碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒(DAF-FM DA) (Nitric Oxide Assay Kit with DAF-FM DA)，是一种以DAF-AM DA为荧光探针，快速高灵敏地检测培养的细胞内一氧化氮含量变化的试剂盒。本试剂盒可使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测设备进行检测。
一氧化氮(Nitric oxide)是一种无机氮氧化合物，作为一种反应性自由基，因其分子量小且具有亲脂性，可快速扩散通过生物膜，可作为信号分子将一个细胞产生的信号传递给周围的细胞，具有舒张血管、调节免疫、抑制炎症反应、参与调节神经元兴奋性和神经递质的释放、DNA的修复和保护等功能，在神经系统、免疫系统、心血管系统、细胞凋亡等重要生理过程中发挥着不可或缺的作用[1-3]。
DAF-FM DA，即3-Amino,4 aminomethyl 2',7'-difluorescein, diacetate，也称DAF-FM diacetate或4-Amino,5 aminomethyl-2',7'-difluorescein, diacetate。DAF-FM DA是新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针，比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 diacetate有多方面的改进。首先，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，最后和一氧化氮反应形成的荧光产物受pH值的影响小，在pH值大于5.5时不受pH值的影响。其次，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，前者产生的荧光更加稳定，不容易淬灭，这样更加便于检测。另外，DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比，前者对一氧化氮的检测灵敏度更高，相同条件下检测灵敏度可以提高接近2倍，最低检测浓度可以达到3nM [4,5]。
本试剂盒检测一氧化氮的原理如图1所示。DAF-FM DA可以穿过细胞膜(Cell-permeable)，进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM。DAF-FM本身仅有很弱的荧光，但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光，激发波长为495nm，发射波长为515nm。任何可以检测Fluorescein绿色荧光的仪器，包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于本荧光探针的检测。
图1.碧云天一氧化氮检测试剂盒(DAF-FM DA) (S0020)检测原理图。
本试剂盒提供的DAF-FM DA为5mM储存液。DAF-FM DA的终浓度通常为1-10μM，最优先的推荐终浓度为5μM。
本试剂盒提供了诱导细胞产生一氧化氮的阳性对照试剂NOup。本试剂盒试剂盒提供的NOup是一种200X的混合物(Compound mixture)，推荐终浓度为0.5-2X，最优先的推荐终浓度为1X。同时，本试剂盒提供了检测缓冲液，使用更便捷。使用本试剂盒检测NRK-52E (大鼠肾小管上皮细胞)细胞内一氧化氮的效果参考图2。
图2.碧云天一氧化氮检测试剂盒(DAF-FM DA) (S0020)检测NRK-52E (大鼠肾小管上皮细胞)一氧化氮的效果图。NRK-52E细胞不处理或用阳性对照试剂NOup处理后，使用本试剂盒和Hoechst 33342进行染色。正常的NRK-52E细胞中DAF-FM DA被细胞内的酯酶催化形成DAF-FM，细胞中的绿色荧光非常弱；使用一氧化氮阳性对照试剂NOup处理使细胞内一氧化氮水平快速升高，DAF-FM与一氧化氮反应，细胞中的绿色荧光显著增强。蓝色荧光为Hoechst 33342染色的细胞核。本试剂盒中不提供Hoechst 33342，如有需要，可根据实际情况向碧云天选购Hoechst 33342染色液相关产品(C1022/C1025-C1029)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
本试剂盒适合用于检测细胞内的一氧化氮水平，可以进行实时检测。如果收集细胞后再装载探针，通常小包装至少可以检测40个样品，中包装至少可以检测200个样品。6孔板每孔检测体系的体积为1ml时，小包装和中包装分别约可以检测20和100次。96孔板每孔检测体系为100μl时，分别可以检测200次和1000次。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| S0020S-1 | DAF-FM DA (5mM) | 20µl |
| S0020S-2 | 检测缓冲液 | 50ml |
| S0020S-3 | NOup (200X) | 20µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| S0020M-1 | DAF-FM DA (5mM) | 100µl |
| S0020M-2 | 检测缓冲液 | 250ml |
| S0020M-3 | NOup (200X) | 100µl |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，一年有效。其中DAF-FM DA (5mM)须避光保存。
注意事项：DAF-FM DA (5mM)和NOup (200X)第一次使用时请分装成小包装后-20ºC保存，避免反复冻融。
荧光探针应随用随配。配制好的DAF-FM DA染色工作液应立即使用，不能以后再用。
DAF-FM DA (5mM)在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。
BSA和酚红(Phenol red)对DAF-FM DA的检测有干扰，需避免。
荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
本试剂盒仅限于进行存活的细胞或组织的检测，不可用于固定或冻存的细胞或组织样品的检测。
检测缓冲液经过过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能影响染色效果。如果检测缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。
荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板，推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| S0006 | L-NAME (eNOS抑制剂) | 200mg |
| S0007 | L-Canavanine (iNOS抑制剂) | 20mg |
| S0008-100mg | SMT (iNOS抑制剂) | 100mg |
| S0008-1g | SMT (iNOS抑制剂) | 1g |
| S0009 | 1400W (iNOS抑制剂) | 2mg |
| S0010 | Spermidine (nNOS抑制剂) | 200mg |
| S0011 | L-NMMA (总NOS抑制剂) | 5mg |
| S0012 | L-Arginine (NO前体) | 5g |
| S0015 | SNP (NO供体) | 1g |
| S0016 | L-Citrulline (NO中间体) | 1g |
| S0017 | Hemoglobin (NO清除剂) | 1g |
| S0019S | DAF-FM DA (NO荧光探针) | >100次 |
| S0019M | DAF-FM DA (NO荧光探针) | >500次 |
| S0020S | 一氧化氮检测试剂盒(DAF-FM DA) | >100次 |
| S0020M | 一氧化氮检测试剂盒(DAF-FM DA) | >500次 |
| S0021S | 一氧化氮检测试剂盒 | 500次 |
| S0021M | 一氧化氮检测试剂盒 | 2500次 |
| S0023 | 总一氧化氮检测试剂盒 | 50次 |
| S0024 | 总一氧化氮检测试剂盒 | 200次 |
| S0025 | 一氧化氮合成酶检测试剂盒(荧光法) | 100次 |
| S1546 | Carboxy-PTIO (一氧化氮清除剂) | 5mg |
| S1547 | Carboxy-PTIO (一氧化氮清除剂) | 50mg |
| S3090 | 细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用) | 100ml |
| ST1555-500mg | L-NAME (≥98%, Reagent grade) | 500mg |
| ST1555-2g | L-NAME (≥98%, Reagent grade) | 2g |
| ST1555-10g | L-NAME (≥98%, Reagent grade) | 10g |
