碧云天的Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶),由高质量的肝素(Heparin)与高度交联的6%琼脂糖共价偶联而成,也称Heparin亲和填料或肝素亲和填料,可快速、高效地分离对肝素具有亲和力的生物分子,包括抗凝血酶Ⅲ、凝血酶、凝血因子和其它血浆蛋白,也可用于纯化脂蛋白、核酸酶、类固醇受体、细胞生长因子、干扰素、核酸结合蛋白、病毒等生物大分子。肝素琼脂糖凝胶广泛应用于不同蛋白质及病毒等的纯化,且可以通过改变缓冲液中的盐浓度即可实现目的蛋白的结合、洗涤和洗脱。本产品也可以用于去除残留的核酸酶,包括去除残留的RNase和DNase。
肝素(Heparin),其钠盐的形式即肝素钠(Heparin sodium)比较常见,是一种高度硫酸化的线性多糖,主要由1,4糖苷键连接吡喃葡萄糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、D-葡萄糖醛酸)和2-氨基-2-脱氧吡喃葡萄糖(氨基葡萄糖)残基重复单元组成,平均分子量为15kDa左右[1]。肝素主要由肥大细胞和嗜碱性粒细胞等产生,在于肝、肺、血管壁、肠黏膜、肥大细胞等中含量较高,其与肝素结合蛋白的相互作用调控着许多重要的生理过程,例如调节补体级联活动、细胞分化、生长、迁移、炎症和病原体感染等[2-5]。肝素与大多数蛋白质的相互作用主要是依赖于肝素中高负电荷密度的磺酸基和羧基可以与蛋白中正电荷密度基团的碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸)形成离子键,因此具有强亲和力;部分蛋白质与肝素结合是由于肝素结构域可以与极性氨基酸(天冬酰胺和谷氨酰胺)形成氢键,例如,脑钠肽(Brain natriuretic peptide, BNP)可以与肝素相互作用主要是依赖于氢键;此外,肝素中L-艾杜糖醛酸具有灵活的构象,可以形成特殊的结构域特异性地结合蛋白,例如,形成独特的类似核酸空间结构域可特异性结合核酸酶或形成独特的类似病毒受体结构域特异性结合病毒。
基于肝素的抗凝作用的生物学活性、因子类蛋白的亲和力、类核酸空间结构域和类病毒受体结构域等特点,肝素琼脂糖凝胶在蛋白纯化领域内应用非常广泛,可以特异性地纯化抗凝血酶Ⅲ、凝血酶、凝血因子IX (FIX)、凝血因子XI (FXI)、载脂蛋白、核酸结合蛋白等;用于纯化转录因子、核酸酶、DNA聚合酶和内切酶等;用于病毒疫苗、病毒载体等的分离和纯化;还可用于纯化细胞生长因子、干扰素等生物大分子。以纯化抗凝血酶Ⅲ (Antithrombin Ⅲ)为例,本产品的实验流程参考图1。本产品也可以装柱后进行柱纯化。
图1.碧云天Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) (P2165)的实验流程图。
本产品结合量容量高。与同类的很多产品相比,本产品具有非常高的结合容量,对复杂样品中抗凝血酶III、凝血因子和生长因子等生物分子可以快速进行分离纯化。本产品中Heparin Agarose为50%的凝胶悬浊液,每毫升Heparin Agarose沉淀中偶联4mg Heparin,可结合约≥2mg抗凝血酶III,可高效地进行免疫沉淀等实验。本产品用于细胞纤粘蛋白(Fibronectin)的结合效果参考图2。
图2.碧云天Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) (P2165)用于细胞纤粘蛋白(Fibronectin)的结合效果图。泳道1为Input,即为Fibronectin;泳道2为本产品结合Fibronectin后的洗脱产物;泳道3为B公司同类产品(Competitor)结合Fibronectin后的洗脱产物。图中约63kDa处的条带为Fibronectin的单体。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本产品特异性强。本产品可特异性地结合抗凝血酶Ⅲ、凝血因子、生长因子、载脂蛋白、核酸结合蛋白等,获得的产物纯度高,可进一步用于Western、ELISA、质谱分析等一系列后续的分析测试。
本产品的主要指标如下表:
Characteristics | Description |
Product content | 50% settled gel in specific protective buffer |
Agarose structure | 6% cross-linked agarose |
Average particle size | 45-165μm |
Coupled ligand | Heparin |
Ligand concentration | ~4mg Heparin per ml settled gel |
Binding capacity | Per ml settled gel: ≥2mg antithrombin III (ATIII) |
Specificity | Electrostatic effect |
Application | Separation of biomolecules with an affinity for heparin, including antithrombin III、coagulation factors and other plasma proteins, DNA binding proteins, lipoproteins, protein synthesis factors, enzymes that act on nucleic acids, and steroid receptors, viruses et al. |
本产品为50%凝胶悬液,包装体积为总体积,每毫升本产品中共含有0.5ml凝胶沉淀物。如果每个样品使用50μl琼脂糖凝胶悬液,每毫升本产品可以用于20个样品反应。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2165-1ml | Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) | 1ml |
P2165-5ml | Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) | 5ml |
P2165-20ml | Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) | 20ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,一年有效。4ºC保存,至少一个月有效。
注意事项:本产品使用前要适当充分重悬,即颠倒若干次使琼脂糖凝胶混合均匀,混匀操作须轻柔,不宜剧烈涡旋震荡等,避免蛋白变性、琼脂糖凝胶破碎等。
本产品含有微量的防腐剂,使用前宜先用TBS等适当溶液洗涤凝胶3次,以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
在免疫沉淀或纯化时,建议设计阳性和阴性对照组。
蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作,并应始终放置在4ºC或冰浴,以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解,可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物,例如碧云天的P1005/P1006蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X)、P1048/P1049蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1010/P1011蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)、P1050/P1051蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等。
如果离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物,可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的琼脂糖不可重复使用。为了尽量减少肝素的脱落,无论是手动操作还是自动操作,低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。
高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与配体的结合可能有一定影响,但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异,以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Buffer | Components |
Binding Buffer | 50mM Tris-HCl (pH8.0) |
Elution Buffer | 50mM Tris-HCl (pH8.0), 2M NaCl |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2015-2ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
P2015-10ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
P2015-50ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
P2015-200ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 200ml |
P2017-2ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
P2017-10ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
P2017-50ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
P2017-200ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 200ml |
P2019-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
P2019-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
P2019-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
P2019-200ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 200ml |
P2157-1ml | Biotin Agarose (生物素琼脂糖凝胶) | 1ml |
P2157-5ml | Biotin Agarose (生物素琼脂糖凝胶) | 5ml |
P2157-20ml | Biotin Agarose (生物素琼脂糖凝胶) | 20ml |
P2159-1ml | Streptavidin Agarose (链霉亲和素琼脂糖凝胶) | 1ml |
P2159-5ml | Streptavidin Agarose (链霉亲和素琼脂糖凝胶) | 5ml |
P2159-20ml | Streptavidin Agarose (链霉亲和素琼脂糖凝胶) | 20ml |
P2165-1ml | Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) | 1ml |
P2165-5ml | Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) | 5ml |
P2165-20ml | Heparin Agarose (肝素琼脂糖凝胶) | 20ml |