碧云天生产的dNTP (mNGS grade, ≥99.8%)是采用超纯的dATP、dCTP、dGTP、dTTP和dUTP配制的单组分或混合溶液,专为mNGS测序、高度扩增的高通量测序、LAMP、多重扩增等对dNTP要求较高的PCR反应所设计,也适合用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。
dNTP,即Deoxy-ribonucleoside triphosphate,中文名为脱氧核糖核苷三磷酸,包括dATP (脱氧腺苷三磷酸)、dCTP (脱氧胞苷三磷酸)、dGTP (脱氧鸟苷三磷酸)、dTTP (脱氧胸苷三磷酸)、dUTP (脱氧尿苷三磷酸)等。其中,dATP、dCTP、dGTP和dTTP作为PCR反应的原料,在PCR体系中不可或缺,在PCR延伸环节中,基于碱基互补配对的原则与模板链结合,在聚合酶的作用下合成新的DNA链,其质量及浓度与PCR反应的扩增效率密切相关[1]。
dUTP最常见的用途是和可以识别并切割dUTP掺入位点的UDG酶配合使用,以减少PCR扩增产物对环境的污染而造成的PCR扩增的假阳性。此外,dUTP可用于聚合酶家族A成员如Taq酶等参与的PCR扩增,也可用于Bst DNA Polymerase参与的等温扩增。有些可以使用dATP、dTTP、dGTP、dCTP的酶,并不一定可以使用dUTP,具体需要参考该酶的产品说明书或自行测试一下。对于Taq酶催化的PCR反应,dUTP可以完全替代dTTP,也可以将dUTP与其它dNTP等浓度添加到扩增体系中。对于等温扩增用的Bst DNA Polymerase,dUTP不可完全替换dNTP中的dTTP,至多替换50% dTTP,否则将会显著抑制该等温扩增反应。
mNGS,即宏基因组二代测序技术,英文全称为Metagenomics Next-generation Sequencing,是一种借助二代测序平台快速测序以获得样品中的核酸序列,并与各个物种的基因组序列对比,进而获得样品中微生物的种类和比例的技术。mNGS颠覆传统诊断技术,通过全新测序技术检测新型或稀有微生物,是诊断新发疫情、呼吸道感染性疾病及神经系统感染性疾病等的重要工具[2-4]。宏基因组高通量测序时,需要区分不同微生物之间的细微差别,如果dNTP中杂质含量比较高(例如含有修饰的dNTP等),会导致测序结果的误读误判,干扰测序结果的准确性。
对于自行通过较高循环数扩增构建的高通量测序样品,也宜使用mNGS级别的dNTP,以避免PCR扩增过程中序列错误的累积,最终导致测序结果的偏差。
碧云天dNTP系列产品比较与选择请参考下表。
Product | dNTP (UltraPure, ≥99.8%) | dNTP (mNGS grade, ≥99.8%) |
Cat No. | D7420-D7430 | D7450-D7460 |
Purity | ≥99.8% | ≥99.8% |
pH | ~7.0 | ~7.0 |
Thermal Stability | Keep at -20ºC for 2 years, room temperature for 7 days. | Keep at -20ºC for 2 years, room temperature for 7 days. |
Freeze-thaw Stability | 30-50 freeze-thaw cycles | 30-50 freeze-thaw cycles |
DNase Contamination | No | No |
RNase Contamination | No | No |
Nickase Contamination | No | No |
Amplification Detection | Pass | Pass |
Content of Pyrophosphate | NA | Pass |
Phosphatase Activity | NA | Pass |
E.coli DNA Contamination | NA | Pass |
Human Genomic DNA Contamination | NA | Pass |
mNGS Nucleic Acid Background Detection | NA | Pass |
Recommended Application | Conventional reactions such as normal PCR, real-time PCR, RT-PCR, cDNA synthesis, DNA sequencing, DNA Labeling, et al. | Metagenomics NGS, high-amplified NGS, LAMP, Multiplex PCR, as well as other conventional PCR reactions. |
本dNTP (mNGS grade, ≥99.8%)系列产品为mNGS级别产品,是由超高纯度的dATP、dCTP、dGTP、dTTP和dUTP配制的单组分或混合溶液,溶液用超纯水配制,pH值约为7.0,单组分溶液(D7450/D7452/D7454/D7456/D7458)浓度均为100mM,即100mmol/L;混合溶液(D7460)中各组分浓度为25mM each,即dATP、dCTP、dGTP和dTTP的浓度均为25mmol/L。
本dNTP (mNGS grade, ≥99.8%)系列产品均不含DNase、RNase、Phosphatase、切口酶和蛋白酶,无E.coli DNA、人基因组DNA、mNGS背景核酸污染。
本dNTP (mNGS grade, ≥99.8%)系列产品经测试,可以直接用于mNGS测序、LAMP、多重扩增等,以及各种常规反应如PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7450-250μl | dATP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl |
D7450-1ml | dATP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 1ml |
D7452-250μl | dCTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl |
D7452-1ml | dCTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 1ml |
D7454-250μl | dGTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl |
D7454-1ml | dGTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 1ml |
D7456-250μl | dTTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl |
D7456-1ml | dTTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 1ml |
D7458-250μl | dUTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl |
D7458-1ml | dUTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 1ml |
D7460-250μl | dNTP Mixture (25mM each, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl |
D7460-1ml | dNTP Mixture (25mM each, mNGS grade, ≥99.8%) | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,两年有效。
注意事项:可以室温溶解,溶解后宜存放于冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即置于-20ºC保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
参考文献:1.Rappaport HP. Biochem J. 2004. 381(Pt 3):709-17.
2.Diao Z, Han D, Zhang R, Li J. J Adv Res. 2021. 38:201-212.
3.Gu W, Miller S, Chiu CY. Annu Rev Pathol. 2019. 14:319-338.
4.Mitchell SL, Simner PJ. Clin Lab Med. 2019. 39(3):405-418.
相关产品:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7351 | dATP (100mM) | 250μl |
D7353 | dCTP (100mM) | 250μl |
D7355 | dGTP (100mM) | 250μl |
D7357 | dTTP (100mM) | 250μl |
D7359-250μl/1ml | dUTP (100mM) | 250μl/1ml |
D7361-250μl/1ml | dITP (100mM) | 250μl/1ml |
D7366 | dNTP (4管套装, 100mM) | 4×50μl |
D7371 | dNTP Mixture (2.5mM each) | 1ml |
D7373 | dNTP Mixture (25mM each) | 250μl |
D7376-1ml/5ml | dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) | 1ml/5ml |
D7378-250μl/1ml/5ml | ATP (100mM, Nuclease free) | 250μl/1ml/5ml |
D7379-250μl/1ml/5ml | CTP (100mM, Nuclease free) | 250μl/1ml/5ml |
D7380-250μl/1ml/5ml | GTP (100mM, Nuclease free) | 250μl/1ml/5ml |
D7381-250μl/1ml/5ml | UTP (100mM, Nuclease free) | 250μl/1ml/5ml |
D7383-1ml | NTP set (100mM each, Nuclease free) | 4×250μl |
D7385-500μl/2ml | NTP Mix (10mM each, Nuclease free) | 500μl/2ml |
D7387-250μl/1ml | NTP Mix (25mM each, Nuclease free) | 250μl/1ml |
D7401-100μl/500μl/2ml | ddNTP Mix (10mM each, Suitable for MALDI-MS) | 100μl/500μl/2ml |
D7420-250μl/1ml | dATP (100mM, UltraPure, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7422-250μl/1ml | dCTP (100mM, UltraPure, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7424-250μl/1ml | dGTP (100mM, UltraPure, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7426-250μl/1ml | dTTP (100mM, UltraPure, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7428-250μl/1ml | dUTP (100mM, UltraPure, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7430-250μl/1ml | dNTP Mixture (25mM each, UltraPure, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7450-250μl/1ml | dATP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7452-250μl/1ml | dCTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7454-250μl/1ml | dGTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7456-250μl/1ml | dTTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7458-250μl/1ml | dUTP (100mM, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7460-250μl/1ml | dNTP Mixture (25mM each, mNGS grade, ≥99.8%) | 250μl/1ml |
D7480-100μl | 7-Deaza-dGTP (10mM, for GC-Rich PCR/Sequencing) | 100μl |