化学信息：
| 化学名 | 4-[4-[2-(difluoromethyl)benzimidazol-1-yl]-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl]morpholine |
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| 简称 | ZSTK474 | |
| 别名 |
ZSTK-474; ZSTK 474 |
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| 中文名 | － | |
| 化学式 | C19H21F2N7O2 | |
| 分子量 | 417.41 | |
| CAS号 | 475110-96-4 | |
| 纯度 | ≥98% | |
| 溶剂/溶解度 |
Water <1mg/ml; DMSO 21mg/ml; Ethanol <1mg/ml |
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| 溶液配制 | 5mg加入1.20ml DMSO，或者每4.17mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC0411-10mM用DMSO配制。 |
生物信息：
| 产品描述 | ZSTK474抑制I型PI3K亚型，在无细胞试验中IC50为37nM，对PI3Kδ作用最显著。Phase 1/2。 | ||||
| 信号通路 | PI3K/Akt Signaling | ||||
| 靶点 | PI3K | PI3Kα | PI3Kβ | PI3Kγ | PI3Kδ |
| IC50 | 37nM | 16nM | 44nM | 49nM | 4.6nM |
| 体外研究 | ZSTK474在1μM浓度下有效将PI3K活性降低为对照组水平的4.7%，而LY2194002仅将其活性降低为对照组的44.6%。ZSTK474抑制重组p110β，-γ和-δ活性，IC50分别为17nM，53nM和6nM。ZSTK474对一组39个人类癌细胞系表现出有效的抗增殖活性，平均GI50为0.32μM，比平均GI50分别为7.4μM和10μM的LY294002与wortmannin更有效。1μM ZSTK474治疗阻断小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)中血小板源生长因子诱导的胞膜边缘波动和PIP3产生。10μM ZSTK474诱导OVCAR3细胞凋亡，并诱导细胞周期完全的G1期阻滞，但是不引起A549细胞凋亡。0.5μM ZSTK474治疗显著减少磷酸化的Akt和GSK-3β水平，以及细胞周期蛋白D1蛋白质的表达。ZSTK474也会剂量依赖性抑制其他参与细胞增殖调节的下游信号组分，包括FKHRL1，FKHR，TSC-2，mTOR和p70S6K的磷酸化。ZSTK474在0.1μM下不抑制mTOR，甚至在100μM浓度下，ZSTK474仅抑制少于40%的mTOR活性。ZSTK474阻断人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中VEGF诱导的细胞迁移和管腔形成，并且抑制RXF-631L细胞中HIF-1α表达与VEGF分泌，表现出有效的体外抗血管生成活性。ZSTK474治疗抑制伴刀豆球蛋白A激活的T细胞中IFNγ和IL-17的产生，并通过成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)抑制增殖和PGE(2)产生。 | ||||
| 体内研究 | ZSTK474口服给药，剂量依赖性抑制皮下植入的小鼠B16F10黑色素瘤的生长，在第14天，100，200或400mg/kg的剂量分别产生28.5%，7.1%或4.9%的肿瘤消退，效果优于其他四种主要的抗癌药irinotecan，cisplatin，doxorubicin和5-fluorouracil，其使肿瘤消退的各自最大耐受剂量分别为96%，35.7%，24%或68.3%。400mg/kg ZSTK474治疗完全抑制小鼠体内A549，PC-3和WiDr的生长，并诱导A549移植瘤的消退。ZSTK474显著抑制RXF-631L异种移植模型中的肿瘤生长，与ZSTK474处理的小鼠体内微脉管数量显著减少相一致。在大鼠体内，ZSTK474口服给药改善佐剂性关节炎的发展。 | ||||
| 临床实验 | N/A | ||||
| 特征 | 首个用于体内的口服给药的PI3K抑制剂。 | ||||
相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
| 酶活性检测实验 | |
| 方法 | A549细胞在包含20mM Tris-HCl (pH 7.5)，150mM NaCl，5mM EDTA和1% Igepal CA-630的缓冲液中裂解，裂解物在4ºC下以20,000g裂解10分钟，上层清液用作细胞裂解物(蛋白质=2-4mg/ml)。为免疫沉淀PI3K，200μl细胞裂解物与抗p85多克隆抗体和蛋白G琼脂糖(5μl)共培养。PI3Kα，PI3Kβ和PI3Kδ能够被抗p85多克隆抗体免疫沉淀。包含免疫沉淀物的琼脂糖小球用缓冲液A(pH 7.5的20mM Tris-HCl，150mM NaCl，5mM EDTA和1% Igepal CA-630)清洗两次，用缓冲液B(500mM LiCl和100mM Tris-HCl，pH 7.5)清洗一次，蒸馏水清洗一次，缓冲液C(100mM NaCl和20mM Tris-HCl，pH 7.5)清洗一次。免疫沉淀物悬浮在20μl包含200μg/ml磷脂酰肌醇的缓冲液C中。混合物与逐渐增加浓度的ZSTK474在25ºC下预培养5分钟。加入[γ-32P]ATP(2μCi每个试验混合物；终浓度，20μM)和MgCl2(终浓度，20mM)起始反应。反应混合物在25ºC下培养20分钟。磷脂酰肌醇的磷酸化产物通过薄层色谱法分离，并通过放射自显影法可视化。将磷脂酰肌醇-3-磷酸盐区域从板上刮下，放射性使用液体闪烁光谱法测量。ZSTK474的抑制水平以每分钟计数所得的不包含ZSTK474的32P百分比确定。 |
| 细胞实验 | |
| 细胞系 | MCF-7，HT-29，HCT-116，OVCAR3，A549等 |
| 浓度 | 在DMSO中溶解，终浓度为~10μM |
| 处理时间 | 48小时 |
| 方法 | 细胞在逐渐增加浓度的ZSTK474下暴露48小时。细胞增殖的抑制使用磺酰罗丹明B测定法通过测量总细胞蛋白的改变进行评估。细胞凋亡使用流式细胞术通过染色质凝聚测定。对于染色质凝聚试验，细胞用Hoechst 33342着色，并通过荧光显微法检查。ZSTK474诱导的形态学改变，比如染色质的凝聚，表明了细胞凋亡。对于流式细胞术分析，采集细胞，用冰浴PBS清洗，并固定在70%乙醇中。然后细胞再次用冰浴PBS清洗，用RNase A(500μg/ml)在37ºC下处理1小时，并用碘化丙啶(25μg/ml)着色。细胞的DNA含量使用流式细胞仪分析。 |
| 动物实验 | |
| 动物模型 | 皮下注射B16F10细胞的雄性 BDF1小鼠，皮下接种A549，PC-3或WiDr细胞的雌性BALB/c裸鼠 |
| 配制 | 悬浮在含5%羟丙甲纤维素的水中，成固态分散体 |
| 剂量 | ~400mg/kg/day |
| 给药方式 | 口服 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| SC0411-10mM | ZSTK474 (PI3K抑制剂) | 10mM×0.2ml |
| SC0411-5mg | ZSTK474 (PI3K抑制剂) | 5mg |
| SC0411-25mg | ZSTK474 (PI3K抑制剂) | 25mg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
