碧云天研发的葡萄糖检测试剂盒(GOD/POD显色法),即Glucose Colorimetric Assay Kit (GOD/POD Method),也称Glucose Assay Kit (Colorimetric),是一种基于葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase, GOD)和过氧化物酶(Peroxidase, POD)的催化反应,通过检测吸光度,快速、高灵敏地对血清、血浆、尿液等生物体液、组织、细胞以及组织或细胞培养上清、饮料等样品中葡萄糖含量进行高灵敏度检测的试剂盒。
葡萄糖(Glucose),也被称为Dextrose或Grape sugar,被认为是自然界中分布最广且最为重要的一种单糖。葡萄糖是一种多羟基醛,分子式为C6H12O6,是饮食来源的三种主要单糖之一,可以被直接吸收并进入血液,是人体能量代谢和维持生命所必需的营养物质之一,对维持机体代谢与内环境稳态有非常重要的作用[1]。另外两种饮食来源的主要单糖是果糖(Fructose)和半乳糖(Galactose)。天然的葡萄糖均为右旋即D型,即D-Glucose。葡萄糖是生物体重要的能量来源和代谢中间产物。葡萄糖一方面是光合作用的主要产物[2],另一方面也是呼吸反应的主要底物。在呼吸反应中,葡萄糖通过一系列酶促反应氧化生成二氧化碳和水,同时生成重要的能量分子ATP[3, 4] 。由于葡萄糖在能量代谢方面的重要性,血糖水平已经成为多种代谢疾病的重要诊断指标。病理性高血糖与许多疾病相关,如糖尿病、甲亢以及垂体和肾上腺亢进,而病理性低血糖常见于胰岛素分泌相关的肿瘤、黏液性水肿、垂体及肾上腺功能减退症等疾病。同时细胞内的葡萄糖水平也是监测细胞代谢状态的一个重要指标[5, 6]。
本试剂盒的检测原理请参考图1。葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)的催化作用下和氧气发生反应,生成D-葡萄糖酸(Gluconic acid)和H2O2。生成的H2O2在过氧化物酶(Peroxidase, POD)的作用下与苯酚(Phenol)和4-氨基安替比林(4-Aminoantipyrine)生成红色的醌亚胺(Quinoneimine),再通过检测红色醌亚胺在510nm的吸光度来最终计算样品中葡萄糖的含量。吸光度与样品中葡萄糖的含量成正比。
图1.碧云天葡萄糖检测试剂盒(GOD/POD显色法) (S0202)检测原理图。
本试剂盒检测灵敏度高,线性范围宽,样品用量少。相较于葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法) (S0201),本试剂盒的检测灵敏度更高,检测方法更为灵活。本试剂盒在样品体积为40µl时,可以检测浓度低至0.01mg/ml的葡萄糖,在0.01-0.4mg/ml (即0.056-2.22mM)浓度范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了葡萄糖标准溶液,可以通过绘制标准曲线(图2),计算出样品中的葡萄糖含量。如果样品的用量较少或者含量较低,推荐使用检测灵敏度更高的Amplex Red葡萄糖检测试剂盒(S0343)。
图2.碧云天葡萄糖检测试剂盒(GOD/POD显色法) (S0202)检测葡萄糖标准品的标准曲线。40μl不同浓度的葡萄糖标准品,与160μl Glucose检测工作液混匀后,40ºC避光反应10分钟,测定A510。在0.01-0.4mg/ml (0.056-2.22mM)浓度范围内有良好的线性关系。实际检测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品,也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测,通用性强;而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。
本试剂盒应用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液等生物体液,细胞培养上清、组织、细胞或饮料样品等的检测,全程约20分钟即可完成。本试剂盒不仅适合少量样品的检测,也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。
按照使用说明操作,用于96孔板检测时,本试剂盒小包装可以进行100次检测,中包装可以进行500次检测。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
S0202S-1 | BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay | 20ml |
S0202S-2 | Glucose Assay Buffer | 50ml |
S0202S-3 | Glucose Assay Reagent A | 400μl |
S0202S-4 | Glucose Assay Reagent B | 100μl |
S0202S-5 | Enzyme Solution | 100μl |
S0202S-6 | Glucose Standard (4mg/ml) | 200μl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
S0202M-1 | BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay | 100ml |
S0202M-2 | Glucose Assay Buffer | 250ml |
S0202M-3 | Glucose Assay Reagent A | 2ml |
S0202M-4 | Glucose Assay Reagent B | 500μl |
S0202M-5 | Enzyme Solution | 500μl |
S0202M-6 | Glucose Standard (4mg/ml) | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,一年有效。其中Glucose Assay Reagent A须避光保存。
注意事项:新配制的Glucose检测工作液为浅黄色或浅粉色,长期放置,试剂颜色可能会加深变成深粉色,此时应该弃用,否则可能会对检测产生干扰,因此建议尽量现配现用。
检测样品中若含有还原性物质如维生素C、谷胱甘肽和尿酸等会竞争消耗葡萄糖氧化生成的过氧化氢,使测定结果偏低。此时推荐使用不受还原性物质影响的葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法) (S0201)。
与国内外同类产品相比,本试剂盒可设置背景对照,避免样品中可能的H2O2对结果的干扰。
血清、血浆等样品如果在4ºC保存,保存的时间不得超过2周,否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜-20ºC保存,-80ºC保存更佳。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Samples | 1 | 10 | 20 | 50 |
Glucose Assay Buffer (µl) | 154 | 1540 | 3080 | 7700 |
Glucose Assay Reagent A (µl) | 4 | 40 | 80 | 200 |
Glucose Assay Reagent B (µl) | 1 | 10 | 20 | 50 |
Enzyme Solution (μl) | 1 | 10 | 20 | 50 |
Working Solution (µl) | 160 | 1600 | 3200 | 8000 |
样本 | 人 | 实验动物 |
血浆 | 空腹:3.9-6.1mmol/L (70-110mg/dl) 餐后1小时:6.7-9.4mmol/L 餐后2小时:≤7.8mmol/L 血糖正常值正常人在餐后2小时的全血血糖不超过5.6mmol/L (100mg/dl),血浆血糖不超过6.4mmol/L (115mg/dl)。若餐后2小时的全血血糖≥7.8mmol/L (140mg/dl),血浆血糖≥8.9mmol/L (160mg/dl)时,可诊断为糖尿病 |
ICR小鼠空腹血糖正常参考值范围: 3.5-7.1mmol/L,高血糖模型:>11.1mmol/L C57小鼠禁食2h-4h后血糖值:5-7.5mmol/L,受到应激后血糖会升高到8-10mmol/L |
尿液 | 正常人尿液中可有微量葡萄糖,尿内排出量应<2.8mmol/24h (<0.5g/24h),浓度为0.1-0.8mmol/L(1-15mg/dl) 尿糖阴性值范围:0.7-0.52mmol (31-93mg)/日 |
尿液中葡萄糖排出量正常范围:1.98-3.09mg/24h |
肝脏 | — | 家兔 213.1±15.3μg 葡萄糖/mg 蛋白 小鼠肝脏组织中的含量为80-106μg 葡萄糖/mg 蛋白 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
S0201 | 葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法) | 200次/1000次 |
S0202 | 葡萄糖检测试剂盒(GOD/POD显色法) | 100次/500次 |
S0343S | Amplex Red葡萄糖检测试剂盒 | 100次 |