碧云天生产的BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (NHS磁珠)，也称NHS化磁珠、NHS衍生化磁珠、NHS衍生微珠、NHS Derivatized Beads，是一类由N-羟基-琥珀酰亚胺(N-Hydroxysuccinimide, NHS)包覆的高品质亚微米尺度粒径四氧化三铁微球(Fe3O4 microspheres)制备，无需活化，可快速、高效、灵敏、特异性地与多肽、蛋白、抗体、寡聚核苷酸等生物分子共价偶联，后续可以用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用等，是医学和生命学研究中的重要载体工具。

磁分离是一种利用外部磁场对磁性材料的作用力，在保留生物活性的同时结合并分离生物分子、细胞的方法，具有吸附量大、分离速度快、效率高、可重复使用、操作简单等特点[1,2]。常规的四氧化三铁微球作为常用的磁性材料磁响应性高、生物相容性极佳，但表面未经修饰，不稳定，易发生自身的聚集和沉淀。常见的含功能基团的磁珠有NHS磁珠、羧基磁珠和氨基磁珠，是在磁珠的壳层结构包被有NHS、羧基或氨基官能团，以降低磁珠本身的聚集和沉淀；NHS磁珠无需活化，可以直接使用；羧基磁珠显酸性，在酸性缓冲液中通常用EDC/NHS等进行活化，而氨基磁珠显碱性，在碱性缓冲液中通常用戊二醛等进行活化。本NHS磁珠系列产品为NHS包覆的超顺磁性四氧化三铁微球的水相悬浮液，采用的先进技术使磁珠与柠檬酸或高分子材料完美结合，是一种新型功能化磁性微球。与传统磁珠相比，本NHS磁珠系列产品具有超顺磁性、高NHS密度、快速磁响应性、单分散性、分离速度快、回收率高、特异性强等多方面的优点，能便捷高效地与多种生物分子(多肽、蛋白、抗体等)进行高载量结合，也可作为良好的基础材料进行包被、吸附、化学改性等后续处理。同时，本NHS磁珠系列产品的柠檬酸/聚合物外壳可保护与磁珠结合的目标分子免受铁元素的负面影响。

BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (NHS磁珠)与蛋白、抗体等生物分子共价偶联的基本原理如下。生物偶联是通过化学共价键结合生物分子的过程，生物偶联试剂含有具有反应活性的末端，可与特定功能基团(如伯氨基、巯基)反应。伯胺(-NH2)存在于每条多肽链的N-末端以及赖氨酸残基的侧链中。由于伯胺带正电荷，因此它通常在蛋白质的外表面，使其更易于偶联而不会改变蛋白质结构。NHS磁珠无需活化，只需简单地将含伯氨基的生物配体溶解在Coupling Buffer中，室温下将蛋白与NHS磁珠混合1-2小时便可将生物配体共价偶联到磁珠上。本NHS磁珠系列产品进行蛋白等生物分子偶联的流程参考图1。

图1.碧云天BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (NHS磁珠) (ST422/ST425/ST428)生物分子偶联流程图(以偶联蛋白为例)。

本NHS磁珠系列产品特异性强、配基密度高、结合量高。与国内外大多数的同类产品相比，本NHS磁珠系列产品NHS密度高，对带有伯氨基的生物分子具有很强的反应特异性。本NHS磁珠系列产品包含200nm、500nm和1µm三种粒径可供选择，每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，可反应结合不少于0.6mg IgG抗体，具体的最大结合量和生物分子的分子量大小等相关。

本NHS磁珠系列产品与生物分子的反应速度快。本NHS磁珠系列产品NHS密度高，NHS磁珠能快速地与带有伯氨基生物分子发生偶联，无需活化，节省了操作时间。

本NHS磁珠系列产品分散性和重悬性良好。本NHS磁珠系列产品进行了柠檬酸或高分子材料修饰，避免了磁珠的团聚，使磁珠具有良好的单分散性和稳定的物理化学性质，磁珠进行生物分子偶联反应时具有很好地重复性和便捷性。

本NHS磁珠系列产品的主要指标请参考下表：

Product Cat. No.	ST422	ST425	ST428
Product content	10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer	10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer	10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer
Beads size	~200nm	~500nm	~1µm
Density of NHS	~200µmol/g	~200µmol/g	~300µmol/g
Type of magnetization	Superparamagnetic (no magnetic memory)	Superparamagnetic (no magnetic memory)	Superparamagnetic (no magnetic memory)
Magnetic core	Fe3O4	Fe3O4	Fe3O4
Shell	Citric acid	Polymer	Polymer

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
ST422-5ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (200nm)	5ml
ST422-50ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (200nm)	50ml
ST422-200ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (200nm)	200ml
ST425-5ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (500nm)	5ml
ST425-50ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (500nm)	50ml
ST425-200ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (500nm)	200ml
ST428-5ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (1µm)	5ml
ST428-50ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (1µm)	50ml
ST428-200ml	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (1µm)	200ml
—	说明书	1份

保存条件：

室温或者4ºC保存，两年有效。

注意事项：

须根据生物分子的特性选择合适的功能基团及粒径的磁珠。

本NHS磁珠系列产品对水非常敏感，为了避免NHS磁珠潮解，取完磁珠需立即盖好，并用封口膜封好盖子，于4ºC保存。

本NHS磁珠系列产品需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

本NHS磁珠系列产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，充分震荡或超声使磁珠呈均匀的悬浮状态。

为保证最佳的偶联效果，偶联缓冲液不能含有Tris等带伯氨基的溶液。

蛋白稳定剂(如BSA、明胶等)会抑制蛋白/抗体与NHS磁珠的结合，因此在NHS磁珠偶联蛋白/抗体时，需要确保蛋白/抗体体系中不存在含伯氨基的蛋白稳定剂。蛋白样品溶液中也不能含有Tris、甘氨酸等其它含有伯氨基的物质。

如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.试剂的准备：

Solution/Buffer	Components
Washing Buffer	1mM HCl, Keep at 4ºC before use
Coupling Buffer A	100mM MES, pH4.8 (Isoelectric point<7)
Coupling Buffer B	200mM NaHCO3, pH8.3 (Isoelectric point>7)
Blocking Solution	1% BSA, 3M Ethanolamine, pH9.0
Protective Solution	1X PBS with 0.02% NaN3 or ProClean 300 (ST853)

2.NHS磁珠准备：
由于磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。
a.用移液器轻轻吹打重悬磁珠，取100μl磁珠重悬液至一洁净离心管中(FTUB015)，磁性分离去除上清，用500μl预冷的Washing Buffer重悬磁珠。
b.用移液器轻轻吹打磁珠，置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。
3.NHS磁珠偶联生物分子(以蛋白为例)：
a.偶联。加入100μl蛋白溶液(0.5-2mg/ml，参考蛋白的等电点，用对应的Coupling Buffer配制)，轻柔地混匀。测试反应前体系中的蛋白浓度(记录为c1)。25ºC偶联2小时，或者25ºC偶联1小时后转入4ºC过夜进行偶联，期间保持磁珠的悬浮状态，可置于侧摆摇床或旋转混合仪上进行偶联反应。推荐使用BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673)或BeyoVortex™基础型旋转混匀仪(E6800)。
注1：蛋白溶液中不能含有带有伯氨基的成分，如Tris、甘氨酸、明胶、BSA等。
注2：已经保存于Buffer中的蛋白，需要通过脱盐的方法去除原有Buffer里的含伯氨基的物质，推荐碧云天脱盐柱(P2603/P2605/P2607/P2613/P2615/P2617)进行脱盐处理。使用脱盐柱处理可以有效去除Tris、甘氨酸等干扰物质。
4.NHS磁珠封闭：
a.反应结束后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。测试反应后体系中的蛋白浓度(记录为c2)，c1和c2可用于计算磁珠偶联的蛋白量。
b.加入200-500μl Blocking Solution重悬磁珠，25ºC反应2-4小时或4ºC反应过夜，以封闭磁珠表面未结合的位点，期间保持磁珠的悬浮状态，可置于侧摆摇床或旋转混合仪上进行封闭反应。
5.磁珠保存：
a.反应结束后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。用200-500μl Blocking Solution重悬磁珠。
b.用移液器轻轻吹打磁珠，置于磁力架(FMS012/FMS024)上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。
c.加入50-100μl Protective Solution重悬磁珠，保存于2-8ºC。
参考文献：
1.Haukanes BI, Kvam C. Biotechnology (N Y). 1993. 11(1):60-3.
2.He J, Huang M, Wang D, Zhang Z, Li G. J Pharm Biomed Anal. 2014. 101:84-101.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
ST422	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (NHS磁珠, 200nm)	5ml/50ml/200ml
ST425	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (NHS磁珠, 500nm)	5ml/50ml/200ml
ST428	BeyoMag™ NHS Magnetic Beads (NHS磁珠, 1µm)	5ml/50ml/200ml
ST401	BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (羧基磁珠, 200nm)	5ml/50ml/200ml
ST403	BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (羧基磁珠, 500nm)	5ml/50ml/200ml
ST405	BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (羧基磁珠, 1µm)	5ml/50ml/200ml
ST412	BeyoMag™ Amine Magnetic Beads (氨基磁珠, 200nm)	5ml/50ml/200ml
ST415	BeyoMag™ Amine Magnetic Beads (氨基磁珠, 500nm)	5ml/50ml/200ml
ST418	BeyoMag™ Amine Magnetic Beads (氨基磁珠, 1µm)	5ml/50ml/200ml
ST025	BSA (Fatty Acid & IgG Free, BioPremium)	5g/20g/100g
ST825	Tween-20/吐温-20	100ml/500ml
ST853	ProClean 300(抑菌防腐剂)	50ml/250ml/1L
ST1506	2-(N-吗啉基)乙磺酸一水合物(≥99.0%, BioPlus)	25g/100g/500g
FMS012	BeyoMag™磁分离架(12孔)	1个/袋
FMS024	BeyoMag™磁分离架(24孔)	1个/袋
FMS004	BeyoMag™磁分离架(4孔, 1.5ml/2ml, 蓝)	1个/盒
FMS008	BeyoMag™磁分离架(8孔, 1.5ml/2ml, 蓝)	1个/盒
FMS016	BeyoMag™磁分离架(16孔, 1.5ml/2ml, 蓝)	1个/盒
FMS154	BeyoMag™磁分离架(4孔, 15ml, 蓝)	1个/盒
FMS504	BeyoMag™磁分离架(4孔, 50ml, 蓝)	1个/盒
FMS009	BeyoMag™磁分离架(8孔, 1.5ml/2ml, 铝合金)	1个/盒
FMS015	BeyoMag™磁分离架(16孔, 1.5ml/2ml, 铝合金)	1个/盒
FMS025	BeyoMag™磁分离架(24孔, 1.5ml/2ml, 铝合金)	1个/盒
E6673	BeyoShaker™数字式翘板摇床	1套
E6800	BeyoVortex™基础型旋转混匀仪	1套