碧云天研发生产的活性氧检测试剂盒(CM-H2DCFDA) (Reactive Oxygen Species Assay Kit with CM-H2DCFDA,也称ROS Assay Kit with CM-H2DCFDA),是一种利用荧光探针CM-H2DCFDA进行活性氧检测的试剂盒。
本试剂盒是活性氧检测试剂盒(S0033)的升级产品。活性氧检测试剂盒(S0033)是一种利用荧光探针DCFH-DA(即H2DCFDA)进行活性氧检测的试剂盒,而CM-H2DCFDA是H2DCFDA的氯甲基衍生物(Chloromethyl derivative),也称CM-DCFH-DA,其在活细胞中比H2DCFDA具有更好的滞留率,因此荧光信号更强,且更适合细胞内活性氧的相对较长时间的研究。CM-H2DCFDA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成CM-H2DCF (也可称为CM-DCFH)。而CM-H2DCF不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内[1-2]。CM-H2DCF的氯甲基可与细胞内谷胱甘肽或其它巯基发生反应从而具有更好的细胞内滞留性,后续细胞内的活性氧可以氧化无荧光的CM-H2DCF生成有荧光的CM-DCF [3-6],检测CM-DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup,以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(Compound mixture),浓度为50mg/ml。使用本试剂盒检测细胞内活性氧的效果请参考图1和图2。
图1.碧云天活性氧检测试剂盒(CM-H2DCFDA) (S0035)检测L929 (小鼠成纤维细胞)细胞内活性氧的效果图。L929细胞装载CM-H2DCFDA探针后用50μg/ml Rosup处理30分钟,随后PBS洗涤一次后用荧光显微镜(图A)和荧光酶标仪(图B)检测。正常的L929细胞中探针几乎未被氧化成荧光化合物,细胞中的绿色荧光非常弱;使用活性氧阳性对照试剂Rosup处理使细胞内活性氧生成大幅增加,CM-H2DCFDA与活性氧反应,细胞中的绿色荧光显著增强。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
图2.碧云天活性氧检测试剂盒(CM-H2DCFDA) (S0035)检测NRK-52E (大鼠肾小管上皮细胞)细胞活性氧的流式细胞检测效果图。NRK-52E细胞不处理或用阳性对照试剂Rosup处理后,使用本试剂盒进行染色并进行流式细胞检测。正常的NRK-52E细胞中探针未被氧化成荧光化合物,细胞中的绿色荧光非常弱;使用活性氧阳性对照Rosup处理使细胞内活性氧生成大幅增加,CM-H2DCFDA与活性氧反应,细胞中的绿色荧光显著增强。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
本试剂盒本底低,灵敏度高,线性范围宽,使用便捷。
本试剂盒小包装和中包装,6孔板每孔检测体系的体积为1ml时,分别可以检测20次和100次;96孔板每孔检测体系为100μl时,分别可以检测200次和1000次。如果用于流式细胞仪,每个样品检测体系体积为0.5ml时,分别可以检测40次和200次。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
S0035S-1 | CM-H2DCFDA (5mM) | 20µl |
S0035S-2 | 活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/ml) | 200µl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
S0035M-1 | CM-H2DCFDA (5mM) | 100µl |
S0035M-2 | 活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/ml) | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,一年有效。其中CM-H2DCFDA (5mM)须避光保存。
注意事项:探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。
尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。
荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板,推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C2055 | BODIPY 500/510 C1, C12(脂肪酸绿色荧光探针) | 1mg/5mg/25mg |
S0019 | DAF-FM DA (NO荧光探针) | >100次/>500次 |
S0033 | 活性氧检测试剂盒 | >100次/>500次 |
S0035 | 活性氧检测试剂盒(CM-H2DCFDA) | 20-200次/100-1000次 |
S0038 | 过氧化氢检测试剂盒 | 150次 |
S0043 | 脂质过氧化检测试剂盒(BODIPY 581/591 C11) | 100-1000次/500-5000次 |
S0051 | 过氧化氢酶检测试剂盒 | 100次 |
S0060 | 超氧化物检测试剂盒 | 100次 |
S0061 | 线粒体超氧化物检测试剂盒(MitoSOX Red) | 20-200次/100-1000次 |
S0063 | Dihydroethidium (超氧化物阴离子荧光探针) | 5mg |
S0064S | 超氧阴离子活性氧检测试剂盒(DHE) | 100-1000次 |
S0067-100μg | SOSG (单线态氧绿色荧光探针) | 100μg |
S0068S | 单线态氧检测试剂盒(SOSG) | 30-300次 |
S0131 | 脂质氧化(MDA)检测试剂盒 | 100/500次 |