Lipo6000™转染试剂(试用装)
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产品编号 ： C0526FT
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0.1ml 0.5ml 1.5ml 5×1.5ml
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Lipo6000™转染试剂(Lipo6000™ Transfection Reagent)是一种非常高效的新型转染试剂，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以用于基因治疗。
Lipo6000™转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。贴壁细胞转染试剂的比较和选择请参考：http://www.beyotime.com/support/lipo.htm。
Lipo6000™转染试剂的使用方法和常用的Lipofectamine®2000 Reagent基本一致。并且经过对HEK293T、Hela、NIH3T3、HEK293FT、CHO等细胞的测试，转染效率也和Lipofectamine® 2000 Reagent相当甚至略高。
Lipo6000™转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。
Lipo6000™转染试剂转染过表达质粒后，通常24-48小时后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时；转染siRNA通常3-5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。
Lipo6000™转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。
Lipo6000™转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
Lipo6000™转染试剂与Lipofectamine® 2000 Reagent转染效果比较请参考图1-6。

图1. Lipo6000™转染试剂与Lipofectamine® 2000 Reagent转染效率的比较。仅转染试剂不同，其余条件一致。

图2. Lipo6000™转染试剂(A, B)与Lipofectamine® 2000 Reagent (C, D)用EGFP表达质粒转染HEK293T细胞后的实拍效果图。

图3. Lipo6000™转染试剂(A, B)与Lipofectamine® 2000 Reagent (C, D)用EGFP表达质粒转染Hela细胞后的实拍效果图。

图4. Lipo6000™转染试剂(A, B)与Lipofectamine® 2000 Reagent (C, D)用EGFP表达质粒转染NIH3T3细胞后的实拍效果图。

图5. Lipo6000™转染试剂(A, B)与Lipofectamine® 2000 Reagent (C, D)用EGFP表达质粒转染HEK293FT细胞后的实拍效果图。

图6. Lipo6000™转染试剂(A, B)与Lipofectamine® 2000 Reagent (C, D)用EGFP表达质粒转染CHO细胞后的实拍效果图。

对于六孔板，一个包装的C0526-0.5ml、C0526-1.5ml和C0526-7.5ml转染试剂大约可以分别转染100个、300个和1500个孔；对于24孔板，一个包装的C0526-0.5ml、C0526-1.5ml和C0526-7.5ml转染试剂大约可以分别转染500个、1500个和7500个孔。
包装清单：

产品编号 产品名称 包装
C0526FT Lipo6000™转染试剂(试用装) 0.1ml
C0526-0.5ml Lipo6000™转染试剂 0.5ml
C0526-1.5ml Lipo6000™转染试剂 1.5ml
C0526-7.5ml Lipo6000™转染试剂 5×1.5ml
－ 说明书 1份

保存条件：
4℃保存。长期不使用可以-20℃保存。
注意事项：
使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
转染前细胞必须处于良好的生长状态。
需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM®培养液或普通的DMEM培养液。
Lipo6000™转染试剂不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。
Lipo6000™转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. DNA转染：
a. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70-90%。
b. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
c. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM® Medium，然后于其中一管加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5μl Lipo6000™转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000™转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。

96-well 48-well 24-well 12-well 6-well 6cm dish 10cm dish
Lipo6000™转染试剂 0.2μl 0.5μl 1μl 2μl 5μl 10μl 30μl
无血清培养液或Opti- MEM® Medium 5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl
DNA 100ng 250ng 500ng 1μg 2.5μg 5μg 15μg
无血清培养液或Opti- MEM® Medium 5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl
稀释好的Lipo6000™转染试剂和DNA分别室温静止放置5分钟，随后两者混合并混匀再室温静止放置5分钟
每孔加入的混合物的量 10μl 25μl 50μl 100μl 250μl 500μl 1500μl
按照上述用量每孔均匀滴加Lipo6000™转染试剂和DNA的混合物，4-6小时后更换培养液或直接继续培养

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000™转染试剂的用量可以在3-12.5μl范围内进行适当调节，DNA用量建议固定在2.5μg，但也可以在1-4μg的范围内进行适当调节。通常质粒用量(μg)和Lipo6000™(μl)的用量比例为1:2或1:3比较常用，如有必要可以在1:0.5-1:5的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为1:2，此时Lipo6000™的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：质粒的浓度宜控制在0.5-5μg/μl范围内。
注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000™转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
d. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μl Lipo6000™转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
e. 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
f. 继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
2. siRNA转染：
a. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约30-50%。
b. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
c. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM® Medium，然后于其中一管加入100pmol siRNA，并用枪轻轻吹打混匀；而另一管加入5μl Lipo6000™转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有siRNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000™转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。

96-well 48-well 24-well 12-well 6-well 6cm dish 10cm dish
Lipo6000™转染试剂 0.2μl 0.5μl 1μl 2μl 5μl 10μl 30μl
无血清培养液或Opti- MEM® Medium 5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl
siRNA 4pmol 10pmol 20pmol 40pmol 100pmol 200pmol 600pmol
无血清培养液或Opti- MEM® Medium 5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl
稀释好的Lipo6000™转染试剂和siRNA分别室温静止放置5分钟，随后两者混合并混匀再室温静止放置5分钟
每孔加入的混合物的量 10μl 25μl 50μl 100μl 250μl 500μl 1500μl
按照上述用量每孔均匀滴加Lipo6000™转染试剂和siRNA的混合物，4-6小时后更换培养液或直接继续培养

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000™转染试剂的用量可以在2.5-7.5μl范围内进行适当调节，siRNA用量可以在50-250pmol的范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和Lipo6000™(μl)的用量比例为20:1，如有必要可以在10:1-40:1的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为20:1，此时Lipo6000™的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：siRNA的推荐浓度为20μM，常用的浓度范围为10-50μM。
注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000™转染试剂和siRNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
d. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μl Lipo6000™转染试剂-siRNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
e. 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
f. 继续培养3-5天后，即可用适当方式检测siRNA对于靶基因的下调效果，例如qPCR、Western、ELISA、报告基因等。

常见问题：
1. 转染效率低：
a. 优化质粒与Lipo6000™转染试剂比例，对于难转染的细胞，可适当加大质粒用量。
b. 应用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8，通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026) 进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
c. 贴壁细胞转染时状态良好，细胞密度达30-50%时才可进行转染，过稀可能影响转染效率，细胞密度达到50-90%时通常不会影响转染效率。不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。悬浮细胞 宜在对数生长期进行转染。
d. 需使用无抗生素和无血清培养液配制Lipo6000™转染试剂和质粒或siRNA等的混合物。
e. 转染后培养时间不足，而被误以为转染效率偏低。不同细胞转染后至显著表达所需要培养的时间通常为24-48小时。
f. 检查细胞是否有支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。
g. 如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。
h. 如果靶基因的敲减(knockdown)效果欠佳，应该考虑尝试设计不同的siRNA。
2. 细胞毒性较大：
a. 缩短转染时间，在转染后较短时间内更换新鲜的细胞培养液。
b. 减少质粒用量，按照比例减少Lipo6000™转染试剂。
c. 检查是否转染时细胞密度太低。
附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：

Multiple Well Plates or Dishes Single Well Only for Plates
Diameter (Bottom, mm)* Growth Area (cm2)* Average Cell Yield Total Well Volume (ml) Working Volume (ml) Recommended Volume (ml)
6 well 34.8 9.5 9.5 × 105 16.8 1.9-2.9 2
12 well 22.1 3.8 3.8 × 105 6.9 0.76-1.14 1
24 well 15.6 1.9 1.9 × 105 3.4 0.38-0.57 0.5
48 well 11.0 0.95 9.5 × 104 1.6 0.19-0.285 0.25
96 well 6.4 0.32 3.2 × 104 0.36 0.10-0.20 0.1
384 well 2.7 0.056 5.6 × 103 0.112 0.025-0.050 0.030
1536 well 1.63 × 1.63** 0.025 2.5 × 103 0.0125 0.005-0.010 0.010
3.5 cm dish 34 9 9.0 × 105 NA 1.8-2.7 2
6 cm dish 52 21 2.1 × 106 NA 4.2-6.3 5
10 cm dish 8.4 55 5.5 × 106 NA 11-16.5 12
15cm dish 14 152 1.5 × 107 NA 30.4-45.6 35
24.5cm dish 22.4 × 22.4** 500 5.0 × 107 NA 100-150 120

  *Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
  **These wells or dishes are square.

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C0526-1.5ml Lipo6000™转染试剂 1.5ml
C0526-7.5ml Lipo6000™转染试剂 5×1.5ml
C0533-0.5ml Lipo8000™转染试剂 0.5ml
C0533-1.5ml Lipo8000™转染试剂 1.5ml
C0533-7.5ml Lipo8000™转染试剂 5×1.5ml
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C0533-0.5ml
0.5ml
Lipo8000™转染试剂
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Lipo6000™转染试剂
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Lipo8000™转染试剂
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50次
Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (试用装)
C0526-1.5ml
1.5ml
Lipo6000™转染试剂
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Lipo293F™转染试剂
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Lipo6000™转染试剂
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LipoRNAi™转染试剂
C0065FT
50次
CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒(试用装)
FFP55FT
6片
Western转膜海绵垫(免滤纸)(试用装)