相似，Mito-Tracker Deep Red 633对于线粒体的染色依赖于线粒体膜电位，因此该探针只能对活的细胞或组织进行染色，不 能对固定或通透后的细胞或组织进行染色。使用Mito-Tracker Deep Red 633染色活细胞线粒体的效果参考图2。

图2. Mito-Tracker Deep Red 633 (线粒体深红荧光探针)对于NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)线粒体的染色效果图。Mito-Tracker Deep Red 633染色的NRK-52E细胞其线粒体呈现洋红色(伪彩)荧光(图C)，洋红色荧光、细胞核蓝色荧光的叠加(merge)效果见图D。其中细胞核使用Hoechst 33342 (C1027)染色。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

由于Mito-Tracker Deep Red 633在线粒体内的积累依赖于线粒体的膜电位，因此可以作为线粒体膜电位的指示探针，并可以通过检测线粒体膜电位的变化来检测细胞凋亡。

按最终浓度为50-200nM计算，本产品每50µg包装可以配制约400-1700ml Mito-Tracker Deep Red 633染色液。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C1034-50μg	Mito-Tracker Deep Red 633	50μg
C1034-250μg	Mito-Tracker Deep Red 633	50µg×5
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃避光保存，至少一年有效。

注意事项：

Mito-Tracker Deep Red 633仅可用于活细胞的线粒体荧光标记，不能用于固定后细胞或组织，染色后也不能进行固定、通透等操作。

对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

需自备细胞培养板、盖玻片和载玻片等(可以向碧云天订购)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.Mito-Tracker Deep Red 633储存液的配制：
将一管50μg Mito-Tracker Deep Red 633粉末平衡至室温后，加入426μl的无水DMSO (anhydrous dimethylsulfoxide)，充分溶解后，得到浓度为0.2mM的Mito-Tracker Deep Red 633储存液。适当分装后避光保存于-20℃或更低温度。
2.Mito-Tracker Deep Red 633染色液的配制：
a.取一定量0.2mM Mito-Tracker Deep Red 633储存液按照1:4000-1:1000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，使最终浓度为50nM-200nM。例如取1µl 0.2mM的Mito-Tracker Deep Red 633加入到4ml或1ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，混匀后即为Mito-Tracker Deep Red 633染色液，终浓度分别为50nM或200nM。HBSS with Ca²⁺ & Mg²⁺ (C0219)可以向碧云天订购。
b.Mito-Tracker Deep Red 633染色液使用前需37℃预温育。
注：染色液中Mito-Tracker Deep Red 633的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为降低非特异性荧光染色，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的Mito-Tracker Deep Red 633。
3.贴壁细胞的线粒体染色：
a.当细胞在培养板或培养皿中培养至一定密度时，去除细胞培养液，加入步骤2中配制好的Mito-Tracker Deep Red 633染色液，37℃孵育15-30分钟。注：最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
b.去除Mito-Tracker Deep Red 633染色液，加入37℃预温育的新鲜细胞培养液。
c.用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜或荧光酶标仪进行观察或检测。此时可观察到线粒体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Mito-Tracker Deep Red 633染色液浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
注：Mito-Tracker Deep Red 633染色后易淬灭，请注意尽快进行拍照等荧光检测。也可以通过降低荧光显微镜等的激发光强度(即汞灯或LED光源)或适当降低Mito-Tracker Deep Red 633染色液浓度以延缓淬灭。
4.悬浮细胞的线粒体染色：
a.1000×g离心5分钟，弃上清，用37℃预热的Mito-Tracker Deep Red 633染色液轻轻重悬细胞，37℃孵育15-30分钟。
注：最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
b.孵育结束后，1000×g离心5分钟，弃上清，加入37℃预温育的新鲜细胞培养液重悬细胞。
c.用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行观察、分析或检测。
注：如果需要在载玻片或盖玻片上固定悬浮细胞，可先用碧云天的Poly-D-lysine/多聚赖氨酸(ST508)处理载玻片或盖玻片。
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产品编号	产品名称	包装
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