还在为点突变载体构建假阳性率太高而头秃？
还在筛阳性克隆筛到怀疑人生？
今天带你认识碧云天最新出品的分子克隆界的"治假大师"——高活性DpnI内切酶！
碧云天生产的DpnI (High Activity)是一种由碧云天最新自主研发的一种通过基因工程突变改造而获得的具有更高活性的高品质内切酶。与野生型DpnI相比，DpnI (High Activity)能够在短时间内实现大量底物的快速、高效酶切，是用于质粒点突变的理想选择。
本产品提供两种不同酶活力浓度的DpnI (High Activity)：
低浓度的DpnI (High Activity) (10U/μl) (D6259S/M)，可满足大多数常规分子生物学实验需求；
高浓度的DpnI (High Activity) (100U/μl) (D6259L/XL)，在涉及大量底物高效酶切或缩短反应时间等方面具有显著优势，可根据实际需求自行选择适当的相应产品。
DpnI工作原理
DpnI是一种识别并切割甲基化位点的限制性内切酶，它可以高度特性的识别GA/TC位点，只有当识别位点上的A被甲基化时，才能进行切割，无甲基化修饰则不会被切割。
图1 .DpnI酶识别位点示意图
DpnI的应用
DpnI在科学研究中最广泛的应用为点突变实验中原始质粒模板的消化。实验室常用的大肠杆菌株通常是dam+菌株(含Dam甲基化酶)，从此类型菌株扩增并抽提的质粒的GATC序列中腺嘌呤N-6会带有甲基化修饰，可被DpnI酶识别并消化，而通过PCR扩增的新DNA产物无甲基化修饰，不会被DpnI酶消化，从而利用DpnI在点突变及相关实验中实现DNA模板的消除，提高阳性率。
图2.DpnI酶切流程示意图
产品效果
1、分别用从JM110菌株(dam-)和DH5α菌株(dam+)中提取的质粒400ng，在20μl酶切体系中，分别加入或不加入10U的DpnI (High Activity)，37℃酶切1小时，80℃孵育20分钟进行失活。
图3. DpnI (High Activity)酶活检测电泳图
结果：图3中可见从DH5α中提取得到的甲基化质粒可以被DpnI (High Activity)完全消化，而对于从JM110中提取得到的非甲基化质粒没有任何影响
2、取图3中酶切产物5μl分别转化DH5α感受态细胞然后涂板，培养过夜。
图4. DpnI (High Activity)酶切后产物转化克隆结果
结果：图4中可见从DH5α中提取得到的甲基化质粒被DpnI消化1小时后，不会产生任何克隆，进一步验证了DpnI (High Activity)在1小时内可以完全消化甲基化的质粒，并确保本产品可以用于质粒点突变。
产品信息
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
| D6259S | DpnI (High Activity) | 500U | |
| D6259M | DpnI (High Activity) | 2.5KU | |
| D6259L | DpnI (High Activity) | 10KU | |
| D6259XL | DpnI (High Activity) | 50KU |
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