碧云天生产的BeyoPEI™转染试剂(BeyoPEI™ Transfection Reagent)是线性化聚乙烯亚胺(Polyethylenimine linear, PEI)优化改良后的升级产品，适用于把质粒、RNA和寡核苷酸高效瞬时转染到贴壁或悬浮细胞中。本转染试剂的用途和使用效果等，与Polysciences公司的PEI MAX®-Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)、Transporter 5® Transfection Reagent和Polyplus公司的jetPEI®、PEIpro®基本一致。

BeyoPEI™是一种水溶性高分子阳离子聚合物，能够与带有负电荷的质粒、RNA和寡核苷酸等结合形成复合物，这些复合物可以黏附到带有负电荷的细胞表面，通过胞吞(Endocytosis)作用进入细胞。随后，渗透膨胀等原因使囊泡(Endosome)释放质粒、RNA和寡核苷酸等进入细胞质(图1) [1]。

图1.碧云天BeyoPEI™转染试剂(C0541)高效转染细胞的原理图。

BeyoPEI™转染试剂转染效率高，细胞毒性低，重复性好，适用于多种细胞系包括HEK293、HEK293T、HEK293F、HEK293Expi、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa细胞等。

BeyoPEI™转染试剂兼容性好，细胞转染可允许血清和抗生素存在的情况下进行，无需Opti-MEM®或无血清培养液。

BeyoPEI™转染试剂为化学合成，因此不含动物源成分(Animal origin-free, AOF)。

BeyoPEI™转染试剂浓度为1mg/ml。按照DNA用量(μg)和BeyoPEI™转染试剂(μl)的比例为1:4使用，每毫升BeyoPEI™转染试剂可以转染250μg质粒。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C0541-1ml	BeyoPEI™转染试剂	1ml
C0541-10ml	BeyoPEI™转染试剂	10ml
C0541-100ml	BeyoPEI™转染试剂	100ml
－	说明书	1份

保存条件：

4ºC保存，两年有效。长期不使用可以-20ºC保存。

注意事项：

使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。

转染前细胞必须处于良好的生长状态。

虽然本转染试剂可允许血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染，但使用无血清或低浓度血清(如5%或以下)、无抗生素的培养液或Opti-MEM®，转染效率可能会更好。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.贴壁细胞的转染(以6孔板为例)。
a.接种细胞：
在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到6孔板内进行培养，使第二天转染时细胞密度能达到约70-80%。
b.准备DNA与BeyoPEI™复合物：
(a)DNA稀释液的配制：对于待转染的6孔板中每一个孔的细胞，取一个洁净无菌离心管，加入50μl细胞培养液和2μg DNA，并用移液器轻轻吹打混匀。
注：使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释，可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (ST341)。
(b)BeyoPEI™转染试剂稀释液的配制：对于待转染的6孔板中每一个孔的细胞，取一个洁净无菌离心管，加入40-48μl细胞培养液和2-10μl BeyoPEI™转染试剂，并用移液器轻轻吹打混匀。
注1：细胞培养液和BeyoPEI™转染试剂总体积为50μl。
注2：使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释，可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (ST341)。
(c)DNA与BeyoPEI™复合物的配制：将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到DNA稀释液中，轻轻涡旋混匀或者用移液器轻轻吹打混匀后，室温孵育10-20分钟。
注1：推荐DNA用量(μg)和BeyoPEI™转染试剂(μl)的比例为1:4，可在1:1-1:5之间进行调整，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化，摸索最佳的转染条件。
注2：建议采用转染试剂加入到DNA溶液的顺序，效果更佳。
(d)对于不同的细胞培养容器，DNA与BeyoPEI™转染试剂用量参考下表，最佳的转染效果须自行适当优化。

	96-well	48-well	24-well	12-well	6-well	6cm dish	10cm dish
细胞培养液	5μl	10μl	25μl	25μl	50μl	100μl	250μl
DNA	100ng	200ng	500ng	1μg	2μg	4μg	8μg
细胞培养液(需减去转染试剂体积)	5μl	10μl	25μl	25μl	50μl	100μl	250μl
BeyoPEI™转染试剂	0.1-0.5μl	0.2-1μl	0.5-2.5μl	1-5μl	2-10μl	4-20μl	8-40μl
将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到配制好的DNA稀释液中，室温孵育10-20分钟
每孔加入的复合物的量	10μl	20μl	50μl	50μl	100μl	200μl	500μl
按照上述用量每孔均匀滴加DNA与BeyoPEI™复合物，继续培养。

c.转染细胞：
(a)在DNA与BeyoPEI™复合物室温孵育的过程中，将培养有细胞的6孔板每孔换成2ml新鲜培养液。
(b)将100μl DNA与BeyoPEI™复合物均匀滴加到各孔内，随后轻轻混匀。
(c)在适宜的温度、湿度和CO2培养条件下，继续培养24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
2.悬浮细胞的转染(以10ml悬浮细胞为例)。
a.接种细胞：
转染前一天(18-24小时)根据细胞状态，接种合适的细胞密度(例如100万-150万cells/ml), 使第二天转染时细胞密度为200万-300万cells/ml。
b.准备DNA与BeyoPEI™复合物：
(a)DNA稀释液的配制：对于待转染的10ml悬浮细胞，取一个洁净无菌离心管，加入500µl细胞培养液和10μg DNA，并用移液器轻轻吹打混匀。
(b)BeyoPEI™转染试剂稀释液的配制：对于待转染的10ml悬浮细胞，取一个洁净无菌离心管，加入450-490μl细胞培养液和10-50μl BeyoPEI™转染试剂，并用移液器轻轻吹打混匀。
注：细胞培养液和BeyoPEI™转染试剂总体积为500μl。
(c)DNA与BeyoPEI™复合物的配制：将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到DNA稀释液中，轻轻涡旋混匀或者用移液器轻轻吹打混匀后，室温孵育10-20分钟。
注1：推荐DNA用量(μg)和BeyoPEI™转染试剂(μl)的比例为1:4，可在1:1-1:5之间进行调整，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化，摸索最佳的转染条件。
注2：建议采用转染试剂加入到DNA溶液的顺序，效果更佳。
(d)对于不同体积的细胞培养液，DNA与BeyoPEI™转染试剂用量请参考下表(仅供参考)。

转染体系体积	10ml	20ml	50ml	100ml	200ml	500ml
细胞培养液	0.5ml	1ml	2.5ml	5ml	10ml	25ml
DNA	10μg	20μg	50μg	100μg	200μg	500μg
细胞培养液	0.5ml	1ml	2.5ml	5ml	10ml	25ml
BeyoPEI™转染试剂	20μl	40μl	100μl	200μl	400μl	1ml
将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到配制好的DNA稀释液中，室温孵育10-20分钟 随后加入到培养的悬浮细胞中继续培养24-96小时，后续进行目的蛋白的检测和纯化。

c.转染细胞：
(a)将1ml DNA与BeyoPEI™复合物均匀滴加到10ml悬浮细胞中。
(b)在适宜的温度、湿度和CO2培养条件下，继续培养24-96小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：

Multiple Well Plates or Dishes	Single Well Only for Plates
	Diameter (Bottom, mm)*	Growth Area (cm2)*	Average Cell Yield	Total Well Volume (ml)	Working Volume (ml)	Recommended Volume (ml)
6 well	34.8	9.5	9.5 × 105	16.8	1.9-2.9	2
12 well	22.1	3.8	3.8 × 105	6.9	0.76-1.14	1
24 well	15.6	1.9	1.9 × 105	3.4	0.38-0.57	0.5
48 well	11.0	0.95	9.5 × 104	1.6	0.19-0.285	0.25
96 well	6.4	0.32	3.2 × 104	0.36	0.10-0.20	0.1
384 well	2.7	0.056	5.6 × 103	0.112	0.025-0.050	0.030
1536 well	1.63 × 1.63**	0.025	2.5 × 103	0.0125	0.005-0.010	0.010
3.5cm dish	34	9	9.0 × 105	NA	1.8-2.7	2
6cm dish	52	21	2.1 × 106	NA	4.2-6.3	5
10cm dish	8.4	55	5.5 × 106	NA	11-16.5	12
15cm dish	14	152	1.5 × 107	NA	30.4-45.6	35
24.5cm dish	22.4 × 22.4**	500	5.0 × 107	NA	100-150	120

*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.
参考文献：
1.Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ. Methods Enzymol. 2013. 529:227-40.
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