碧云天生产的BeyoMag™ Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)，也称Azide化磁珠、Azide衍生化磁珠、Azide Derivatized Beads、叠氮磁珠、点击化学反应磁珠或点击化学磁珠，是一类由Azide衍生物与超顺磁性纳米级磁珠共价偶联而成，能在温和的条件下快速、高效、自发地偶联DBCO标记的(DBCO-tagged)的生物分子，也可以在一价铜离子催化下偶联Alkyne (炔烃)标记的(Alkyne-tagged)生物分子，以进行标记、追踪、纯化或分离，可以用于蛋白-蛋白、蛋白-生物分子、DNA-蛋白等的相互作用研究等，是医学和生命学研究中的重要工具。

Azide，中文名为叠氮化物，它与DBCO (二苯并氮杂环辛炔)是生物正交偶联时的配对联用化合物，可以在生物体系中发生环张力促进的叠氮-炔环加成(Strain-promoted azide-alkyne cycloaddition, SPAAC)反应，该反应条件温和，不需要任何催化剂，不影响正常的生物过程，在细胞或者复杂的细胞或组织裂解液中几乎没有脱靶标记[1, 2]。此外，叠氮化物与Alkyne (炔烃)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速。两种反应都是常见的点击化学(Click chemistry)反应，广泛应用于生物偶联和标记等。

BeyoMag™ Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)与DBCO-tagged/Alkyne-tagged蛋白、抗体、核酸等生物分子发生点击反应的基本原理如下。Azide磁珠在温和的缓冲体系中与DBCO-tagged生物分子自发地进行反应，形成稳定的三唑环；也可在一价铜离子的催化下与Alkyne-tagged生物分子发生共价反应，也形成稳定的三唑环。反应结束后，洗涤磁珠去除未反应的DBCO-tagged或Alkyne-tagged生物分子，即可用于蛋白、抗体或其它生物分子之间的相互作用的研究。本产品与DBCO-tagged或Alkyne-tagged生物分子发生点击反应流程参考图1。

图1. 碧云天BeyoMag™ Azide Magnetic Beads (Azide磁珠) (ST441)与DBCO-tagged生物分子(图A)、Alkyne-tagged生物分子(图B)发生点击反应的示意图。

本产品特异性强、配基密度高、结合量大。与国内外大多数的同类产品相比，本产品Azide配基密度高，约30-50nmol/mg beads，每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，对带有DBCO-tagged或Alkyne-tagged的生物分子具有极高的反应特异性，具体的最大结合量与DBCO-tagged或Alkyne-tagged生物分子的分子量相关。

本产品反应速度快，使用安全性高。本产品可以在温和条件下自发地与DBCO-tagged生物分子发生反应，也可以在一价铜离子的催化下与Alkyne-tagged生物分子快速反应，节省了操作时间。本产品与DBCO-tagged生物分子反应不需要催化剂(如铜催化剂)，因此对于细胞的毒性更小，也不会在体系中引入新的干扰因素。

本产品使用便捷。本产品储存在特殊保护液中，不含甘油，磁性分离，无需离心。与同类Azide Agarose产品相比，使用更方便。

本产品的主要指标请参考下表：

Characteristics	Description
Product content	10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer
Beads size	~500nm
Magnetization	Superparamagnetic
Coupled Ligand	Azide
Density of Azide	~30-50nmol/mg beads
Specificity	DBCO-tagged/Alkyne-tagged protein, antibody, DNA, RNA, etc
Application	Can be used for proteins, DNAs, RNAs or compounds immobilization by click chemistry reaction

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
ST441-1ml	BeyoMag™ Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)	1ml
ST441-5ml	BeyoMag™ Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)	5ml
—	说明书	1份

保存条件：

4ºC保存，一年有效。

注意事项：

由于DBCO等基团能与Azide磁珠自发发生点击反应，所以须确保体系里不存在有干扰的DBCO基团。如果有干扰的DBCO基团的物质，推荐使用碧云天脱盐柱(P2603/P2605/P2607/P2613/P2615/P2617)进行脱盐处理。

本产品在高浓度尿素里不稳定，使用体系须避免含有高浓度尿素。

本产品需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，充分震荡或超声使磁珠呈均匀的悬浮状态。

如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 样品的制备。
a. 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用碧云天生产的RIPA裂解液(强) (P0013B)、RIPA裂解液(中) (P0013C)或RIPA裂解液(弱) (P0013D)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH为6-8。
b. 具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4ºC存放，随后即可用于click反应。新鲜制备好的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作，但如果样品不能当天使用，也可以适当分装后-80ºC冻存。
c. 如果是自行标记的DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子体系，要确保完全去除游离的DBCO/Alkyne基团，否则会影响Azide磁珠与DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子的反应效率。推荐使用碧云天脱盐柱(P2603/P2605/P2607/P2613/P2615/ P2617)以去除游离的叠氮化物。
2. Azide磁珠准备。
由于Azide磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。
a. 用移液器轻轻吹打重悬Azide磁珠，按照DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子的摩尔数，计算所需要的Azide磁珠体积。取适量Azide磁珠至一洁净离心管(FTUB015)中，加入1X TBS (ST661/ST665)至最终体积为约0.5ml。注：通常Azide磁珠的用量应略高于DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子的摩尔数量，以确保DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子完全参与反应。如果初始Azide磁珠体积大于0.2ml，可以考虑先直接置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离10秒，去除上清，然后再加入1X TBS (ST661/ST665)至最终体积为约0.5ml。
b. 用移液器轻轻吹打重悬Azide磁珠。置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。
c. 按照初始体积的量，用Click Reaction Buffer重悬Azide磁珠。
注：推荐使用BeyoClick™点击反应溶液套装(P1226)进行后续的点击反应。
3. 点击反应。
a. 加入磁珠并孵育。准备好的Azide磁珠与样品混合，对于DBCO-tagged生物分子样品，在室温反应30-60分钟或者4ºC反应2小时；对于Alkyne-tagged生物分子样品，在一价铜离子催化下室温反应30分钟，反应过程推荐在翘板摇床(也称侧摆摇床)上进行。推荐使用BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673)。也可以使用BeyoVortex™调速式长轴旋转混匀仪(E6826)，推荐的速度为25rpm上下翻转。推荐使用BeyoClick™点击反应溶液套装(P1226)进行点击反应。
b. 磁分离。孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。
c. 洗涤。加入500μl的1X TBS (ST661/ST665)，用移液器轻轻吹打重悬Azide磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复洗涤三次。洗涤完成后，DBCO-tagged/Alkyne-tagged生物分子已经通过点击反应共价偶联到磁珠上，并可以进行下游实验。
参考文献：
1. Matzinger M, Kandioller W, Doppler P, Heiss EH, Mechtler K. J Proteome Res. 2020. 19(5):2071-2079.
2. Jewett JC, Sletten EM, Bertozzi CR. J Am Chem Soc. 2010. 132(11):3688-90.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
P1226	BeyoClick™点击反应溶液套装	50次/200次
ST433	BeyoMag™ DBCO Magnetic Beads (DBCO磁珠)	1ml/5ml
ST441	BeyoMag™ Azide Magnetic Beads (Azide磁珠)	1ml/5ml
ST443	BeyoMag™ Alkyne Magnetic Beads (Alkyne磁珠)	1ml/5ml
E6673	BeyoShaker™数字式翘板摇床	1套
E6800	BeyoVortex™基础型旋转混匀仪	1套
E6826	BeyoVortex™调速式长轴旋转混匀仪	1套