RNase R
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产品编号 R7092S
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¥ 798.00
产品包装:
500U 2KU 10KU
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RNase R (Ribonuclease R)是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于大肠杆菌的Mg2+依赖的3'→5'核糖核酸外切酶。RNase R能消化线性RNA (Linear RNA),但不能消化环状RNA (Circular RNA, circRNA)、套索RNA (Lariat RNA)、3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA以及具有复杂二级结构的tRNA、5S RNA等[1, 2]。

RNase R常用于消化除去线性RNA,以获得环状RNA (也称环形RNA)、内含子套索(Intron lariat)等非线性RNA。RNase R为环状RNA的研究提供了极大的便利,也可以给研究RNA剪接(RNA splicing)带来很大的便利。套索RNA是在pre-mRNA的剪接内含子过程中产生的,经RNase R消化,可以从总RNA中被分离出来而用于后续研究。

碧云天生产的RNase R不能消化环状RNA但可以消化线性RNA的效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的R7092 RNase R可以消化线性RNA但不会消化环状RNA的效果图。在20µl反应体系中含20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM MgCl2和100mM KCl,以长度为22nt的等摩尔数(4pmol,约0.03μg)的线性或环状RNA作为底物,并加入图中指定量的本产品或国外L公司(Competitor)的RNase R。37℃孵育30min,70℃孵育10min终止反应。随后加入4μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),95℃变性5min,然后取出15μl进行7M Urea 15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(室温条件下用0.5X TBE作为电泳液,180V电泳90min,NA-Red溶液(1000:1) (D0128/D0130)室温染色10min,拍照观察结果)。如图所示,本产品与国外L公司的产品相比,具有类似的消化效果。图中效果仅供参考,在不同实验条件下获得的效果可能会有所不同,图中效果仅供参考。

用途:环状RNA研究,环状RNA中去除线性RNA,可变剪接研究,内含子套索序列的分析和鉴定等。

来源:由大肠杆菌表达,表达基因为E.coli RNase R基因。

活性定义:One unit converts 1μg of poly-r(A) into acid-soluble nucleotides in 10 minutes at 37℃ in 20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM KCl and 0.1mM MgCl2

纯度:不含DNase,不含其它RNA内切酶和外切酶活性。

酶储存溶液:50mM Tris-HCl (pH7.5 @25℃), 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100。

10XReaction Buffer:200mM Tris-HCl (pH8.0 @25℃), 1M KCl, 1mM MgCl2.

失活或抑制:70℃加热10分钟可使RNase R失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R7092S-1 RNase R (20U/µl) 25µl
R7092S-2 10X RNase R Reaction Buffer 0.5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7092M-1 RNase R (20U/µl) 100µl
R7092M-2 10X RNase R Reaction Buffer 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7092L-1 RNase R (20U/µl) 500µl
R7092L-2 10X RNase R Reaction Buffer 10ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少一年有效。

注意事项:

RNase R需要适当的镁离子浓度(0.1-1.0mM)才能发挥活性;反应体系中存在EDTA等可以螯合镁离子的螯合剂时,会显著降低RNase R活性。有必要时,可以考虑额外添加MgCl2使反应体系中游离的镁离子浓度至少达到0.1mM以上,以确保螯合剂不会螯合镁离子而影响酶活性。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.RNase R的消化反应。
a.参考下表在冰上配制如下反应体系:
Reagent Volume/Concentration
RNA <5µg >5µg
10X RNase R Reaction Buffer 2µl 5µl
RNase R (20U/µl) 1-3U/µg RNA 1-3U/µg RNA
DEPC-treated Water up to 20µl up to 50µl
b.反应条件:37℃反应10-30min,70℃灭活10min。
注:RNase R的用量和反应体系的体积需要根据具体情况,通过实验进行摸索调整。
2.RNase R消化反应后,反应体系中环状RNA等的纯化回收。
a.苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀纯化回收环状RNA等。
(a)加入Nuclease-free Water将反应体积放大到180μl,再加入20μl 3M醋酸钠(pH5.2)或20μl 5M醋酸铵,充分混匀。加入等体积的苯酚/氯仿混合液(1:1)抽提一次(剧烈Vortex 20-30s,随后12000rpm离心5-10min取上清。
(b)加入双倍体积的无水乙醇沉淀RNA,在-20℃至少孵育30分钟。随后12000rpm 4℃离心5-10min沉淀RNA。
(c)弃上清,用约500μl预冷的70%乙醇洗涤沉淀,以充分去除盐分。
(d)用DEPC-treated Water (R0021/R0022)重悬并溶解RNA,在-80℃储存。
b.使用RNA纯化柱或RNA纯化磁珠进行纯化回收。经过RNase R消化后的产物可以在70℃孵育10 min使酶失活后,通常无须进行纯化,就可以直接进行反转录,用于后续的RT-PCR、qPCR等。
参考文献:
1. Suzuki, H. et al., Nucl Acids Res. 2006; 34(8):e63.
2. Vincent, H.A. and Deutscher, M.P., J Biol Chem. 2006; 281(40):29769.
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