BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(10%, 10孔)
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产品编号 R0235S
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¥ 1199.00
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碧云天的BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(BeyoGel™ TBE-Urea Precast PAGE Gel)是一种使用安全、便捷、高品质的常规尺寸聚丙烯酰胺变性预制凝胶,主要用于20-800个碱基长度的RNA或单链DNA的高分辨率电泳分析或纯化,广泛用于合成寡核苷酸的分析和纯化、RNase保护试验(RPA)、体外转录研究和Northern印迹分析等实验。本预制胶有1.5厘米高的浓缩胶,具有非常优良的分离效果,电泳后RNA或单链DNA条带平整、清晰、细腻、锐利,几乎没有边缘效应;本预制胶胶板为玻璃材质,电泳效果非常好,达到甚至超过了自配TBE-Urea PAGE胶的电泳效果。

碧云天的BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶提供不同浓度的固定浓度胶,并有10孔和15孔两种孔数选择。固定浓度胶包括5%、10%、15%和20%。如果有较大量的特殊浓度需求,碧云天可提供定制服务。每种预制胶的最佳分离范围请参考下表:

产品编号 预制胶浓度 孔数 最大上样量 缓冲液 最佳分离范围 溴酚蓝前沿位置
R0231/R0232 5% 10/15 60/30μl 1X TBE ~50-1000nt ~25±5 bases
R0235/R0236 10% 10/15 60/30μl 1X TBE ~35-300nt ~20±5 bases
R0243/R0244 15% 10/15 60/30μl 1X TBE ~20-100nt ~10±5 bases
R0248/R0249 20% 10/15 60/30μl 1X TBE ~10-50nt ~6±5 bases

本预制胶含有1.5厘米高的4%浓缩胶,可以有效确保获得非常锐利的条带。

本预制胶丙烯酰胺(Acrylamide)与甲叉丙烯酰胺(Bisacrylamide)的比例为29:1,凝胶厚度为1.5mm。加样孔数为10孔的最大上样量为60μl,加样孔数为15孔的最大上样量为30μl。胶板尺寸:宽×高×厚度为98×84×4.1mm;凝胶尺寸:宽×高×厚度为81×74×1.5mm。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)技术广泛用于蛋白质、核酸及蛋白质-核酸复合物的分离纯化、检测、鉴定、分子量分析等实验,是生命科学研究中最基本的实验技术之一。常见的Western印迹(Western blot)检测就是基于PAGE的。

核酸电泳通常是基于长度来电泳分离DNA或RNA片段的分析技术。将待分析的核酸样品置于凝胶中,核酸由于其糖磷酸主链带负电在电场的作用下向阳极迁移。不同大小的片段能够通过在凝胶中的迁移速度差异来实现分离,较长的分子迁移速度较慢,因为它们在凝胶中的阻力较大。由于分子的大小影响其迁移速度,在一定的时间内,较短的片段比较长的片段更接近阳极[1]。在核酸电泳实验中,常用的有两种凝胶:琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。与琼脂糖凝胶相比,聚丙烯酰胺凝胶具有更高分辨率和灵敏度、低本底染色、所需样品量较少、高效印迹、易于从凝胶中提取DNA、不干扰酶反应以及准确性和可重复性高等优点。常用于核酸电泳的PAGE凝胶有TBE PAGE凝胶、TBE-Urea PAGE凝胶和EMSA PAGE凝胶。其中,TBE-Urea凝胶主要用于变性核酸分析(RNA或单链DNA的分析和纯化),常应用于合成寡核苷酸的分析和纯化、RNase保护实验(RPA)、体外转录研究和Northern印迹分析等实验[2]。

碧云天的BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶由高纯度的Tris、硼酸、EDTA、尿素等试剂制备,缓冲能力强,适合长时间电泳,且分辨率高、分离效果佳。严格的质量控制可确保凝胶和缓冲液中无DNase和RNase。

本预制胶使用常用的TBE电泳液,推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)TBE (5X premixed powder) (ST723)以及TBE (5X) (ST718),或参考使用说明自行配制相应的电泳液。

关于10孔和15孔预制胶的选择:需要检测的样品数量多或者需要定量时,推荐使用15孔预制胶,通量更大、更便于进行较多样品的定量统计分析;需要获得非常漂亮的代表性图片时,推荐使用10孔预制胶,10孔预制胶获得的条带更加平整和锐利。

本产品使用安全、便捷。本预制胶无需配制,即开即用,去掉梳子即可上样,而传统的TBE-Urea PAGE配制凝胶繁琐费时,并且制胶时还会接触有毒和刺激性试剂。

本产品质量稳定。本预制胶采用高品质玻璃胶板,和塑料胶板相比,大大减少了胶板对核酸的吸附,电泳效果更好。本产品流水线灌注,品质稳定可靠,重复性好,不同批次的产品一致性高。

本产品电泳效果好。本预制胶的核酸分离效果极佳,核酸条带平整、清晰、细腻、锐利。

本产品电泳槽兼容性好。本预制胶兼容市场上主流的小型电泳槽,如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)、Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN® Tetra Cell电泳槽、Life公司的XCell SureLock® Mini-Cell电泳槽(需与碧云天可免费提供的特制挡板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini胶电泳槽或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽。

本产品电泳时间短。本预制胶推荐的电泳电压和电泳时间为150V 50-90分钟,即可完成电泳并获得非常平整和锐利的电泳条带。具体的电泳时间取决于凝胶浓度。

本产品取出凝胶极为便捷。只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可,并且玻璃胶板打开极为方便,无需特殊的起撬工具。

本预制胶属于特殊用途预制胶。碧云天的特殊用途预制胶的比较和选择可以参考碧云天的相关网页:

http://www.beyotime.com/support/special-precast-page-gel.htm。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R0235S BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(10%, 10孔) 10块
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,1-2个月有效。切勿置于0℃以下冷冻。

注意事项:

由于本预制胶保质期较短,需新鲜制备,在您确认订购后约3-5个工作日才能发货。

对于RNA样品的电泳,按照下面方法配制1X TBE电泳液:将TBE(5X)电泳缓冲液用DEPC水稀释至1X,例如200ml TBE (5X)电泳缓冲液中加入800ml DEPC水混匀后即为1X TBE电泳缓冲液。

本预制胶不能置于0℃以下冷冻,否则凝胶会冻裂。

电泳液建议新鲜配制,试剂纯度不够、反复使用或长期放置的缓冲液会降低电泳效果。电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。

本预制胶为了兼容几乎所有厂家的小型凝胶电泳槽,所以改进了与电泳槽U型硅橡胶密封条的吻合结构(如碧云天、Bio-Rad等公司的电泳槽)。建议在电泳时须将具有突起结构的U型硅橡胶密封条取出后反过来安装,使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液,见下图。一般内槽电泳液加满,外槽电泳液没过电泳槽底部的阳极即可,并且电泳结束后的电泳缓冲液可以作为外槽缓冲液重复使用1-2次。另外,部分公司都已经配套无突起结构的U型硅橡胶密封条,使用这样的U型硅橡胶密封条就不会出现内外槽之间的漏液现象。

图1. 碧云天、Bio-Rad等公司的电泳槽U型硅橡胶密封条的突起结构图。由于碧云天的BeyoGel™ PAGE预制胶的该部位是平的,使其兼容几乎所有厂家的小型胶电泳槽,所以电泳时须将具有突起结构的硅橡胶密封条(左图)取出后反过来安装(右图),使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液。

由于碧云天的BeyoGel™ PAGE预制胶比Life公司的XCell SureLock® Mini-Cell电泳槽配套的NuPAGE® Gel或Novex® Mini Gel略薄,所以需加特制挡板配合使用。如有需要,请在订购本产品时告知,碧云天会免费赠送该特制挡板。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.样品准备:RNA或单链DNA样品加入等量碧云天的2X RNA Loading Buffer (R0215)或其它TBE-Urea Sample Buffer (2X),70℃孵育5分钟以充分或适度变性核酸以打开核酸的二级结构,立即置于冰水浴中。
注:BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶的分辨率非常高,样品上样量需求显著低于琼脂糖凝胶,一般为琼脂糖凝胶的10%左右,建议每孔0.2μg左右即可。但如果后续实验目的是为了切胶回收目的DNA,可以根据需要加大上样量。
2.预制胶、电泳液的准备:
a.将BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶从包装袋中取出。
b.将预制胶固定在电泳槽中,平稳、缓慢地拔出梳子。
c.配制1X TBE电泳缓冲液。推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)TBE (5X premixed powder) (ST723)以及TBE (5X) (ST718)。1X TBE中含有89mM Tris-Borate、2mM EDTA,pH8.3。对于RNA样品的电泳,按照下面方法配制1X TBE电泳缓冲液:将TBE (5X)电泳缓冲液用DEPC水稀释至1X,例如200ml TBE (5X)电泳缓冲液中加入800ml DEPC水混匀后即为1X TBE电泳缓冲液。
d.内槽加满电泳液,外槽加入电泳液没过电泳槽底部的阳极即可。电泳槽推荐使用碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)
注:由于预制胶孔中有残留的储存缓冲液,所以建议用1毫升移液枪吸取电泳液轻轻吹打加样孔,将加样孔冲洗干净,去除气泡和残留的储存缓冲液,这样电泳的效果更佳。
3.上样:将10微升吸头或BeyoGold™凝胶电泳上样吸头(FTIP205/FTIP206)的尖端垂直方向轻轻插入到上样孔中即可上样,吸头避免戳破凝胶,更不能使胶板变形导致样品泄漏。推荐使用碧云天的Small RNA Ladder (10-50nt, 9 bands) (R0206)
注:最佳上样量须通过实验来确定,样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。
4.将电泳槽盖子盖好,并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红,黑对黑)。一般在150V电压,电泳50-90分钟左右即可,电泳至蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘1/4处或其它合适位置,停止电泳。实际电泳时间与电泳液质量、凝胶的浓度和数量等因素有关系,需自行适当调整。电泳电源推荐使用碧云天的BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) (E6080)BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)
5.取出玻璃胶板,将刀片从玻璃胶板一侧轻轻划一下,稍加用力慢慢扳开或用刮板轻轻撬开玻璃胶板,用刮板将凝胶取出。
6.染色:将凝胶放至洁净容器内(例如适当大小的玻璃培养皿),用DEPC水清洗1-2分钟,加入适量的核酸染色液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色10-30分钟。用超纯水或TBE洗涤1-3次,每次3-5分钟,即可使用凝胶成像设备观察电泳后的染色结果。洗涤次数越多,时间越长,背景染色会越浅,但洗涤次数过多或时间过长,也会导致核酸条带的染色变弱。核酸染料推荐使用碧云天的NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130),稀释时须使用DEPC水。
常见问题:
1.电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳条带大幅扭曲、电泳时间大幅度延长:
可能原因是内槽缓冲液泄漏而导致。建议重新夹一下胶板,防止在电泳过程中内槽液面逐步降低。
2.使用自己配制的电泳缓冲液与上样缓冲液电泳后条带较模糊:
缓冲液配制不当,或长期放置变质,都会对本预制胶的蛋白电泳效果产生影响。推荐使用碧云天TBE (1X premixed powder) (ST720/ST721)TBE (5X premixed powder) (ST723)以及TBE (5X) (ST718)
3.在上样时不可将吸头过度插入上样孔中,吸头的过度插入会使胶板变形,导致样品泄漏。
参考文献:
1.Green MR, Sambrook J. Cold Spring Harb Protoc. 2021. 2021(1).
2.Summer H, Grämer R, Dröge P. J Vis Exp. 2009. (32):1485.
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