化学信息：
| 化学名 | [4-[(E)-2-(1H-indazol-3-yl)ethenyl]phenyl]-piperazin-1-ylmethanone |
|
| 简称 | KW2449 | |
| 别名 |
KW 2449, KW-2449 |
|
| 中文名 | N/A | |
| 化学式 | C20H20N4O | |
| 分子量 | 332.4 | |
| CAS号 | 1000669-72-6 | |
| 纯度 | 98% | |
| 溶剂/溶解度 |
Water<1mg/ml; DMSO67mg/ml; Ethanol67mg/ml |
|
| 溶液配制 | 5mg加入1.5ml DMSO，或者每3.32mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC1090-10mM用DMSO配制。 |
生物信息：
| 产品描述 | KW-2449是一种多靶点抑制剂，最有效作用于Flt3，IC50为6.6nM，作用于Flt3、Bcr-Abl和Aurora A适度有效；对PDGFRβ、IGF-1R、EGFR没有抑制效果。Phase 1。 | ||||
| 信号通路 | Angiogenesis; Protein Tyrosine Kinase | ||||
| 靶点 | FLT3 (D835Y) | Abl (T315I) | FLT3 | Abl | FGFR1 |
| IC50 | 1nM | 4nM | 6.6nM | 14nM | 36nM |
| 体外研究 | KW-2449是FLT3、ABL、ABL-T315I和Aurora激酶的多激酶抑制剂，用于治疗白血病患者。KW-2449作用于携带FLT3突变的白血病细胞，通过抑制FLT3激酶，而有效抑制生长，导致磷酸化的-FLT3/STAT5下调，细胞周期停在G1期和细胞凋亡。KW-2449口服处理FLT3突变的移植瘤模型，显著抑制肿瘤生长，具有最低的骨髓抑制率。KW-2449作用于FLT3野生型人白血病，诱导磷酸化的组蛋白H3降低，细胞周期停在G2/M和细胞凋亡。KW-2449作用于抗Imatinib的白血病，通过同时下调BCR/ABL和Aurora激酶而释放阻力。人血浆蛋白，如α1-酸性糖蛋白，不会影响KW-2449的抑制活性。KW-2449作用于多种类型白血病，有效抑制生长。KW-2449作用于携带FLT3突变和抗Imatinib突变的白血病患者，具有显著活性，且临床研究也获得授权。KW-2449降低FLT3和STAT5的磷酸化程度，这种作用存在剂量依赖性。此外，KW-2449有效抑制ABL-T315I，IC50为4nM。另一方面，KW-2449即使浓度为1μM时，对PDGFRβ、IGF-1R、EGFR及多种丝/苏氨酸激酶没有作用效果。KW-2449作用于表达FLT3/ITD的白血病细胞和FLT3/KDM激活的以及过表达野生型FLT3的白血病细胞，都有效抑制生长。与抑制生长相一致，KW-2449作用于MOLM-13细胞，抑制FLT3(P-FLT3)及其下游分子磷酸-STAT5(P-STAT5)磷酸化，这种作用存在剂量依赖性。而且，KW-2449提高G1期百分数，而降低S期百分数导致凋亡细胞数增高。KW-2449可以使组成型活化的WT-FLT3激酶去磷酸化，而不抑制白血病细胞增殖。KW-2449迅速被吸收，并转化为一个主要的代谢产物M1。临床前期研究显示单胺氧化酶-B(MAO-B)和醛氧化酶使KW-2449转化为其主要代谢产物M1。KW-2449通过抑制FLT3/ITD而调节细胞毒性。KW-2449是FLT3抑制剂，诱导下游靶点STAT5受抑制。KW2449与HDACIs协同作用于Ph+ CML细胞，诱导凋亡，这种作用存在时间和浓度依赖性。KW2449作用于CML细胞，协同增强Vorinostat/SNDX275杀伤力。KW-2449对另外的抗IM Bcr/Abl+的白血病细胞具有活性。KW2449作用于nocodozole处理的K562细胞，适度降低组蛋白H3磷酸化，组蛋白是Aurora B活性指示剂。 | ||||
| 体内研究 | KW-2449口服处理给药MOLM-13移植瘤模型，处理14天，具有显著的抗癌效果，这种作用存在剂量依赖性。 | ||||
| 临床实验 | N/A | ||||
| 特征 | Investigated as a FLT3 inhibitor in clinical trials, with others in early development. | ||||
相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
| 酶活性检测实验 | |
| 方法 | 在PBS中冲洗白血病细胞，然后通过使细胞再悬浮在裂解液(20mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、1% Igepal、1mM EDTA、2mM NaVO4及完整蛋白酶抑制剂KW-2449)中溶解30分钟。抽提物在1.6×104g转速下离心，得到澄清，检测上清液测定蛋白。移除50μg等分样，作为全细胞裂解液，用于分析STAT5,剩下的用于与抗FLT3抗体进行免疫沉淀反应。加入抗FLT3抗体用于抽提，温育过夜，再加入蛋白A琼脂糖，再处理2小时。测定全细胞裂解液的SDS-PAGE凝胶和免疫沉淀同时进行。转移到Immobilon膜上，使用抗磷酸抗体(4G10)进行免疫印迹，用于测定磷酸化的FLT3；使用大鼠单克隆抗体作用于磷酸化的STAT5(Y694残基)测定全部细胞裂解物凝胶，然后剥离，使用抗FLT3抗体作为二次探针，用于测量全部FLT3。通过化学发光观察蛋白，使用Kodak BioMax XAR胶片曝光，显影，然后使用Bio-Rad GS800光密度计扫描。通过剂量反应曲线的线性回归分析，测定抑制50% FLT3或STAT5磷酸化所需的KW-2449浓度(IC50)。为了分析FLT3和STAT5，收集肝素化管中的外周血，在冰上迅速冷却。样本按900g转速在4℃下离心10分钟。移除血浆，冰冻在-80℃下储存。白细胞层小心转移到冰冻PBS中，分层到冰冻的Ficoll-Hypaque上，然后按600g转速在 4℃下离心5分钟。随后所有步骤在4℃下进行。收集单层细胞，在红血细胞裂解液(0.155M NH4Cl、0.01M KHCO3、0.1mM EDTA)，中快速清洗，然后再在PBS中洗一遍。然后溶解细胞，用于分析FLT3和STAT5。 |
| 细胞实验 | |
| 细胞系 | MOLM-13和RS4;11细胞 |
| 浓度 | 33nM、75nM、0.1μM、0.3μM、0.15μM |
| 处理时间 | 24、48和72小时 |
| 方法 | 与KW-2449在37℃下温育72小时后，通过3'-[1-(羰基苯胺)-3,4-四氮唑]-双(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠水合物法测定细胞活力使用细胞增殖试剂盒II测定存活细胞数。为了分析细胞周期，使用KW-2449处理 MOLM-13和RS4;11细胞。在37℃下温育24、48和72小时后，分析DNA含量。使用KW-2449或Imatinib处理24小时后，分析K562、TCC-Y和TCC/Ysr细胞周期分布。 |
| 动物实验 | |
| 动物模型 | CBySmn.CB17-Prkdsscid/J (BALB/C)小鼠，溶于100μl PBS的2×106 BV173/E255K/Luc cl4细胞注射到鼠尾部静脉 |
| 配制 | 溶于0.5%甲基纤维素400溶液 |
| 剂量 | 32mg/kg/day, 5 days/week |
| 给药方式 | 口服处理 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| SC1090-10mM | KW2449 (FLT3抑制剂) | 10mM×0.2ml |
| SC1090-5mg | KW2449 (FLT3抑制剂) | 5mg |
| SC1090-25mg | KW2449 (FLT3抑制剂) | 25mg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
