碧云天自主研发生产的NotI,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1],是CciNI的同裂酶(Isoschizomers),其基本信息如下:
识别序列 | 缓冲液兼容性(%) | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰? | |||||
GC^GGCCGC | 1X B | 1X G | 1X O | 1X R | 1X Y | 2X Y | 37ºC | 65ºC 20min |
有时有干扰 |
CGCCGG^CG | 0-20 | 20-50 | 100 | 20-50 | 0-20 | 20-50 |
碧云天生产的HindIII酶切DNA双链的效果请参考图1。
图1. 碧云天生产的NotI (D6498)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的NotI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的NotI,在1X Buffer O中酶切含一个NotI位点的300bp的DNA片段,37ºC孵育1小时进行酶切反应,酶切产物为两个长度相等的150bp片段,随后65ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
酶储存液组成为:10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 250mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol, 0.15% Triton X-100。
1X Buffer O组成为:50mM Tris-HCl (pH7.5 at 37ºC), 10mM MgCl2, 100mM NaCl, 0.1mg/ml BSA。
酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。
活性单位定义:One unit is defined as the amount of NotI required to digest 1µg of pBC4 DNA in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6498S-1 | NotI (20U/µl) | 50µl |
D6010O-200µl | 10X Buffer O | 200µl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6498M-1 | NotI (20U/µl) | 200µl |
D6010O-800µl | 10X Buffer O | 800µl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6498L-1 | NotI (20U/µl) | 1ml |
D6010O-4ml | 10X Buffer O | 4ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6498XL-1 | NotI (100U/µl) | 1ml |
D6010O-20ml | 10X Buffer O | 20ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,至少两年有效。
注意事项:内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
特别注意:甘油含量大于5%,低盐浓度,pH > 8.0或酶超量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Volume |
DNA Substrate | xµl (≤1µg) |
Ultrapure water | (18-x-y)µl |
10X Buffer O | 2µl |
NotI (20U/µl) | yµl (0.5-1µl) |
Total volume | 20µl |
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D5601-200μl | BeyoFast™ ApaLI | 200μl |
D5609-50μl | BeyoFast™ AscI | 50μl |
D5617-25μl | BeyoFast™ AvrII | 25μl |
D5625-500μl | BeyoFast™ BamHI | 500μl |
D5633-125μl | BeyoFast™ BclI | 125μl |
D5641-100μl | BeyoFast™ BglII | 100μl |
D5649-50μl | BeyoFast™ BsaI | 50μl |
D5653-20μl | BeyoFast™ BspQI | 20μl |
D5657-100μl | BeyoFast™ BstBI | 100μl |
D5665-100μl | BeyoFast™ BstEII | 100μl |
D5673-50μl | BeyoFast™ ClaI | 50μl |
D5681-50μl | BeyoFast™ DpnI | 50μl |
D5689-50μl | BeyoFast™ DpnII | 50μl |
D5692-200μl | BeyoFast™ DraI | 200μl |
D5697-25μl | BeyoFast™ EagI | 25μl |
D5705-600μl | BeyoFast™ EcoRI | 600μl |
D5713-200μl | BeyoFast™ EcoRV | 200μl |
D5721-30μl | BeyoFast™ Esp3I (BsmBI ) | 30μl |
D5729-50μl | BeyoFast™ FspI | 50μl |
D5737-500μl | BeyoFast™ HindIII | 500μl |
D5745-500μl | BeyoFast™ HinfI | 500μl |
D5753-50μl | BeyoFast™ HpaI | 50μl |
D5761-30μl | BeyoFast™ KasI | 30μl |
D5769-200μl | BeyoFast™ KpnI | 200μl |
D5777-100μl | BeyoFast™ MluI | 100μl |
D5785-50μl | BeyoFast™ MnlI | 50μl |
D5789-200μl | BeyoFast™ MspI | 200μl |
D5793-30μl | BeyoFast™ NcoI | 30μl |
D5801-200μl | BeyoFast™ NdeI | 200μl |
D5809-30μl | BeyoFast™ NheI | 30μl |
D5817-50μl | BeyoFast™ NotI | 50μl |
D5825-50μl | BeyoFast™ NruI | 50μl |
D5833-25μl | BeyoFast™ NsiI | 25μl |
D5841-25μl | BeyoFast™ PacI | 25μl |
D5847-50μl | BeyoFast™ PmeI | 50μl |
D5849-500μl | BeyoFast™ PstI | 500μl |
D5857-200μl | BeyoFast™ PvuII | 200μl |
D5865-100μl | BeyoFast™ SacI | 100μl |
D5873-50μl | BeyoFast™ SacII | 50μl |
D5881-200μl | BeyoFast™ SalI | 200μl |
D5885-20μl | BeyoFast™ SapI | 20μl |
D5889-25μl | BeyoFast™ SbfI | 25μl |
D5897-100μl | BeyoFast™ SfiI | 100μl |
D5905-100μl | BeyoFast™ SmaI | 100μl |
D5913-50μl | BeyoFast™ SpeI | 50μl |
D5921-50μl | BeyoFast™ SphI | 50μl |
D5929-60μl | BeyoFast™ SspI | 60μl |
D5937-100μl | BeyoFast™ StuI | 100μl |
D5945-200μl | BeyoFast™ TaqI | 200μl |
D5953-500μl | BeyoFast™ XbaI | 500μl |
D5958-50μl | BeyoFast™ XcmI | 50μl |
D5961-500μl | BeyoFast™ XhoI | 500μl |
D6055S/M/L/XL | BamHI | 10kU/40kU/200kU/800kU |
D6128S/M/L/XL | BsaI | 1kU/5kU/20kU/200kU |
D6132S/M/L/XL | BspQI | 400U/2kU/10kU/40kU |
D6257S/M/L/XL | DpnI | 500U/2.5KU/10KU/50KU |
D6272S/M/L | DraI | 4kU/20kU/100kU |
D6333S/M/L/XL | EcoRI | 10kU/40kU/200kU/800kU |
D6339S/M/L/XL | EcoRV | 4kU/20kU/100kU/400kU |
D6392S/M/L/XL | HindIII | 10kU/40kU/200kU/1000kU |
D6418S/M | KpnI | 4kU/20kU |
D6470S/M/L/XL | MspI | 4kU/20kU/100kU/500kU |
D6482S/M/L/XL | NcoI | 800U/4kU/20kU/100kU |
D6486S/M/L | NdeI | 4kU/20kU/100kU |
D6498S/M/L/XL | NotI | 1kU/4kU/20kU/100kU |
D6542S/M/L/XL | PmeI | 800U/4kU/20kU/100kU |
D6590S/M/L/XL | SapI | 400U/2kU/10kU/40kU |
D6635S/M/L/XL | SmaI | 2kU/10kU/40kU/200kU |
D6715S/M/L | XbaI | 10kU/40kU/200kU |
D6718S/M/L/XL | XcmI | 1kU/4kU/20kU/100kU |