碧云天的PAK1-PBD Agarose (活性Cdc42/Rac结合琼脂糖凝胶)，也称PAK1-PBD琼脂糖凝胶，是一种将E. coli重组表达GST-tag融合人源PAK1的PBD结构域蛋白与谷胱甘肽琼脂糖凝胶(GST agarose)结合制备成的用于活性Cdc42和Rac结合(Active Cdc42/Rac Pull-down)的琼脂糖凝胶。本产品可用于结合、沉淀或拉下(Pull-down)激活状态(Active state)的Cdc42和Rac蛋白(包括Cdc42、Rac1、Rac2和Rac3)，即Active Cdc42/Rac Pull-down，从而在体外检测Cdc42和Rac蛋白激活状态与静息状态(Inactive state)的比例，还可用于组织或细胞裂解液中激活状态Cdc42和Rac蛋白的定量检测。
本产品能弥补缺少区分激活状态与静息状态Cdc42和Rac蛋白抗体的空白。本产品的工作原理如图1所示。
图1. 碧云天PAK1-PBD Agarose (活性Cdc42/Rac结合琼脂糖凝胶) (P2437)的工作原理图。
PAK1 (p21-activated kinase 1)是与Cdc42和Rac相互作用的一种下游效应蛋白(Effector protein)，在细胞骨架运动、细胞凋亡和细胞周期调节中起重要作用[1]。PAK1全长545个氨基酸，理论分子量为60kDa，含有3个结构域：激活状态Cdc42和Rac结合区(Active Cdc42/Rac-binding domain)，自抑制结构域(Auto-inhibitory domain, AID)和激酶结构域。PAK1的PBD结构域可以特异性的识别并结合激活状态的Cdc42和Rac蛋白，但不结合静息状态的Cdc42和Rac蛋白，因此PAK1-PBD重组蛋白可用于检测激活状态的Cdc42和Rac蛋白，在体内或体外也可以作为Cdc42和Rac蛋白的抑制剂使用[2]。
小GTP酶(Small GTPase)，也称Small G-proteins、Ras superfamily，是调节真核细胞信号转导、细胞增殖、细胞骨架重组和细胞内膜转运等过程的分子开关，小GTP酶通过结合和水解GTP，在“激活”和“静息”状态之间循环：在外界信号的刺激下，鸟苷酸交换因子(Guanine nucleotide-exchange factors, GEFs)辅助小GTP酶将结合的GDP置换为GTP，小GTP酶结合GTP进入激活状态(Active state)；激活状态的小GTP酶与下游效应蛋白(Effector protein)相互作用，从而刺激细胞发生相应的响应；GTP酶激活蛋白(GTPase-activating proteins, GAPs)催化小GTP酶结合的GTP水解为GDP，并释放自由磷酸盐(Free phosphate, Pi)，此时小GTP酶结合GDP进入静息状态(Inactive state)，鸟嘌呤核苷酸解离抑制蛋白(Guanine nucleotide dissociation inhibitors, GDIs)抑制小GTP酶释放GDP，直到GEFs受到刺激信号再次开启新一轮的循环(图2) [3-4]。
图2. 小GTP酶在“激活”和“静息”状态之间循环的原理图。
小GTP酶在人类中已发现超过150个家族成员，在果蝇(Drosophila)、秀丽隐杆线虫(C. elegans)、酿酒酵母(S. cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(S. pombe)、黏菌(Dictyostelium)和植物中也都发现了保守的同源物。小GTP酶根据结构和功能被分为5个家族分支：Ras家族、Rho家族、Ran家族、Rab家族和Arf家族。Rho家族本身又被分为8个亚家族：Rho亚家族、Rac亚家族、Cdc42亚家族、RhoH亚家族、RhoBTB亚家族、RhoUV亚家族、Rnd亚家族和RhoDF亚家族[5]。
Rho家族(Rho family of GTPases)参与调节细胞骨架组织、细胞极性、细胞周期进程和基因表达。目前有20个成员被发现，被分为8亚家族(见下表)，其中RhoA、Rac1和Cdc42研究的最为广泛[6]。
| Subfamily | Rho | Rac | Cdc42 | RhoH | RhoBTB | RhoUV | Rnd | RhoDF |
| Subfamily members | RhoA RhoB RhoC |
Rac1 Rac2 Rac3 RhoG |
Cdc42 RhoQ(TC10) RhoJ (TCL) |
RhoH | RhoBTB1 RhoBTB2 RhoBTB3 |
RhoU(Wrch) RhoV (Chp) |
Rnd1 Rnd2 Rnd3 (RhoE) |
RhoD RhoF (Rif) |
本产品Pull-down激活状态Cdc42和Rac1重组蛋白的效果图如下。实验采用GppNHp (鸟苷酰亚胺二磷酸锂)作为GTP替代物，GppNHp是一种不可水解的GTP类似物[7]。
图3. 碧云天PAK1-PBD Agarose (活性Cdc42/Rac结合琼脂糖凝胶) (P2437) Pull-down激活状态Cdc42和Rac1重组蛋白的效果图。在100μl反应体系中，加入终浓度为1mM GppNHp或GDP、2μg Recombinant Human Cdc42 (Flag-Tag) (P2451)或Recombinant Human Rac1 (Flag-Tag) (P2461)和25μl PAK1-PBD Agarose，置于旋转混合仪上，4ºC孵育2小时。后经离心，洗涤，加入25μl 1X SDS-PAGE上样缓冲液95ºC加热5分钟，BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 8-20%, 10孔) (P0471)电泳后进行Western检测，使用Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody (HRP Conjugated) (AF2855)孵育。可观察到本产品可以特异性地识别并结合激活状态的Cdc42 (Cdc42-GppNHp)和Rac1 (Rac1-GppNHp)，但不结合静息状态的Cdc42 (Cdc42-GDP)和Rac1 (Rac1-GDP)。Western印迹成像使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)完成。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
PAK1-PBD Agarose储存溶液: 50mM HEPES (pH7.4), 150mM NaCl, 5mM MgCl2, 0.5% Triton X-100, 1mM DTT, 10% glycerol.
Lysis Buffer: 50mM Tris (pH7.4), 1% Triton X-100, 0.5% Sodium Deoxycholate, 0.1% SDS, 500mM NaCl, 10mM MgCl2, 10μg/ml Leupeptin, 10μg/ml Aprotinin, 1mM PMSF.
Wash Buffer: 50mM Tris (pH7.4), 40mM NaCl, 30mM MgCl2.
本产品包装体积为1ml，凝胶沉淀体积占50%，共结合约0.2mg GST-PAK1-PBD重组蛋白，如果按照每个Pull-down反应使用20-50μl PAK1-PBD Agarose悬浊液来计算，本产品每1ml可用于20-50次反应。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2437-1ml | PAK1-PBD Agarose | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-80ºC保存，一年有效。4ºC保存，一个月内有效。
注意事项：到货后-20ºC或-80ºC冻存，冻融两次有效，避免反复冻融。第一次使用可适当分装。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AF0273 | Ras Rabbit Polyclonal Antibody | 50μl |
| AF2794 | CDC42 Rabbit Monoclonal Antibody | 50μl |
| AF1168 | Ras Rabbit Monoclonal Antibody | 50μl |
| AF7131 | HRas Rabbit Polyclonal Antibody | 50μl |
| AF7347 | KRAS Rabbit Polyclonal Antibody | 50μl |
| AG2391 | KRAS Rabbit Monoclonal Antibody | 50μl |
| AG2394 | KRAS Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
| AG3059 | Rac1 Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
| P2061-1ml | Rhotekin-RBD Agarose (活性Rho结合琼脂糖凝胶) | 1ml |
| P2063 | Recombinant Human RhoA (Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2065 | Active Rho Pull-down and Detection Kit | 50次/250次 |
| P2401 | Recombinant Human NRas (Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2403 | Recombinant Human HRas (His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2405 | Recombinant Human KRas4A (His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2407 | Recombinant Human KRas4B (His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2409 | Recombinant Human KRas4B (G12C, His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2411 | Recombinant Human KRas4B (G12D, His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2413 | Recombinant Human KRas4B (G12V, His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2415 | Recombinant Human KRas4B (G13D, His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2417 | Recombinant Human KRas4B (G13S, His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2419 | Recombinant Human KRas4B (Q61H, His-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2451 | Recombinant Human Cdc42 (Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2453 | Recombinant Human Cdc42 (Q61L, Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2455 | Recombinant Human Cdc42 (G12V, Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2461 | Recombinant Human Rac1 (Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2463 | Recombinant Human Rac1 (Q61L, Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2465 | Recombinant Human Rac1 (T17N, Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2469 | Recombinant Human Rac2 (Flag-Tag) | 10μg/100μg/1mg |
| P2431-1ml | Raf1-RBD Agarose (活性Ras结合琼脂糖凝胶) | 1ml |
| P2433 | Active Ras Pull-down and Detection Kit | 50次/250次 |
| P2437-1ml | PAK1-PBD Agarose (活性Cdc42/Rac结合琼脂糖凝胶) | 1ml |
| P2438 | Active Cdc42 Pull-down and Detection Kit | 50次/250次 |
| P2439 | Active Rac1 Pull-down and Detection Kit | 50次/250次 |
