化学信息：
| 化学名 | 4-[(2,6-dichlorobenzoyl)amino]-N-piperidin-4-yl-1H-pyrazole-5-carboxamide |
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| 简称 | AT7519 | |
| 别名 |
AT 7519, AT-7519 |
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| 中文名 | N/A | |
| 化学式 | C16H17Cl2N5O2 | |
| 分子量 | 382.24 | |
| CAS号 | 844442-38-2 | |
| 纯度 | 98% | |
| 溶剂/溶解度 |
Water<1mg/ml; DMSO10mg/ml; Ethanol<1mg/ml |
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| 溶液配制 | 5mg加入1.31ml DMSO，或者每3.82mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC6655-10mM用DMSO配制。 |
生物信息：
| 产品描述 | AT7519是多种CDK抑制剂，作用于CDK1、2、4、6和9时，IC50为10-210nM，对CDK3作用效果稍弱，对CDK7几乎没有抑制活性。Phase 2。 | ||||
| 信号通路 | Cell Cycle | ||||
| 靶点 | CDK9/CyclinT | CDK5/p35 | CDK2/CyclinA | GSK-3β | CDK4/CyclinD1 |
| IC50 | <10nM | 13nM | 47nM | 89nM | 100nM |
| 体外研究 | AT7519是ATP竞争性CDK抑制剂，作用于CDK1时Ki值为38nM。 AT7519作用于所有非CDK激酶(除了GSK3β，IC50=89nM)没有抑制活性。AT7519作用于多种人类肿瘤细胞系，显示有效的抗增殖活性，IC50值从作用于MCF-7的40nM到作用于SW620的940nM，与抑制CDK1和CDK2一致。AT7519作用于多发性骨髓瘤(MM)细胞系48小时，诱导剂量依赖性毒性IC50值从0.5到2μM，最敏感细胞系为MM.1S(0.5μM)和U266(0.5μM)，最抵抗细胞为MM.1R(>2μM), 但是作用于外周血单个核细胞(PBMNC)不会诱导毒性。AT7519部分克服由IL6和IGF-1引起的增殖优势，且保护骨髓基质细胞(BMSCs)。AT7519诱导RNA pol II CTD在serine 2和serine 5位点快速去磷酸化，且作用于MM细胞通过产生毒性而抑制部分转录。AT7519通过下调GSK-3β磷酸化而诱导GSK-3β激活，也因为AT7519诱导凋亡，但是不抑制转录。 | ||||
| 体内研究 | AT7519按9.1mg/kg剂量作用于HCT116和HT29结肠癌移植瘤模型，每天两次，引起早期和晚期肿瘤衰退。AT7519按15mg/kg剂量作用于携带人类MM移植瘤的小鼠模型，抑制肿瘤生长，这和提高的caspase 3激活相关。 | ||||
| 临床实验 | N/A | ||||
| 特征 | N/A | ||||
相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
| 酶活性检测实验 | |
| 方法 | 辐射滤波器结合格板上进行CDK1、CDK2和GSK3-β激酶实验。在DELFIA格式板上测定CDK5，在ELISA格式板上测定CDKs 4和6。为了测定CDKs 1和2，相关的CDK和0.12μg/ml组蛋白H1在20mM MOPS，pH 7.2，25mM β-甘油磷酸盐，5mM EDTA，15mM MgCl2，1mM原钒酸钠，1mM DTT，0.1mg/ml BSA，45μM ATP(0.78Ci/mmol)和不同浓度AT7519的混合物中分别温育2或4小时。测定GSK3-β，相关的酶和5μM糖原合酶肽2在10mM MOPS pH7.0，0.1mg/ml BSA，0.001% Brij-35，0.5% 甘油，0.2mM EDTA，10mM MgCl2，0.01% β-巯基乙醇，15μM ATP(2.31Ci/mmol)和不同浓度AT7519的混合物温育3小时。加入过量正磷酸终止反应，使用Millipore MAPH滤板过滤。然后冲洗板，加入闪烁剂，在Packard TopCount上通过测定闪烁数而测量放射性。为了测定CDK5、CDK5/p35和1μM生物素化的组蛋白H1肽段(生物素-PKTPKKAKKL)在25mM Tris-HCl，pH 7.5，2.5mM MgCl2，0.025% Brij-35，0.1mg/ml BSA，1mM DTT，15μM ATP和不同浓度AT7519的混合物温育30分钟。使用EDTA终止反应，转移到 Neutravidin包被的板上，通过兔磷酸-cdk1底物单抗和DELFIA Eu-标记的二抗抗兔IgG，使用时间分辨荧光测定λex=335nm，λem=620nm处荧光值，而量化磷酸化底物。为了测定CDK 4和6，用GST-pRb769-921包被板，然后用Superblock阻断。CDK4或6在15mM MgCl2，50mM HEPES，pH 7.4，1mM DTT，1mM EGTA，pH 8.0，0.02% Triton X-100，2.5% DMSO和不同浓度AT7519混合物中温育，加入ATP开始反应。30分钟后，加入0.5M EDTA pH 8.0终止反应。冲洗板和一抗温育1小时，然后在 Superblock上稀释，随后用碱性磷酸酶链接抗兔二抗再处理1小时。使用Attophos系统进行板显影，然后在Spectramax Gemini计数板上读取荧光值。使用GraphPad Prism软件从复制曲线中计算IC50值。 |
| 细胞实验 | |
| 细胞系 | MM.1S，MM.1R，RPMI8226，U266，RPMI8266，RPMI-Dox40，OPM1细胞，原代mM细胞和PBMNCs |
| 浓度 | 溶于DMSO，浓度为10mM，终浓度为0.25-4μM |
| 处理时间 | 24或48小时 |
| 方法 | 37℃下不同浓度AT7519处理细胞24或48小时。通过测量MTT染料吸光度而测定细胞活性。通过测定摄入的3H胸腺嘧啶(3H-TdR)而测定DNA合成。使用Annexin V/PI染色测评凋亡。细胞是凋亡百分数是早期凋亡数(Annexin V-阳性细胞)和晚期凋亡数(Annexin V-阳性和PI-阳性细胞)总和。 |
| 动物实验 | |
| 动物模型 | 皮下注射MM.1S细胞的雄性SCID小鼠 |
| 配制 | 溶于0.9%盐水 |
| 剂量 | 15mg/kg/day |
| 给药方式 | 腹腔注射 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| SC6655-10mM | AT7519 (CDK抑制剂) | 10mM×0.2ml |
| SC6655-5mg | AT7519 (CDK抑制剂) | 5mg |
| SC6655-25mg | AT7519 (CDK抑制剂) | 25mg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
