碧云天的BeyoDesalt™ 6FF Midi脱盐柱，即BeyoDesalt™ 6FF Midi Desalting Column，是一种简单、快速、高效地使用Beyorose™ 6FF基质分离大分子量物质与小分子量物质的预包装即用型层析柱，俗称脱盐柱，主要用于去除病毒颗粒、大分子量蛋白质、超螺旋DNA、多糖等样品的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。本脱盐柱使用的填料为Beyorose™ 6FF，填料粒径为45-165μm，可分离分子量>400kDa的蛋白质或其它大分子样品，柱床体积为5.3ml，建议上样量为0.5-1.5ml，本产品适用于重力法或离心法。

本产品采用的是Beyorose™ 6FF基质，该基质是高度交联的6%琼脂糖(Agarose)，与Sepharose 6 Fast Flow的性能基本一致。本产品用于分离样品时，体积较大的大分子不能进入基质网状筛孔而被阻隔在基质凝胶之外，随着流动溶液沿着基质凝胶颗粒间的缝隙移动，下移速度较快，先被洗脱出柱；体积较小的分子或离子可以进入基质网状筛孔从而进入凝胶内部，随着流动溶液在凝胶颗粒的网孔内移动，因此小分子量物质在基质内停留时间更长，下移速度较慢，后被洗脱出柱，这种分离纯化方式被称为尺寸排阻层析(Size-exclusion chromatography, SEC)，也常被叫做分子筛层析(Molecular sieve chromatography, MSC)或凝胶过滤层析(Gel filtration chromatography, GFC) [1-2] (图1)。

图1. 碧云天BeyoDesalt™脱盐柱的工作原理图。

本产品的基本信息如下表:

基质(Matrix)	Beyorose™ 6FF
填料粒径(Bead size)	45-165μm
分离范围(Exclusion limit)	Mw > 400kDa (Mw: molecular weight, also mentioned as Mr: relative molecular mass)
建议上样量(Recommended sample volume)	0.5-1.5ml
样品稀释倍数(Sample dilution)	1.3-3
柱床体积(Column volume, CV)	5.3ml
柱床尺寸(Column dimensions)	1.3×6.6cm
柱床内径(Column i.d.)	12.7mm
化学稳定性(Chemical stability)	All commonly used buffers; Avoid oxidizing agents
pH稳定性(pH stability)	pH2-13
使用方法(Operation)	Gravity or Spin
保存条件(Storage)	20% ethanol at 4-30ºC

碧云天提供多种类型的脱盐柱，不同类型脱盐柱的比较和选择请参见下表：

Product Name		BeyoDesalt™
Classification		Multi Spin (96 well)	Spin	Mini	Midi	Max	Superfine	Fine
Diagram
Matrix		Beyodex™ G-25 M Beyorose™ 6FF	G-25 M 6FF	G-10 G-25 M 6FF	G-10 G-25 M 6FF	G-25 M 6FF	G-25 SF 6FF	G-25 F 6FF
Resolution		★★★					★★★★★	★★★★
Spin***	Sample volume	70-130μl		0.2-0.5ml	0.75-1.5ml	1.75-2.5ml	Not Applicable
	Elution volume	70-130μl		0.2-0.5ml	0.75-1.5ml	1.75-2.5ml
	Dilution factor	1
Gravity	Sample volume	Not Applicable		0.1-0.3ml* 0.1-0.5ml**	0.4-1ml* 0.5-1.5ml**	1-2.5ml
	Elution volume			1ml	2ml	3.5ml
	Dilution factor			2-10	1.3-3	1.5-3.5
Syringe	Sample volume	Not Applicable		Not Applicable			0.25-1.5ml	Not Applicable
	Elution volume						1-2ml
	Dilution factor						1.3-4
AKTA System	Sample volume	Not Applicable		Not Applicable			0.25-1.5ml	2-20ml
	Elution volume						1-2ml	10-30ml
	Dilution factor						1.3-4	1.5-5
Number of columns used in series		Not Applicable					1-5 columns

* Beyodex™ G-10; ** Beyodex™ G-25, Beyorose™ 6FF; *** Beyodex™ G-10 Not Applicable for Spin protocol.

碧云天提供3种基质类型的脱盐柱，不同类型基质截留分子量(Molecular Weight Cut-off, MWCO)的比较和选择请参见下表：

Matrix	MCWO	Catalog Number
		Multi Spin	Spin	Mini	Midi	Max	Superfine	Fine
Beyodex™ G-10	>0.7kDa	/	/	P2605	P2607	/	/	/
Beyodex™ G-25	>5kDa	P2611	P2613	P2615	P2617	P2619	P2621	P2623
Beyorose™ 6FF	>400kDa	P2625	P2627	P2629	P2631	P2633	P2635	P2637

碧云天BeyoDesalt™ 6FF系列脱盐柱7种型号的比较和选择请参见下表：

Serial Name	BeyoDesalt™ 6FF
Classification	Multi Spin (96 well)	Spin	Mini	Midi	Max	Superfine	Fine
Cat. No.	P2625	P2627	P2629	P2631	P2633	P2635	P2637
Beads size	45-165μm
Volume of resin	500μl	500μl	2.1ml	5.3ml	8.3ml	5ml	70ml
Packed bed dimensions	/	/	0.9×6.3cm	1.3×6.6cm	1.6×8.3cm	1.6×2.5cm	2.6×18cm
Column volume	800μl	800μl	5ml	8.5ml	13.5ml	5ml	70ml
Maximum sample volume	130μl	130μl	0.5ml	1.5ml	2.5ml	1.5ml	20ml
Recovery	70-90%	70-90%	70-95%	70-95%	70-95%	95%	95%
Desalting capacity	>85%		>90%			>95%
Plate/column material	polypropylene
Storage solution	20% ethanol
Storage temperature	4-30ºC

本脱盐柱显著优于传统半透膜透析方法。①分离速度快、节省时间：脱盐柱可以对样品进行快速分离，处理一个样品通常只需要5分钟，而半透膜透析至少需要6小时；②适合小体积操作、样品回收率高：脱盐柱可以有效处理0.5-1.5ml的小体积样品，回收率通常>90%，但是半透膜透析后释放样品时会有部分样品粘附在半透膜上，无法完全回收，因此不适合小体积样品；③节省溶液：半透膜透析时需要大量的缓冲液，但是脱盐柱仅需20ml缓冲液即可完成实验。

本脱盐柱有重力法和离心法两种使用方式，可根据实验需求进行选择(图2)。①重力法：样品利用重力流经脱盐柱，操作简单，设备要求低，样品回收率比离心法稍高，但样品会发生约1.4倍的稀释；②离心法：样品利用离心力流经脱盐柱，样品回收率比重力法稍低，但样品不会被稀释。

图2. 碧云天BeyoDesalt™ 6FF Midi脱盐柱(P2631)的重力法和离心法两种使用方法示意图。重力法中的脱盐柱上端可通过Syringe Connector (针筒型层析柱接头) (FC007)与30ml注射器空柱管(FS830)连接用于柱平衡(图B)，或下端可通过Female Luer Connector (双母鲁尔接头) (FC009)与Luer Syringe (鲁尔接口注射器) (FS701-FS750)组装后用于柱平衡(图C)，或在下端连接20ml鲁尔接口注射器，上端连接20ml注射器空柱管用于柱平衡(图D)。离心法中脱盐柱需要与6ml层析柱转50ml离心管适配器(FSA011)及50ml收集管(FTUB550)组装后使用(图E)。注射器法中脱盐柱上端需要Syringe Connector (针筒型层析柱接头) (FC007)与20ml注射器空柱管(FS820)连接，下端需要Female Luer Connector (双母鲁尔接头) (FC009)与Luer Syringe (鲁尔接口注射器) (FS701-FS750)组装后使用(图C)。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
P2631-5pcs	BeyoDesalt™ 6FF Midi脱盐柱	5个
P2631-20pcs	BeyoDesalt™ 6FF Midi脱盐柱	20个
-	说明书	1份

保存条件：

4ºC保存，两年有效。室温保存，至少一个月有效。

注意事项：

为防止交叉污染，本产品建议一次性使用。

脱盐柱反复使用，可能会导致样品回收率降低。

请勿冷冻保存本产品，冻结会导致脱盐柱的基质碎裂。

保存和纯化过程中应始终保持基质湿润，避免气泡进入脱盐柱中。

建议在缓冲液中加入25mM NaCl，以防止潜在的离子间相互作用。如不能使用NaCl，可以尝试加入100mM乙酸铵(NH₄Ac)或100mM碳酸氢铵(NH₄HCO₃)挥发性缓冲液。

当缓冲液中盐浓度>1M时，疏水性物质在柱子内的停留时间可能会延长或与基质结合。

当缓冲液中含有>1.5M (NH₄)₂SO₄时，脱盐柱基质可能会发生收缩。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 样品的准备。
样品上样前需通过离心或0.45μm滤膜去除不溶物。
注1：在常规缓冲液中，高至70mg/ml的蛋白样品或5mg/ml的葡聚糖高分子聚合物，不会影响分离效果。
注2：在样品粘度不高的情况下，样品浓度不会影响分离效果，样品浓度越高则回收率越高，低浓度样品回收率可能会降低。
注3：样品回收率与样品种类直接相关，通常情况下70%-90%的样品回收率属于正常现象。
注4：平衡使用的缓冲液即为样品存储缓冲液。
2. 重力法。
a. 脱盐柱的准备：首先移除脱盐柱的下堵头，然后将脱盐柱的下端浸没到柱内的相应缓冲液中，再移除脱盐柱的上堵头，然后可从上口倾斜倒出脱盐柱内的保存溶液。
注1：如果不先移除脱盐柱的下堵头，脱盐柱的上堵头会因为负压而难以取出。
注2：如果移除脱盐柱的上堵头时，脱盐柱的下端没有浸没到缓冲液中，负压气泡可能会进入脱盐柱中。
b. 使用重力柱支架(适合6ml层析柱，16孔) (FRK048)或铁架台固定脱盐柱，并将其置于烧杯或试管上方。
c. 脱盐柱的预平衡：重力平衡法或注射器平衡法，选择一种方法即可。
(a)重力平衡法：向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管，每次约2.5ml，待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后，再次倒入缓冲液充满柱管，重复此步骤5-6次。
注：可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector) (FC007)将20ml注射器空柱管(FS820)连接到脱盐柱上方(图3B)，增加溶液储量，一次性倒入15ml缓冲液以平衡脱盐柱。
(b)注射器平衡法：
脱盐柱下端通过Female Luer Connector (双母鲁尔接头) (FC009)与Luer Syringe (鲁尔接口注射器) (FS730)连接(图3C)。向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管，每次约2.5ml，然后拉动鲁尔接口注射器推杆使缓冲液流穿脱盐柱，待缓冲液几乎全部进入脱盐柱时，再次倒入缓冲液充满柱管，然后拉动鲁尔接口注射器推杆使缓冲液流穿脱盐柱，重复此步骤5-6次。
注1：可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector) (FC007)将20ml注射器空柱管(FS820)连接到脱盐柱上方(图3D)，增加溶液储量，一次性倒入15ml缓冲液以平衡脱盐柱。
注2：拉动鲁尔接口注射器推杆的速度控制在1-5ml/分钟为宜。
注3：拉动鲁尔接口注射器推杆过程中应始终保持基质湿润，避免空气进入脱盐柱中。
d. 上样：待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后，移液器吸头贴近脱盐柱上筛板中央加入1.5ml样品，如果上样体积不足1.5ml，待样品全部进入脱盐柱后，需要贴近脱盐柱上筛板中央补入“(1.5 - X) ml”的缓冲液，此时的流穿液无需收集。
注1：X为上样体积，如果上样体积X为1ml，那么需要补入“1.5 – 1 = 0.5 ml”的缓冲液。
注2：样品注入方式会直接影响样品回收率。上样时需要将移液器吸头伸入脱盐柱空管中，在上筛板的中央加入样品。
e. 洗脱：待柱管中的样品或补齐的缓冲液全部进入脱盐柱后，将1.5ml收集管置于脱盐柱下方，先后向脱盐柱中加入约4ml缓冲液，此时的流穿液需要收集，每管收集0.25ml。
3. 离心法。
a. 脱盐柱的准备：首先移除脱盐柱的下堵头，然后将脱盐柱的下端浸没到柱内的相应缓冲液中，再移除脱盐柱的上堵头，然后可从上口倾斜倒出脱盐柱内的保存溶液。
注1：如果不先移除脱盐柱的下堵头，脱盐柱的上堵头会因为负压而难以取出。
注2：如果移除脱盐柱的上堵头时，脱盐柱的下端没有浸没到缓冲液中，负压气泡可能会进入脱盐柱中。
b. 使用重力柱支架(适合6ml层析柱，16孔) (FRK048)或铁架台固定脱盐柱，并将其置于烧杯或试管上方。
c. 脱盐柱的预平衡：向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管，每次约2.5ml，待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后，再次倒入缓冲液充满柱管，重复此步骤4-5次。
注：可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector) (FC007)将20ml注射器空柱管(FS820)连接到脱盐柱上方(参考图B/D)，增加溶液储量，一次性倒入15ml缓冲液以平衡脱盐柱。
d. 用镊子(FS019)取出上垫片，再次倒入缓冲液充满柱管，将脱盐柱通过6ml层析柱转50ml离心管适配器(FSA011)放入50ml收集管(FTUB550)中，无需盖盖子，1,000×g离心2分钟，倒出离心管内的液体。
注：使用非水平转头的情况下，由于离心会使树脂压实形成一个向上的斜面，该斜面的方向宜在后续步骤中保持，所以在脱盐柱外壳上的斜面向上位置做标记，在随后的离心步骤中需要调整好离心管的放入方向，确保离心后斜面的方向和位置不会改变。
e. 上样：移液器吸头贴近树脂的中心位置缓慢加入0.5-1.5ml样品，使脱盐柱中的树脂吸入样品。
注1：样品体积不能超过脱盐柱规定的样品量体积，否则会降低样品回收率，并且会导致脱盐不充分。
注2：样品注入方式会直接影响样品回收率，需要将移液器吸头伸入脱盐柱空管中，在贴近树脂的中心位置加入样品。
f. 洗脱：将脱盐柱通过6ml层析柱转50ml离心管适配器(FSA011)放入新的50ml收集管(FTUB550)中，无需盖盖子，1,000×g离心2分钟，此时的流穿液需要收集。
4. 检测。
可通过的A280nm紫外吸收值(如NanoDrop)、Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)、SDS-PAGE凝胶电泳配合考马斯亮蓝染色液(P0017F)等方法检测样品所在的收集管。
5. BeyoDesalt™ 6FF Midi脱盐柱的清洗和保存。
为防止交叉污染，本脱盐柱建议一次性使用。如需重复使用脱盐柱，实验完成后，先用25ml或更多H2O，接着用25ml 20%乙醇清洗脱盐柱，安装并拧紧脱盐柱的上堵头和下堵头，将脱盐柱置于4ºC或室温保存。
参考文献：
1. Barth HG, Boyes BE, Jackson C. Anal Chem. 1994. 66(12):595R-620R.
2. Hagel L, Janson J C. Journal of Chromatography Library. Elsevier. 1992. 51: A267-A307.
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产品编号	产品名称	包装
P2605-5pcs	BeyoDesalt™ G-10 Mini脱盐柱	5个
P2605-20pcs	BeyoDesalt™ G-10 Mini脱盐柱	20个
P2607-5pcs	BeyoDesalt™ G-10 Midi脱盐柱	5个
P2607-20pcs	BeyoDesalt™ G-10 Midi脱盐柱	20个
P2611-1pc	BeyoDesalt™ G-25 Multi Spin脱盐柱	1个
P2611-5pcs	BeyoDesalt™ G-25 Multi Spin脱盐柱	5个
P2613-20pcs	BeyoDesalt™ G-25 Spin脱盐柱	20套
P2613-100pcs	BeyoDesalt™ G-25 Spin脱盐柱	100套
P2615-5pcs	BeyoDesalt™ G-25 Mini脱盐柱	5个
P2615-20pcs	BeyoDesalt™ G-25 Mini脱盐柱	20个
P2617-5pcs	BeyoDesalt™ G-25 Midi脱盐柱	5个
P2617-20pcs	BeyoDesalt™ G-25 Midi脱盐柱	20个
P2619-5pcs	BeyoDesalt™ G-25 Max脱盐柱	5个
P2619-20pcs	BeyoDesalt™ G-25 Max脱盐柱	20个
P2621-1pc	BeyoDesalt™ G-25脱盐柱(Superfine, 5ml)	1个
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P2629-5pcs	BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱	5个
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