T3 RNA Polymerase,即T3 RNA聚合酶,是一种高度特异识别T3启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶。T3 RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA T3 启动子下游NTP的掺入,合成与T3启动子下游的模板DNA互补的RNA。
特点:T3 RNA Polymerase不仅可以进行常规的RNA合成,还可以识别修饰的NTP,例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP,可以用于各种标记RNA的合成。同时对于T3启动子有高度的特异性。
碧云天生产的T3 RNA Polymerase以带有T3 Promoter的线性化质粒DNA为模板进行转录时的效果参见图1。
图1. 碧云天生产的T3 RNA Polymerase与同类产品(Competitor)以带有T3 Promoter的线性化质粒DNA为模板进行体外转录时的效果图。在20µl反应体系(40mM Tris-HCl, pH7.9, 2mM Spermidine, 6mM MgCl2, 1mM DTT)中,加入0.2μg线性化质粒DNA,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的T3 RNA Polymerase,37℃孵育2h,70℃孵育10min终止反应,加入2U DNase I (D7073),37℃孵育15min消化模板DNA,得到的RNA转录产物为221nt。取出5μl反应产物,加入5μl 2X RNA Loading Buffer,70℃变性10min,然后进行1%琼脂糖凝胶电泳,用1X TAE作为电泳液,170V电泳5min,染色后拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有相近或略优的转录效果。
用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:杂交探针,基因组DNA序列分析,核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay),反义RNA合成,作为体外翻译的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用,核酸扩增分析,siRNA、miRNA等小RNA。
来源:由大肠杆菌表达,表达基因为嗜菌体T3 RNA Polymerase基因。
活性定义:37℃ 60分钟内,催化1 nmol AMP 掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl (pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,0.6MBq/ml [3H]-ATP,20µg/ml plasmid DNA containing the specific T3 RNA Polymerase promoter sequence。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:50mM Tris-HCl (pH7.9, 25℃), 100mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100.
Transcription Buffer (10X):400mM Tris-HCl (pH7.9, 25℃), 20mM spermidine, 60mM MgCl2, 10mM DTT.失活或抑制:70℃加热10分钟可使T3 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使T3 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T3 RNA Polymerase的活性。
T3 consensus promoter sequence如下,其中的G为转录的第一个碱基。
AATTAACCCTCACTAAAGGGAGA
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7009S-1 | T3 RNA Polymerase (50U/µl) | 20µl |
R7009S-2 | 10X T3 Transcription Buffer | 25µl |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7009M-1 | T3 RNA Polymerase (50U/µl) | 100µl |
R7009M-2 | 10X T3 Transcription Buffer | 120µl |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7009L-1 | T3 RNA Polymerase (50U/µl) | 500µl |
R7009L-2 | 10X T3 Transcription Buffer | 600µl |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7009XL-1 | T3 RNA Polymerase (50U/µl) | 2.0ml |
R7009XL-2 | 10X T3 Transcription Buffer | 1.2ml×2 |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
10X T3 Transcription Buffer | 2µl |
NTP Mixture (10mM each) | 4µl |
线性DNA模板 | 0.2-1µg |
Ribonuclease Inhibitor (40U/µl) | 0.5µl |
T3 RNA Polymerase (50U/µl) | 0.8-2µl U |
补充经DEPC处理的去离子水 | 至20µl |
10X T3 Transcription Buffer | 2µl |
3 NTP Mixture (10mM each , without CTP) | 1µl |
100µM CTP | 2.4µl |
[α-32P]-CTP, ~30TBq/mmol(800Ci/mmol) | 1.85MBq(50µCi) |
线性DNA模板 | 0.2~1µg |
Ribonuclease Inhibitor (40U/µl) | 0.5µl |
T3 RNA Polymerase (50U/µl) | 1µl |
补充经DEPC处理的去离子水 | 至20µl |