0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH)
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产品编号 ST046-10ml
数量
¥ 205.00
产品包装:
2ml 10ml
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      TCEP即TCEP-HCl,全称Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride,中文名为三(2-羧乙基)膦盐酸盐。分子式为C9H15O6P·HCl,分子量为286.65,CAS号51805-45-9。本产品为0.5M TCEP溶液,用NaOH调节pH值至6.8,常作为DTT的替代物用于蛋白上样缓冲液和其它还原试剂的配制。

图1. TCEP-HCl的化学结构式。

      TCEP是一种高效、无异味、不含硫醇基的水溶性还原剂,可选择性还原多肽或蛋白质中的二硫键。TCEP具有更佳的稳定性、更广的兼容性、更强的还原性、更好的选择性,而且由于不含巯基,因此在多数应用中不必去除,从而广泛应用于生物化学和分子生物学中,特别是在蛋白质化学、蛋白质组学中,是公认的DTT的良好替代物。
      TCEP对还原二硫键选择性极强,除半胱氨酸外,几乎不会与其它氨基酸有反应,并且能在更宽的pH值范围包括酸性条件下使用,从而有效减少酰胺键的水解。TCEP的反应活性温和、易溶、毒性小,且更容易操作,在酸性、碱性溶液中的稳定性都很好。
      TCEP使用范围广泛,无论是普通的SDS-PAGE中蛋白的还原,还是一些特殊的实验如固相金属离子亲和层析(IMAC)、质谱、Ni柱纯化等其它需要还原二硫键的实验,也特别适用于组氨酸标记蛋白纯化、马来酰亚胺偶联半胱氨酸残基反应,它能够预防半胱氨酸残基形成二硫键,但不像DTT或β-巯基乙醇本身易与马来酰亚胺反应。
      TCEP的特点有:无气味——与DTT和β-巯基乙醇不同,TCEP是无异味的,有助于创造更加健康的实验室环境;高效——5到50mM 的TCEP在数分钟内即可完全还原大多数多肽或蛋白的二硫键(与DTT等效);特异性——选择性的完全还原甚至最稳定水溶液中的烷基化二硫键;快速——在室温和pH5的条件下,不到五分钟即可还原蛋白的二硫键;稳定——耐空气氧化,无挥发性,与蛋白的其它功能基团不反应;通用性——可在广泛pH范围、盐、去垢剂、温度条件下还原多肽和蛋白;兼容性——不含巯基,因此在多数应用中不必去除还原试剂。
      TCEP与DTT主要特点的比较表格如下:

主要特点 TCEP DTT
气味 轻微的硫磺气味(臭味)
水溶解性 310g/L 50g/L
还原性 维持2-3周 维持3-7天
稳定性 无挥发性,耐空气氧化,基本不受金属离子影响,与蛋白的其它功能基团不反应 挥发性弱,尽量减少暴露在空气中的时间,在Ni2+存在下,快速氧化
pH工作范围 1.5-8.5 6.5-9.0
工作浓度 5-50mM (大多数体系) 1-100mM
Ni2+柱纯化His标签的蛋白 适用 不适用
马来酰亚胺标记蛋白反应 标记前不需要去除 标记前需要去除

      在SDS-PAGE电泳中,一般终浓度在25mM左右的TCEP即可足够还原蛋白样品。也可直接使用碧云天各类含TCEP的无气味的蛋白上样缓冲液(P0282P0286P0287P0288P0289P0292)。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
ST046-2ml 0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH) 1ml×2
ST046-10ml 0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH) 10ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃或4℃保存,至少1年有效。
注意事项:
      本产品用于蛋白变性时,建议95℃水浴或PCR仪加热5分钟,温度过高(如100℃)或时间过长(如超过15分钟),有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
      本产品在磷酸盐缓冲液中,尤其在中性或碱性磷酸盐缓冲液中很不稳定。因此若实验过程需将本产品配制在PBS缓冲液中使用,必须现配现用。
      大多数蛋白无需变性剂即可高效还原,但加入盐酸胍等变性剂有助于将内部二硫键暴露而易于和TCEP发生反应。
      不建议使用尿素作为变性剂,避免形成氰酸酯并与巯基反应。
      尽量防止金属接触TCEP溶液,否则会一定程度降低TCEP活性。在还原过程中向样品缓冲液中加入5至20mM EDTA有助于防止巯基被二价金属离子氧化,如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。
      还原后样品应尽快使用,长时间放置后会重新生成二硫化物。
      本产品在溶液中带电荷,因此不适用于等电聚焦(IEF)实验。
      TCEP对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.. 在不含DTT或β-ME的2X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(100mM Tris,20%甘油,4% SDS,0.005%溴酚蓝,pH6.8)中加入本产品, 至TCEP终浓度为50mM,吹打或斡旋混匀。
2. 将等体积的上述2X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液与蛋白提取液加入到新的离心管中并混匀,沸水浴中煮5min。
3. 样品冷却后,在离心机中瞬离,然后取上层溶液进行Western blot实验。
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