Urea-PAGE凝胶配制试剂盒(RNA专用)
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产品编号 R0218S
数量
¥ 396.00
产品包装:
可制20-30块胶
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碧云天生产的Urea-PAGE凝胶配制试剂盒(RNA专用),即Urea-PAGE Preparation Kit for RNA,是一种提供了配制用于RNA电泳的尿素聚丙烯酰胺凝胶(Urea-PAGE凝胶)所需的各种试剂的试剂盒。仅需自备制胶器具,即可完成Urea- PAGE胶的配制。

Urea-PAGE凝胶配制试剂盒(RNA专用)不仅可用于配制Urea-PAGE凝胶,也可用于配制非变性PAGE胶,即native PAGE。

Urea-PAGE凝胶配制试剂盒(RNA专用)中的所有组分均经DEPC处理,可用于RNA的电泳分析检测。

本试剂盒约可配制20-30块常规大小的PAGE胶。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R0218S-1 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
R0218S-2 TBE (5X, RNase free) 60ml
R0218S-3 尿素 100g
R0218S-4 凝胶聚合催化剂 0.5g
R0218S-5 TEMED 0.5ml
R0218S-6 DEPC水 100ml
说明书 1份
保存条件:

4℃保存,至少一年有效。TBE (5X)、尿素、凝胶聚合催化剂和DEPC水可以室温保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。凝胶聚合催化剂用DEPC水配制成10%溶液后,分装成小管-20℃保存,通常半年内有效。

注意事项:

当检测对象为单链RNA时,使用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶(Denatured Urea-PAGE);当检测对象为双链RNA时,使用非变性聚丙烯酰胺凝胶(Native PAGE)。

凝胶聚合催化剂用DEPC水配制成10%溶液后,应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。

TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

TEMED易燃,有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其它物品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.10%凝胶聚合催化剂的配制:例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用DEPC水溶解,并定容至1ml,即为10%凝胶聚合催化剂。
2.根据目的RNA的大小选择合适的凝胶浓度,再按照后附的表格配制Urea-PAGE凝胶。
不同浓度的Urea-PAGE凝胶的最佳分离范围:
Urea-PAGE (%) RNA size (nt)
20-30 2-8
15-20 8-25
13-15 15-35
10-13 35-45
8-10 45-70
6-8 70-300

成分 配制不同体积Urea-PAGE凝胶所需各组分的体积或质量
10% Urea-PAGE 10ml 20ml 40ml
30% Acr-Bis (29:1) 3.33ml 6.67ml 13.33ml
TBE (5X, RNase free) 2ml 4ml 8ml
尿素 4.2g 8.4g 16.8g
DEPC水 定容至10ml 定容至20ml 定容至40ml
10%凝胶聚合催化剂 0.05ml 0.1ml 0.2ml
TEMED 0.005ml 0.01ml 0.02ml
成分 配制不同体积Urea-PAGE凝胶所需各组分的体积或质量
12.5% Urea-PAGE 10ml 20ml 40ml
30% Acr-Bis (29:1) 4.2ml 8.4ml 16.8ml
TBE (5X, RNase free) 2ml 4ml 8ml
尿素 4.2g 8.4g 16.8g
DEPC水 定容至10ml 定容至20ml 定容至40ml
10%凝胶聚合催化剂 0.05ml 0.1ml 0.2ml
TEMED 0.005ml 0.01ml 0.02ml
成分 配制不同体积Urea-PAGE凝胶所需各组分的体积或质量
15% Urea-PAGE 10ml 20ml 40ml
30% Acr-Bis (29:1) 5ml 10ml 20ml
TBE (5X, RNase free) 2ml 4ml 8ml
尿素 4.2g 8.4g 16.8g
DEPC水 定容至10ml 定容至20ml 定容至40ml
10%凝胶聚合催化剂 0.05ml 0.1ml 0.2ml
TEMED 0.005ml 0.01ml 0.02ml
注1:将30% Acr-Bis (29:1)、TBE (5X)及尿素完全溶解后,或加入适量DEPC水完全溶解后,再用DEPC水定容。
注2:由于尿素溶解时吸热,可在37℃适当加热以促进尿素溶解。
注3:依次加入10%凝胶聚合催化剂和TEMED,混合均匀,灌胶,插入梳子,室温静置直至凝固(或放至37℃培养箱加热以加速凝固)。
注4:如果配制非变性胶,参考上述配制方法,不添加尿素即可配制成非变性PAGE胶。
3.电泳:
a.样品准备:根据RNA样品类型,选择适当的Loading Buffer。如果样品是ssRNA,将适量ssRNA样品与2X RNA Loading Buffer (R0215)等体积混合,70℃孵育5-10min或95℃孵育1min,立即放至冰水浴中,该样品即可进行Urea-PAGE凝胶电泳;如果样品是dsRNA,将适量dsRNA与2X RNA Loading Buffer (R0215)等体积混合,即可进行非变性PAGE电泳。
b.电泳缓冲液准备:将TBE(5X)电泳缓冲液用DEPC水稀释至1X,例如200ml TBE (5X)电泳缓冲液中加入800ml DEPC水混匀后即为1X TBE电泳缓冲液,随后可直接将其加入至电泳槽中。
c.上样:上样前先用1X TBE电泳缓冲液将每个上样孔中的尿素冲洗干净。上样孔中残留的尿素会影响核酸样品的沉降及后续的电泳。冲洗后即可按照实验目的适当上样RNA样品。
d.电泳:当检测对象是ssRNA时,建议使用180V恒压电泳;当检测对象是dsRNA时,建议使用120V恒压电泳,电泳时间可根据核酸分子量大小自行决定。
e.染色:电泳结束后,将凝胶取出放至洁净容器内(例如适当大小的玻璃培养皿),用DEPC水清洗1-2分钟,然后加入约30ml核酸染色液,室温摇床染色15min,25rpm,最后用DEPC水洗涤2-3次,每次2-5分钟,即可使用凝胶成像设备观察电泳后的染色结果。推荐使用碧云天NA-Red (EB升级换代产品,2000X)进行RNA凝胶的染色,稀释时须使用DEPC水。
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产品编号 产品名称 包装
R0206-100μl Small RNA Ladder (10-50nt, 9 bands) 100μl
R0215-1ml 2X RNA Loading Buffer 1ml
R0218S Urea-PAGE凝胶配制试剂盒(RNA专用) 可制20-24块胶
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