碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase，即E. coli Poly(A)聚合酶，也称E. coli PAP、PAP酶、Poly(A)加尾酶或PolyA加尾酶，能以不依赖于模板的方式催化由ATP转化成的AMP添加到单链RNA的3’末端，以形成Poly(A)尾。E. coli Poly(A)聚合酶能以各种单链RNA作为底物RNA，但双链RNA及过短的寡核苷酸不推荐作为该反应的RNA底物，并且DNA不能作为该反应的底物。实测15nt合成的RNA完全可以作为E. coli Poly(A) Polymerase的底物，在ATP存在时催化形成Poly(A)尾的。E. coli Poly(A) Polymerase催化的Poly(A)加尾反应只能使用ATP，而不能使用ADP或dATP。另外，使用CTP和UTP时，其掺入量不足使用ATP时的5%；而使用GTP时，其完全不能添加到RNA的3'末端。

碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase对单链RNA加Poly(A)尾的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase与同类产品(Competitor)对单链RNA加Poly(A)尾的对比效果图。在20µl反应体系(50mM Tris-HCl, pH8.1, 250mM NaCl, 1mM ATP, 10mM MgCl₂)中，加入人工合成的0.5µg 22nt的单链RNA，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的E. coli Poly(A) Polymerase，37℃孵育30min，65℃孵育20min终止反应。取出5μl反应后的产物，加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，95℃变性3min，然后进行含7M Urea的15%聚丙烯酰胺凝胶电泳。室温条件下用1X TBE作为电泳液，180V电泳90min，NA-Red (D0128) 1:1000稀释后室温染色30min，然后拍照观察。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的对单链RNA加Poly(A)尾的效果。

用途：用放射性同位素标记的ATP或虫草素(cordycepin)标记RNA；为RNA添加Poly(A)尾，用于反转录后克隆或亲和纯化；增加mRNA的稳定性，从而提高转染至真核细胞中的RNA的翻译效率。

来源：重组E. coli菌株，携带克隆自大肠杆菌的Poly(A)聚合酶基因。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 1nmol of AMP into RNA in a 20µl volume in 10 minutes at 37℃.

纯度：不含DNase、RNase和磷酸酯酶。

酶储存液：20mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 500mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100.

10X Reaction Buffer：500mM Tris-HCl (pH8.1, 25℃), 2.5M NaCl, 100mM MgCl₂.

失活或抑制：加入EDTA至终浓度为10mM，或65℃加热20min。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R7070S-1	E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)	20µl
R7070S-2	10X PAP Reaction Buffer	50µl
R7070S-3	10mM ATP	50µl
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
R7070M-1	E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)	100µl
R7070M-2	10X PAP Reaction Buffer	250µl
R7070M-3	10mM ATP	250µl
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
R7070L-1	E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)	500µl
R7070L-2	10X PAP Reaction Buffer	1.25ml
R7070L-3	10mM ATP	1.25ml
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
R7070XL-1	E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)	2ml
R7070XL-2	10X PAP Reaction Buffer	5ml
R7070XL-3	10mM ATP	5ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，至少两年有效。

注意事项：

10X PAP Reaction Buffer中不包含ATP。

E. coli Poly(A) Polymerase的用量主要影响目的产物的长度，可以根据所需目的产物的长度适当调整酶的用量，如果想得到长度较长的产物可以适当加大酶的用量或延长反应时间。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.参考下表在冰浴中设置反应体系。参考下表20μl反应体系中加Poly(A)尾的RNA底物量可以高达10μg，并且可根据实验需要按比例放大反应体系。在Poly(A)加尾反应中，加尾的长度取决于RNA 3’-OH末端的摩尔浓度、反应时间、酶量和ATP浓度。可以通过更改一个或多个因素来调整加尾的长度。按照如下的推荐反应体系，在37℃孵育30min，加Poly(A)尾长度可以超过100个碱基。

Reagent	Volume	Final Concentration
DEPC-treated Water	(14.5-x)µl	-
10X PAP Reaction Buffer	2µl	1X
10mM ATP	2µl	1mM
RNase Inhibitor (40U/µl)	0.5µl	1U/µl (Optional)
RNA	xµl	0.05-0.5µg/µl
E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl)	1µl	0.25U/µl
Total Volume	20µl	-

注1：由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。
注2：用于加尾反应的RNA在使用前应进行适当的纯化，并溶解于nuclease free water中，且溶液中应不含EDTA和盐分。
注3：如果较难确保比较严格的RNase-free，推荐在上述反应体系中添加0.5µl RNase Inhibitor (R0102)，以提高溶液中RNA的稳定性。
2.加尾反应：37℃孵育30min。
3.反应终止：加入EDTA至终浓度为10mM，或65℃加热20min以终止反应。
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