免冰浴Western超快速转膜液(10X)
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产品编号 P0573-500ml
数量
¥ 152.00
产品包装:
100ml 500ml 4×500ml
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碧云天的免冰浴Western超快速转膜液(10X),即Ice-Bath Free Western Superquick Transfer Buffer (10X),也称常温Western超快速转膜液、Room Temperature Western Superquick Transfer Buffer,是一种10倍浓缩的无需冰浴、转膜快速、安全无毒害的用于Western湿法转膜的缓冲液。使用本转膜液,仅需400mA转膜12分钟或500mA转膜10分钟,就可以实现270kD条带的完全转膜,对于待检测的目的蛋白分子量不是特别大的情况,仅需转膜更短的时间。

本产品使用方便、产热量少、无需冰浴。使用本产品进行转膜时,无需任何冰浴措施,包括转膜液预冷、内置冰盒及外置冰浴处理等,室温下即可将蛋白高效转移到印迹膜上,不影响转膜效果。在环境温度为25ºC或以下时,转膜15分钟后转膜液的温度通常仅升高5-10ºC,产热量少。

本产品转膜效果与需加冰浴的快速转膜液基本一致,且可进一步缩短转膜时间。本产品与碧云天需加冰浴的Western快速转膜液(10X) (P0572)转膜效果比较参考图1。

图1.碧云天的免冰浴Western超快速转膜液(P0573/P0576)与需加冰浴的Western快速转膜液(10X) (P0572)在转膜前后的对比效果图。上一行为使用本产品转膜15分钟的效果图,下一行为使用加冰浴的快速转膜液转膜25分钟的效果图。转移电极芯组件中放置两个转移三明治夹进行转膜。使用本产品转膜时为室温条件、无任何冰浴措施;使用需加冰浴的快速转膜液时,转膜液提前预冷且转膜时使用内置冰盒进行降温处理。凝胶为BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 4-15%, 10孔) (P0856),凝胶厚度为1.0mm;蛋白分子量标准分别为彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) (P0068)和BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0072),每组重复两次上样,上样量为5μl;PVDF膜为PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) (FFP32);转膜设备为MiniBlot™蛋白转膜系统(E6050);转膜电源为BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)。实际转膜效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品Western检测效果与需加冰浴的快速转膜液基本一致。本产品与碧云天需加冰浴的Western快速转膜液(10X) (P0572)对于大分子量目的蛋白(ZO-1、β-Catenin)和小分子量目的蛋白(GAPDH、Histone H3)的Westen检测效果比较请参考图2。

图2.碧云天的免冰浴Western超快速转膜液(P0573/P0576)与需加冰浴的Western快速转膜液(10X) (P0572)对于不同分子量目的蛋白的Western检测效果比较图。左图为使用本产品转膜15分钟的Western检测效果图,右图为使用加冰浴的快速转膜液转膜25分钟的Western检测效果图。蛋白样品为HEK293T细胞裂解液,上样量分别为15、10、7.5、5和2.5µl,裂解液浓度为2.7mg/ml;抗体分别为ZO-1 Rabbit Polyclonal Antibody (AF8394)、β-Catenin Mouse Monoclonal Antibody (AF0069)、GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (AF2819)、Histone H3 Mouse Monoclonal Antibody (AF0009)。凝胶为BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris, 4-15%, 15孔) (P0857),凝胶厚度为1.0mm。其它电泳和转膜条件和图1完全相同。图中可见对于大分子量的蛋白,本产品的转膜效果优于Western快速转膜液(10X) (P0572),但对于小分子量的Histone H3略差于Western快速转膜液(10X) (P0572),但实测如果转膜时间缩短至10分钟或5分钟,本产品的效果相近或更优。实际Western效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品转膜快速。使用本产品时,室温下400mA恒流12分钟或500mA恒流10分钟即可把270kD的蛋白分子量标准完全转移至印迹膜上。相同条件下使用其它公司同类免冰浴快速转膜液需转膜更长时间,转膜效果比较参考图3。

图3.碧云天的免冰浴Western超快速转膜液(P0573/P0576)与其它同类免冰浴快速转膜液在转膜前后的对比效果图。上图为使用本产品的效果图,下图为使用其它同类免冰浴快速转膜液的效果图,转膜时均为室温条件、无任何冰浴措施。其它电泳和转膜条件和图1完全相同。实际转膜效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品安全无毒害。本产品为10倍浓缩(10X)的储存液,仅需用适量蒸馏水和乙醇稀释至1X即可使用,不含任何有毒有害组分,也无需使用剧毒的甲醇等试剂[1]。

本产品适用范围广。本产品不仅适合手工配制的Tris-Gly和Hepes等缓冲系统的SDS-PAGE凝胶的转膜,也适合Tris-Gly、Hepes和Bis-Tris等电泳缓冲系统的预制胶的转膜。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0573-100ml 免冰浴Western超快速转膜液(10X) 100ml
P0573-500ml 免冰浴Western超快速转膜液(10X) 500ml
P0573-2L 免冰浴Western超快速转膜液(10X) 4×500ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,一年有效。室温保存,至少一周内有效。

注意事项:

如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色,应该丢弃。

长时间在4ºC存放,如果出现沉淀,可以在水浴温育并充分溶解后再使用。

建议使用分析纯或更高纯度的乙醇。

使用本产品转膜时,如果设定恒流为400mA,无论是同一个转膜槽中1或2块胶转膜,电压在开始时通常为120V左右。由于转膜过程中,转膜液温度会逐渐升高,电阻变小,所以结束时电压通常为100V。转膜效率和电场强度(electric field strength,用E表示)以及蛋白所带的电荷相关,而电场强度主要和电压及电极之间的距离相关,即E=U/d。

由于用于转膜的电源品牌和型号的不同,一方面最高电流差异较大,另一方面功率也会有较大差别。通常大功率的电源相对贵一些,也更适合用于转膜。例如Bio-Rad Powerpac Basic Power Supply的最大功率是75W,在设定恒流为400mA时,电压超过187V时就会超过电源的最大功率而出现过载保护。有些电源会自动降低电压或电流,有些则会报错并停止转膜。对于出现停止转膜的情况,需要调低电流或电压,或者选择功率更大的电源。强烈推荐使用碧云天的BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)或BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) (E6080)用于Western等的转膜。

转膜时转膜液的温度、凝胶的参数(如数量、厚度、离子浓度、丙烯酰胺浓度等)、滤纸的厚度、同时使用的转膜槽数量、转膜液的离子浓度、转膜液的体积、转膜液使用的次数等都可能会影响电流和电压。如果需要同时使用2个或以上的转膜槽,建议使用高电流的大功率电源。

转膜时,如果出现报错而停止,需要根据情况查看是否是电压或电流过载,或者是如转膜液过多或过少、转膜槽的短路或断路等异常情况。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.免冰浴Western超快速转膜液(1X)的配制。如下以配制1L免冰浴Western超快速转膜液(1X)为例进行说明。
a.量取100毫升的免冰浴Western超快速转膜液(10X),倒入洁净量筒中,加入蒸馏水、超纯水或去离子水至总体积约700毫升。
b.加入200毫升无水乙醇或210毫升95%乙醇,充分混匀。
c.在量筒中用蒸馏水、超纯水或去离子水定容到1升,混匀后即为免冰浴Western超快速转膜液(1X),可用于转膜。
注:没有用完的免冰浴Western超快速转膜液(1X)可在常温或4ºC保存,通常两周内可以正常使用。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时,应该丢弃。
2.转膜条件:400mA恒流12-15分钟,或者500mA恒流10分钟,室温转膜,无需任何冰浴措施即可很好地完成转膜。对于相对较小分子量蛋白或厚度为0.75mm凝胶,可以适当减少转膜时间;对于超过270kD的超大分子量蛋白或厚度为1.5mm凝胶,需要适当增加转膜时间。
注:如果环境温度比较高,也可适当采取冰浴措施。
3.详细的Western操作步骤可以参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Villanueva MA. Anal Biochem. 2008. 373(2):377-9.
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