化学信息：
| 化学名 | [5-[2-[(2R,6S)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]-4-morpholin-4-ylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7-yl]-2-methoxyphenyl]methanol |
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| 简称 | KU0063794 | |
| 别名 |
Ku -0063794, Ku 0063794, Ku 63794, Ku-0063794, Ku-63794, Ku63794 |
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| 中文名 | N/A | |
| 化学式 | C25H31N5O4 | |
| 分子量 | 465.54 | |
| CAS号 | 938440-64-3 | |
| 纯度 | 98% | |
| 溶剂/溶解度 |
Water<1mg/ml; DMSO16mg/ml; Ethanol<1mg/ml |
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| 溶液配制 | 5mg加入1.07ml DMSO，或者每4.66mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF2807-10mM用DMSO配制。 |
生物信息：
| 产品描述 | KU-0063794是一种有效的，高度特异性的，作用于mTORC1和mTORC2的双重mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50约为~10nM；对PI3Ks没有作用。 | ||||
| 信号通路 | PI3K/Akt/mTOR | ||||
| 靶点 | mTORC1 | mTORC2 | － | － | － |
| IC50 | ~10nM | ~10nM | － | － | － |
| 体外研究 | 与mTOR抑制剂PP242相比，KU-0063794高特异性作用于mTOR，而对PI3Ks或其他76种激酶则无作用活性。30nM KU-0063794作用于HEK-293细胞，通过抑制疏水基团(Thr389)磷酸化，及随后的T-环残基(Thr229)磷酸化，而快速切除S6K1活性。300nM KU-0063794作用于IGF1刺激的血清饥饿处理的HEK-293细胞，抑制~90%S6K1活性。KU-0063794为100-300nM时，也完全抑制氨基酸诱导的S6K1和S6蛋白磷酸化。与S6K1类似，KU-0063794抑制mTORC1在Ser2448位点磷酸化，也抑制mTORC2在Ser22481位点磷酸化，这种作用存在剂量和时间依赖性。在血清存在时，或者IGF1刺激的情况下，KU-0063794抑制Akt活性，或者Akt在Ser473和Thr308(意外的)位点磷酸化，也抑制Akt底物PRAS40在Thr246位点，GSK3α/GSK3β在Ser21/Ser9位点及Foxo-1/3a在Thr24/Thr32位点磷酸化，以上作用存在剂量依赖性。KU-0063794而不是Rapamycin抑制SGK1活性和在Ser422位点磷酸化，也抑制其生理底物NDGR1，与抑制S6K1和Akt磷酸化程度相似，这种作用存在剂量依赖性，然而KU-0063794不抑制佛波酯诱导的ERK或RSK磷酸化和RSK激活。与Rapamycin相比，KU-0063794更有效诱导4E-BP1在Thr37，Thr46和Ser65位点完全去磷酸化。KU-0063794抑制野生型和mlST8-缺陷型MEFs细胞生长，也诱导细胞周期停在G1期，比Rapamycin效果更显著。 | ||||
| 体内研究 | N/A | ||||
| 临床实验 | N/A | ||||
| 特征 | N/A | ||||
相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
| 酶活性检测实验 | |
| 方法 | HEK-293细胞新鲜溶解在Hepes裂解液中。溶解产物(1-4mg)通过与5-20μl G蛋白的琼脂糖凝胶结合免疫前抗体IgG温育而预先清除。裂解抽提物与5-20μl G蛋白的琼脂糖凝胶结合的5-20μg抗Rictor或抗Raptor抗体的 免疫前抗体IgG温育。所有抗体共价结合到蛋白G蛋白琼脂糖凝胶上。在振动转载台上4℃下进行 免疫沉淀1小时。使用Hepes裂解液冲洗免疫沉淀物四次，随后使用Hepes激酶buffer冲洗两次。使用Raptor免疫沉淀物磷酸化S6K1，两次冲洗的初始步骤中，buffer含0.5M NaCl，确保最佳激酶活性。血清饥饿的HEK-293细胞中分离的GST-Akt1与PI-103(1μM进行1小时)温育。从血清饥饿的HEK-293细胞中纯化的GST-S6K1与Rapamycin(0.1μM进行1小时)温育。加入0.1mM ATP和10mM MgCl2，在不同浓度KU-0063794和GST-Akt1(0.5μg)或GST-S6K1(0.5μg)存在时，开始mTOR反应。反应在30℃下在振动转载台上进行30分钟，然后加入SDS样本缓冲液终止反应。反应混合物在0.22-μm-孔径大小Spin-X过滤器上过滤，样本进行电泳处理，然后使用指定抗体进行免疫印迹分析。 |
| 细胞实验 | |
| 细胞系 | 野生型和mlST8缺陷型MEFs |
| 浓度 | 溶于DMSO，终浓度为~3μM |
| 处理时间 | 24、48和72小时 |
| 方法 | 使用KU-0063794处理细胞24、48和72小时，每24小时更换一次培养基，加入新鲜溶解的KU-0063794。为了测量细胞生长，使用PBS冲洗细胞一次，然后与4% (v/v) 多聚甲醛在PBS混合15分钟。用水冲洗一次后，使用溶于10%乙醇的0.1%结晶紫对细胞染色20分钟，然后用水冲洗三次。使用0.5 ml 10% (v/v)乙酸从细胞中抽提结晶紫20分钟。然后洗脱液在水中按1：10稀释，然后在590nM处测量吸光值。为了测量细胞周期分布，通过胰蛋白酶化作用收集细胞，然后在PBS中冲洗一次，再悬浮于冰冻70% (v/v)乙醇中。细胞在PBS和1% (w/v) BSA中冲洗两次，再在PBS和含50g/ml碘化丙啶和50g/ml RNase A的0.1% (v/v) Triton X-100中染色20分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件检测细胞中DNA含量。在线性标度上测量红色荧光(585nM)，进行脉冲宽度分析用于排除双峰值。使用FlowJo软件测定细胞周期分布。 |
| 动物实验 | |
| 动物模型 | N/A |
| 配制 | N/A |
| 剂量 | N/A |
| 给药方式 | N/A |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| SF2807-10mM | KU0063794 (mTOR抑制剂) | 10mM×0.2ml |
| SF2807-5mg | KU0063794 (mTOR抑制剂) | 5mg |
| SF2807-25mg | KU0063794 (mTOR抑制剂) | 25mg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
