Protein A Agarose (Fast Flow, 进口分装)
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产品编号 P2006
数量
¥ 497.00
产品包装:
2ml
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本Protein A Agarose (Fast Flow)为进口分装,主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗体的纯化。
Protein A Agarose适合于免疫沉淀mouse IgG2a, IgG2b, IgA, rabbit IgG, 以及human IgG1, IgG2和IgG4。 
Protein A共价交联到6% agarose beads (Fast Flow)上,2ml Protein A Agarose中共含有约2.5mg重组的Protein A。2 ml Protein A Agarose共可以结合约20mg human IgG。推荐的线性流速(Linear flow rate)为 50-300cm/h。
Protein A Agarose配制在TBS溶液中,2ml中共含有0.5ml Agarose beads。
本Protein A Agarose如果用于常规的免疫沉淀,可以免疫沉淀100次。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2006 Protein A Agarose (Fast Flow, 进口分装) 1ml×2
说明书 1份

保存条件:
4℃保存,一年有效。
注意事项:
请勿冷冻保存本产品。
Protein A Agarose使用前一定要充分重悬,即充分颠倒若干次使混合均匀。
从蛋白样品收集开始,所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP):
a. 蛋白样品的准备:
(a) 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,PBS洗涤一次,然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)或各种RIPA裂解液(P0013B、P0013C、P0013D或P0013E)等进行细胞的裂解。
(b) 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
(c) 对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次,然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注: 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材,参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高,可以用裂解液或PBS适当稀释,如果蛋白样品浓度过低,在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
b. 去除非特异性结合(可选做)
(a) 取200微升至1毫升蛋白样品,蛋白量约为200微克至1毫克,加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的Protein A Agarose,4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
(b) 2500rpm(约1000g)离心5分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。
注:所谓种属相同的IgG是指,例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG,则在本步骤中可以加入normal mouse IgG,如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein A Agarose的孵育,可以充分降低非特异性的结合,降低背景。
c. 免疫沉淀:
(a) 加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗,4℃缓慢摇动过夜。
(b) 再加入20微升充分重悬的Protein A Agarose,4℃缓慢摇动1-3个小时。(为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein A Agarose的量调整为40微升。)
(c) 2500rpm(约1000g)离心5分钟,或瞬时高速离心,小心吸除上清,注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A Agarose。
(d) 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤c(c)。
(e) 完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。
(f) 100℃或沸水浴处理3-5分钟,取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳,暂时不用的样品可以-20℃保存。
2. 免疫共沉淀:
参考免疫沉淀的方法进行,但免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
3. 抗体纯化:
a. 准备工作:
(a) 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
(b) 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
(c) 选择适当的纯化柱,用适当量的Protein A Agarose装填纯化柱。
(d) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱,流速可以用恒流泵控制为1ml/min。如无恒流泵,也可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
b. 抗体纯化:
(a) 把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
(b) 待纯化的抗体过柱后,用10-20倍柱体积的TBS洗涤,以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
(c) 洗涤完后,用10ml 50mM glycine, pH2.7作为洗脱液,洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein A的结合能力很强,在pH2.7时洗脱效果不太理想,可以使用50mM glycine, pH1.9作为洗脱液。分管收集洗脱下的抗体,根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
c. 纯化柱的再生:
(a) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱,使纯化柱达到中性的pH。
(b) 用TBS来保存再生的纯化柱。

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1. Mao X, Cao B, Wood TE, Hurren R, Tong J, Wang X, Wang W, Li J, Jin Y, Sun W, Spagnuolo PA, MacLean N, Moran MF, Datti A, Wrana J, Batey RA, Schimmer AD.
Blood 2011 Feb 10;117(6):1986-97. (IF 17.543)
2. Cao Z, Fang Y, Lu Y, Tan D, Du C, Li Y, Ma Q, Yu J, Chen M, Zhou C, Pei L, Zhang L, Ran H, He M, Yu Z, Zhou Z.
J Pineal Res 2017 Apr;62(3). (IF 14.528)
4. Mengyu Liu, Huifeng Pi, Yu Xi, Liting Wang, Li Tian, Mengyan Chen, Jia Xie, Ping Deng, Tao Zhang, Chao Zhou, Yidan Liang, Lei Zhang, Mindi He, Yonghui Lu, Chunhai Chen, Zhengping Yu, Zhou Zhou
Autophagy. doi: 10.1080/15548627.2020.1739444. (IF 9.77)
7. Zhou R, Yi L, Ye X, Zeng X, Liu K, Qin Y, Zhang Q, Mi M
CELL PHYSIOL BIOCHEM 2018;51(5):2397-2420. (IF 5.5)
8. Guo YJ, Dong SY, Cui XX, Feng Y, Liu T, Yin M, Kuo SH, Tan EK, Zhao WJ, Wu YC.
Mol Nutr Food Res 2016 Oct;60(10):2161-2175. (IF 5.309)
9. Gao S, Wang P, Hua Y, Xi H, Meng Z, Liu T, Chen Z, Liu L.
ONCOTARGET 2016 Jan 12;7(2):1608-18. (IF 5.168)
10. Yan HL, Xue G, Mei Q, Ding FX, Wang YZ, Sun SH.
INT J BIOCHEM CELL B 2008;40(10):2151-63. (IF 3.673)
11. Xian GZ, Wu SD, Chen CC, Su Y
HEPATOB PANCREAT DIS 2009 Dec;8(6):608-13. (IF 2.428)
12. Zhang Y, Li YM, Liu LD, Jiang L, Ji M, Jiang RJ, Guo L, Liao Y, Li QH.
Virol Sin 2011 Jun;26(3):171-80. (IF 3.242)
13. Jiang L, Lin J, Han H, Dong H, Zhao Q, Zhu S, Huang B.
PLoS One 2012;7(7):e41115. (IF 2.74)
14. Liu T, Cheng W, Huang Y, Huang Q, Jiang L, Guo L.
Exp Cell Res 2012 Feb 15;318(4):424-34. (IF 3.383)
15. Jiang L, Lin J, Han H, Zhao Q, Dong H, Zhu S, Huang B.
Parasitol Res 2012 Feb;110(2):865-74. (IF 1.641)
16. Huai J, Zhang Y, Liu QM, Ge HY, Arendt-Nielsen L, Jiang H, Yue SW
Neurosci Lett 2012 Mar 14;512(1):22-7. (IF 2.274)
17. Ruan SQ, Wang ZH, Wang SW, Fu ZX, Xu KL, Li DB, Zhang SZ.
BIOCHEM BIOPH RES CO 2012 Apr 6;420(2):385-90. (IF 2.985)
19. Zhao F, Zhang S, Chen L, Wu Y, Qin J, Shao Y, Wang X, Chen Y.
Europace 2012 Dec;14(12):1726-33. (IF 4.045)
20. Liu T, Shen D, Xing S, Chen J, Yu Z, Wang J, Wu B, Chi H, Zhao H, Liang Z, Chen C.
Int J Mol Med 2013 Jan;31(1):188-96. (IF 3.098)
21. Yuan L, Zhang L, Dong X, Zhao H, Li S, Han D, Liu X.
TUMOR BIOL  2013 Feb;34(1):577-85. (IF 3.65)
22. Liu Y, Su Y, Wang J, Sun S, Wang T, Qiao X, Run X, Li H, Liang Z.
Neurochem Int 2013 Mar;62(4):458-67. (IF 3.881)
23. Zhao F, Zhang S, Shao Y, Wu Y, Qin J, Chen Y, Chen L, Gu H, Wang X, Huang C, Zhang W.
Int J Cardiol 2013 Oct 3;168(3):2177-85. (IF 3.229)
25. Tan M, Tang C, Zhang Y, Cheng Y, Cai L, Chen X, Gao Y, Deng Y, Pan M.
FREE RADICAL RES 2015;49(8):935-45. (IF 2.839)
26. Mei M, Ye J, Qin A, Wang L, Hu X, Qian K, Shao H.
SCI REP-UK 2015 Jan 21;5:7935. (IF 3.998)
27. Liu T, Hou L, Zhao Y, Huang Y.
Int J Mol Med 2015 Jan;35(1):238-46. (IF 3.098)
28. Sun Y, Ning T, Liu Z, Pang J, Jiang D, Guo Z, Song G, Yang D.
BMC Plant Biology 2015 Feb 17;15:55. (IF 3.67)
30. Su C, Zhang P, Song X, Shi Q, Fu J, Xia X, Bai H, Hu L, Xu D, Song E, Song Y.
Chem Res Toxicol 2015 Apr 20;28(4):765-74. (IF 3.184)
31. Shen C, Huo LR, Zhao XL, Wang PR, Zhong N.
J Mol Neurosci 2015 May;56(1):89-101. (IF 2.678)
32. Su C, Xia X, Shi Q, Song X, Fu J, Xiao C, Chen H, Lu B, Sun Z, Wu S, Yang S, Li X, Ye X, Song E, Song Y.
J AGR FOOD CHEM 2015 Jun 10;63(22):5468-75. (IF 4.192)
34. Li Z, Wang S, Zhao W, Sun Z, Yan H, Zhu J.
Mol Med Rep 2016 Feb;13(2):1709-16. (IF 2.1)
35. Xue J, Jiang W, Chen Y, Liu Y, Zhang H, Xiao Y, Qiao Y, Huang K, Wang Q.
PARASITE VECTOR 2016 Jun 29;9(1):374. (IF 2.824)
36. Su C, Shi Q, Song X, Fu J, Liu Z, Wang Y, Wang Y, Xia X, Song E, Song Y.
Toxicology 2016 Jul 1;363-364:48-57. (IF 4.099)
37. Lai YJ, Liu L, Hu XT, He L, Chen GJ.
J Mol Neurosci 2017 Feb 1. doi: 10.1007/s12031-017-0884-2. [Epub ahead of print] (IF 2.678)
38. Huang Y, Tao T, Liu C, Guan H, Zhang G, Ling Z, Zhang L, Lu K, Chen S, Xu B, Chen M.
Int J Oncol 2017 Feb;50(2):421-431. (IF 3.899)
40. Liu T, Zou XZ, Huang N, Ge XY, Yao MZ, Liu H, Zhang Z, Hu CP
Life Sci. 227:64-73. (IF 3.647)
41. Wang C, Lu H, Luo C, Song C, Wang Q, Peng Y, Xin Y, Liu T, Yang W
Gene. 705:167-176. (IF 2.984)
42. Liu T, Zou XZ, Huang N, Ge XY, Yao MZ, Liu H, Zhang Z, Hu CP
Eur J Pharmacol. 863:172673. (IF 3.263)
43. Ye W, Ni Z, Yicheng S, Pan H, Huang Y, Xiong Y, Liu T
Int J Oncol. 55(6):1296-1312. (IF 3.899)
44. Xinfeng Fei, Yuying Cai, Feng Lin, Yongyi Huang, Te Liu, Yan Liu
Hum Cell. doi: 10.1007/s13577-020-00442-7. (IF 3.463)
45. Te Liu, Jiajia Lin, Chuan Chen, Xiaoli Nie, Fangfang Dou, Jiulin Chen, Zhenxin Wang, Zhangbin Gong
Cell Prolif. doi: 10.1111/cpr.12954.
46. Te Liu, Haikun Zhou, Hong Lu, Chunsheng Luo, Qingming Wang, Yunhua Peng, Wei Yang, Yaojie Xin
Ann Transl Med. doi: 10.21037/atm-20-3399. (IF 3.297)
47. Xiaohong Ni, Yongjiang Feng, Xiangwei Fu
Mol Med Rep. doi: 10.3892/mmr.2021.12460. (IF 2.1)
48. Ying Kong, Han-Dong Li, Dan Wang, Xiaolin Gao, Chunsheng Yang, Minshu Li, Ting Chang, Qiang Liu
FASEB J. doi: 10.1096/fj.202100673R. (IF 4.966)
49. Sijia Yin, Chao Han, Yun Xia, Fang Wan, Junjie Hu, Liang Kou, Yadi Sun, Jiawei Wu, Yunna Li, Qiulu Zhou, Nian Xiong, Jinsha Huang, Tao Wang
Mol Neurobiol. doi: 10.1007/s12035-021-02670-w. (IF 4.5)