DEAE-Dextran细胞转染试剂盒
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产品编号 C0511
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¥ 391.00
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DEAE-Dextran细胞转染试剂盒(DEAE-Dextran Transfection Kit)是一种适合于把DNA转染到培养的真核细胞中的转染试剂盒。
关于DEAE-dextran的细胞转染方法早在1968年就有相关论文发表。DEAE-dextran可以促使DNA结合到细胞膜上,然后通过内吞作用(endocytosis)进入细胞。基于DEAE-dextran的细胞转染方法适用于瞬时转染(transient tranfection),但不适用于筛选稳定表达细胞株。DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。
目前基于DEAE-dextran的细胞转染方法有两种,一种方法为把DNA和DEAE-dextran混合后加入到细胞中,另一种方法为先用DEAE-dextran预处理细胞,然后再加入DNA。后一种方法是在前一种方法的基础上经过改进而产生的,对于一些细胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB细胞等,后一种方法可以增加细胞对DNA的摄入量,显著改善转染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解,从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件,如需获得更加理想的转染效率,必须自行摸索上述各种转染方法,找出优化的转染方法。
基于DEAE-dextran的细胞转染方法不仅可以转染贴壁细胞,也可以转染悬浮细胞。
转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
关于不同的细胞转染试剂的主要特点和差异方面的比较,以及如何选择适当的细胞转染试剂,可参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/transfection.htm
对于六孔板而言,一个包装的本转染试剂如使用常规方法可以转染2500个孔,如使用预处理方法可以转染200个孔。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
C0511-1 DEAE-Dextran溶液 20ml
C0511-2 10XPBS 20ml
C0511-3 氯喹溶液 3.5ml
说明书 1份

保存条件:
4℃保存,一年有效。
注意事项:
使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提,以保证获得较高的转染效率。
转染前细胞必须处于良好的生长状态。
试剂盒中各试剂均经过无菌处理,可以直接使用。在细胞转染过程中要严格注意无菌操作。
需自备用于洗涤的PBS或HBSS,以及用于稀释10XPBS的无菌水。
稀释或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用试剂盒中提供的10XPBS稀释。
氯喹溶液对人体有害,请注意适当防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. DEAE-Dextran常规转染方法
a. 细胞培养(以六孔板为例,其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作):
在转染前一天(20-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内,使第二天细胞能达到约40-70%满。
b. 混匀试剂盒中各试剂。取适量10XPBS,稀释为1XPBS。37℃预热自备洗涤液(PBS或HBSS)。
c. 参考下表,对于待转染的六孔板中一个孔的细胞,依次加入适量1XPBS,2μg DNA,以及8μl DEAE-Dextran溶液,使最终体积为170μl,用枪轻轻吹打混匀。
注意:不宜Vortex或离心。


One well for 6-well plate One well for 24-well plate 60mm dish 100mm dish
1XPBS (162-x)μl (40-x)μl (325-x)μl (540-x)μl
DNA xμl(2μg) xμl(0.5μg) xμl(4μg) xμl(7μg)
DEAE-Dextran溶液 8μl 2μl 17μl 28μl
总体积 170μl 42μl 342μl 568μl
均匀滴加到细胞表面,细胞培养箱内孵育30分钟,孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润
添加细胞培养液量 1.7ml 0.4ml 3.5ml 6ml
添加氯喹溶液量(选做) 17μl 4μl 35μl 60μl
细胞培养箱内培养不超过2.5小时或出现细胞毒性前更换培养液,继续培养48-72小时

注1:对于六孔板中一个孔的细胞,DNA用量可以在1-3μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件,因具体的细胞和培养条件而定,可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2:对于其它培养板或培养器皿,各种试剂的用量可以大致按照细胞培养面积按比例进行换算。
d. 去除细胞培养液,用PBS洗涤细胞2-3次,吸除残留液体。
e. 把170μl DEAE-Dextran-DNA混合物均匀滴加到细胞表面。
f. 细胞培养箱内孵育30分钟,孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润。
g. 参考上表,每孔缓慢加入1.7ml细胞培养液(约DEAE-Dextran-DNA混合物体积的10倍)。
h. 选做:参考上表,每孔加入17μl氯喹溶液。氯喹溶液可以和上一步骤中1.7ml细胞培养液预先混合后一起加入。 i. 细胞培养箱内培养不超过2.5小时或在出现明显的细胞毒性前,更换新鲜细胞培养液继续培养。
j. 通常转染后48-72小时可以检测转染效果。
2. DEAE-Dextran预处理转染方法
a. 细胞培养(以六孔板为例,其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作):
在转染前一天(20-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内,使第二天细胞能达到约40-70%满。
b. 混匀试剂盒中各试剂。取适量10XPBS,稀释为1XPBS。37℃预热自备洗涤液(PBS或HBSS)。
c. 参考下表,取适量试剂盒中提供的DEAE-Dextran溶液用1XPBS稀释10倍。对于六孔板的一个孔,取0.1ml DEAE-Dextran溶液,加入0.9ml 1XPBS,混匀。
d. 参考下表,取适量DNA用1XPBS稀释。对于六孔板的一个孔,取2μg DNA,加入适量1XPBS使最终体积为162μl。

One well for 6-well plate One well for 24-well plate 60mm dish 100mm dish
1XPBS 0.9ml 225μl 1.8ml 3.6ml
DEAE-Dextran溶液 0.1ml 25μl 0.2ml 0.4ml
稀释的DEAE-Dextran溶液 1ml 250μl 2ml 4ml
DNA xμl(2μg) xμl(0.5μg) xμl(4μg) xμl(7μg)
1XPBS (162-x)μl (40-x)μl (325-x)μl (540-x)μl
稀释的DNA 162μl 40μl 325μl 540μl
去除细胞培养液,用PBS或HBSS洗涤两次,每次3-5分钟
加入稀释的DEAE-Dextran溶液,室温孵育9分钟,洗涤两次
把稀释的DNA均匀滴加到细胞表面,孵育30分钟,孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润
添加细胞培养液量 1.7ml 0.4ml 3.5ml 6ml
添加氯喹溶液量(选做) 17μl 4μl 35μl 60μl
细胞培养箱内培养不超过2.5小时或出现细胞毒性前更换培养液,继续培养48-72小时

注1:对于六孔板中一个孔的细胞,DNA用量可以在1-3μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件,因具体的细胞和培养条件而定,可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2:对于其它培养板或培养器皿,各种试剂的用量可以大致按照细胞培养面积按比例进行换算。
e. 去除细胞培养液,用PBS或HBSS室温洗涤两次,每次3-5分钟。
f. 去除洗涤液,加入1ml经10倍稀释的DEAE-Dextran溶液,室温孵育9分钟。
g. 去除稀释的DEAE-Dextran溶液,用PBS或HBSS轻轻洗涤细胞两次。洗涤时要特别小心,经DEAE-Dextran预处理后贴壁细胞容易脱落。
h. 去除洗涤液,把步骤2d准备的162μl含有2μg DNA的1XPBS溶液,均匀滴加到细胞表面。
i. 细胞培养箱内孵育30分钟,孵育期间经常摇动培养板以保持所有细胞湿润。
j. 参考上表,每孔缓慢加入1.7ml细胞培养液(约稀释的DNA体积的10倍)。
k. 选做:参考上表,每孔加入17μl氯喹溶液。氯喹溶液可以和上一步骤中1.7ml细胞培养液预先混合后一起加入。加入氯喹后,
在4小时内或出现明显的细胞毒性前必须更换新鲜细胞培养液。氯喹的具体处理时间,对于不同的细胞需根据实验操作结果进行确认。
l. 通常转染后48-72小时可以检测转染效果。
常见问题:
1. 转染效率低或几乎没有转染。
很多时候是由于过多细胞死亡导致。可以考虑适当减少DEAE-Dextran溶液的用量,或适当缩短细胞暴露于DEAE-Dextran的时间;减少氯喹溶液的处理时间;一些对DEAE-Dextran特别敏感的细胞,在转染时可以适当增加细胞密度。优化DNA的用量通常可以获得较高的转染效率。另外,确保DNA的纯度,例如确保A260/A280>1.8,可以改善转染效率。
2. 转染效率不稳定。
如果有支原体污染通常会导致转染效率不稳定,此时只需更换没有污染的细胞就可以了。另外,细胞生长状态不佳,也容易导致转染效率显著下降。

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使用本产品的文献:
2. Zaibing Li,Jingyu Li,Liyan Liu,Wenyi Deng,Qingrong Liu,Ruofan Liu,Wen Zhang,Zaiqing He,Lei Fan,Yingzhuo Yang,Yun Duan,Huifang Hou,Xinyuan Wang,Zhimei Yang,Xiaoying Wang,Shanze Chen,Yi Wang,Ning Huang,Junli Chen
DRUG DES DEV THER. doi: 10.2147/DDDT.S214157. (IF 3.216)