Western快速转膜液(10X)
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产品编号 P0572-2L
数量
¥ 476.00
产品包装:
100ml 500ml 4×500ml
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碧云天生产的Western快速转膜液(10X),即Western Rapid Transfer Buffer (10X),是一种10倍浓缩的安全无毒害的用于Western时湿法快速转膜的缓冲液。

本产品安全无毒害。本产品为10倍浓缩(10X)溶液,使用前需要用适当水和乙醇稀释至1X。本产品不含有毒有害组分,也无需使用剧毒的甲醇等试剂。

本产品转膜快速。使用本快速转膜液时,在500mA恒流转膜15-20分钟(推荐使用外置冰浴)或400mA恒流转膜约20-25分钟(可以不使用外置冰浴,仅使用内置冰盒即可)即可将聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白转移至PVDF膜或硝酸纤维素膜(NC膜)等印迹膜上,并且产热少,转膜效果好。相同的条件下使用传统的转膜液更容易导致过度发热,而在发热程度相似的情况下传统转膜液需要转膜更长时间。

本快速转膜液的转膜效果与传统转膜液一致或略优。本快速转膜液与传统转膜液在转膜前后的效果比较请参考图1。图中可见400mA 25min可以把270kD的蛋白分子量标准完全转膜。如果所检测的目的蛋白分子量不是很大,可以酌情把转膜时间缩短为20或15min,也可以考虑使用外置冰浴500mA转15-20min。

图1.Western快速转膜液与传统转膜液在转膜前后的对比效果图。上图为使用本快速转膜液的效果图,下图为使用传统转膜液的效果图,转移电极芯组件中放置两个转移三明治夹进行转膜,仅用内置冰盒进行降温。凝胶为BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Hepes, 4-20%, 15孔) (P0524),凝胶厚度为1.5mm;蛋白分子量标准分别为彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) (P0068/P0069)BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072),上样量为6μl;传统的转膜液为Western转膜液(P0021A/B)PVDF膜为PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) (FFP33);转膜设备为MiniBlot™蛋白转膜系统(E6050);转膜电源为BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)。实际转膜效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本快速转膜液的Western检测效果与传统转膜液基本一致。本快速转膜液与传统转膜液对于大分子量目的蛋白(ZO-1、β-Catenin)和小分子量目的蛋白(GAPDH、Histone H3)的Western检测效果比较请参考图2。

图2.Western快速转膜液与传统转膜液对于不同分子量目的蛋白的Western检测效果比较图。左图为使用本快速转膜液的Western检测效果图,右图为使用传统转膜液的Western检测效果图。蛋白样品为HEK293T细胞裂解液,上样量分别为30、20、10和5ng;抗体分别为ZO-1 Rabbit Polyclonal Antibody (AF0321)β-Catenin Mouse Monoclonal Antibody (AF0069)GAPDH抗体(小鼠单抗) (AG019)Histone H3 Mouse Monoclonal Antibody (AF0009)。其它电泳和转膜条件和图1中完全相同。实际Western效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本快速转膜液产热显著低于传统转膜液,400mA恒流转膜时外槽无须冰浴,仅用转膜槽中的内置冰盒,就可以确保不会产生过热现象。如果希望更快速地完成转膜,可以使用500mA恒流转膜,此时推荐使用外置的冰浴。

本快速转膜液使用便捷,无需调节pH值。

本产品适合手工配制的Tris-Gly和Hepes等缓冲系统的SDS-PAGE凝胶的转膜,也适合Tris-Gly、Hepes和Bis-Tris系统等预制胶的转膜。

使用后转膜液可以回收,回收后可以再使用1-2次。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0572-100ml Western快速转膜液(10X) 100ml
P0572-500ml Western快速转膜液(10X) 500ml
P0572-2L Western快速转膜液(10X) P0572-500ml×4瓶
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,一年有效。室温保存,至少一周内有效。

注意事项:

如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色,应该丢弃。

长时间在4℃存放,如果出现沉淀,可以在水浴温育并充分溶解后再使用。

建议使用分析纯级别的乙醇或更高纯度的乙醇。

如果转膜时设定的电流或电压较大,会有比较明显的产热现象,即产生所谓的焦耳热(Joule heating)效应,并导致转膜液的电阻变小,最终影响转膜效率、转膜液的缓冲能力、甚至过热时导致凝胶熔化或黏附在膜上。由于使用本产品时产热较少,400mA恒流转膜时可以仅在转膜槽内用冰盒降温即可。如果同时将整个转膜槽置于冰浴中降温,转膜效果更佳。同时也可以考虑转膜液配制好后先在4℃或者冰浴预冷。

使用本产品转膜时,如果设定恒流为400mA,无论是同一个转膜槽中1或2块胶转膜,电压在开始时通常为200V左右。由于转膜过程中,转膜液温度会逐渐升高,电阻变小,所以结束时电压通常为100-150V。转膜效率和电场强度(electric field strength, 用E表示)以及蛋白所带的电荷相关,而电场强度主要和电压及电极之间的距离相关,即E=U/d。

由于用于转膜的电源品牌和型号的不同,一方面最高电流差异较大,另一方面功率也会有较大差别。通常大功率的电源相对贵一些,也更适合用于转膜。比如Bio-Rad Powerpac Basic Power Supply的最大功率是75W,在设定恒流为400mA时,电压超过187V时就会超过电源的最大功率而出现过载保护。有些电源会自动降低电压或电流,有些则会报错并停止转膜。对于出现停止转膜的情况,需要调低电流或电压,或者选择功率更大的电源。强烈推荐使用碧云天的BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) (E6080)BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)用于Western等的转膜。

转膜时转膜液的温度、凝胶的参数(如数量、厚度、离子浓度、丙烯酰胺浓度等)、滤纸的厚度、同时使用的转膜槽数量、转膜液的离子浓度、转膜液的体积、转膜液使用的次数等都可能会影响电流和电压。如果需要同时使用2个或以上的转膜槽,建议使用高电流的大功率电源,或者设定较低的电流或电压进行比较长时间的转膜。

转膜时,如果出现报错而停止,需要根据情况查看是否是电压或电流过载,或者是如转膜液过多或过少、转膜槽的短路或断路等异常情况。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.Western快速转膜液的配制:
a.量取100毫升的Western快速转膜液(10X),倒入到洁净的量筒中,加入蒸馏水、超纯水或去离子水定容约700毫升。
b.加入200毫升无水乙醇或210毫升95%乙醇,充分混匀。
c.在量筒中用蒸馏水、超纯水或去离子水定容到1升,混匀后即为Western快速转膜液(1X),可用于转膜。也可根据所需的转膜液量自行量取一定量的Western快速转膜液(10X)进行配制。
注:如果Western快速转膜液使用前能4℃预冷,转膜效果更好。没有用完的快速转膜液可在常温或4℃保存,通常两周内可以正常使用。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时,应该丢弃。
2.转膜条件:500mA恒流15-20min (推荐使用外置冰浴)或400mA恒流20-25分钟(可以仅使用内置冰盒,使用外置冰浴效果更佳),即可很好地完成转膜。对于小分子量蛋白,可以适当减少转膜时间;同样对于大分子量蛋白,可以适当增加转膜时间。
3.详细的Western操作步骤可以参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/western.htm
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