首先请参考下表,了解各种裂解液的主要特点和差异。
产品编号 | P0013 | P0013B | P0013C | P0013D | P0013F | P0013G | P0013J | P0013K | P0043 | P0045 |
产品名称 | Western及IP细胞裂解液 | RIPA裂解液(强) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | NP-40裂解液 | SDS裂解液 | Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) | RIPA裂解液(强,无抑制剂) | 植物Western及IP细胞裂解液) | 植物RIPA裂解液(强) |
有效裂解成分 | 1% Triton X-100 | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% NP-40, 0.25% deoxycholate | 1% NP-40 | 1% SDS | 1% Triton X-100 | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% Triton X-100 | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS |
裂解强度 | 温和 | 强 | 中 | 温和 | 温和 | 强 | 温和 | 强 | 温和 | 强 |
对膜蛋白的提取 | 一般 | 很好 | 较好 | 一般 | 一般 | 很好 | 一般 | 很好 | 一般 | 很好 |
对胞浆蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
对核蛋白的提取 | 较好 | 很好 | 较好 | 较好 | 较好 | 很好 | 较好 | 很好 | 较好 | 很好 |
胞浆磷酸化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
细胞核转录因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
含蛋白酶抑制剂 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 否 | 否 | 是 | 是 |
含磷酸酯酶抑制剂 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 否 | 否 | 是 | 是 |
不同物种样品兼容性 | 高 | 高 | 高 | 高 | 高 | 高 | 高 | 高 | 高 | 高 |
主要用途 | WB, IP, co-IP |
WB, IP | WB, IP | WB, IP, co-IP |
WB, IP, co-IP | WB, ChIP | WB, IP, co-IP |
WB, IP | 植物WB, IP, co-IP | 植物WB, IP |
用于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013),该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,发表大量SCI论文,用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强或中)或SDS裂解液。使用RIPA裂解液(强)的用户也非常多,发表了大量SCI论文。
对于植物样品,优先推荐使用植物Western及IP细胞裂解液(P0043)和植物RIPA裂解液(强) (P0045)。P0043裂解性能良好,对于IP和co-IP有更好的兼容性;P0045的裂解能力更强,更适用于WB和IP,对于co-IP的兼容性不是很好。
用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂时,可以考虑选购P0013J或P0013K。P0013J在很多时候可以兼容酶活性和生物小分子的检测,对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试,碧云天不提供具体的应用信息。P0013J的裂解能力比P0013K弱一些,但用于酶活性和生物小分子时,P0013J的兼容性通常会更好一些。