RNALater™血液RNA稳定保存液(试用装)
收藏
产品编号 R0116FT
数量
¥ 0.00
产品包装:
15ml
产品简介
使用说明
说明书下载
相关产品
相关论文
产品问答

碧云天的RNALater™血液RNA稳定保存液(RNALater™ RNA Stabilization Reagent for Blood),简称血液RNALater™或血液RNALater™试剂,是一种用于采集血液样品时,仅需室温操作,即可迅速抑制RNase并稳定保存血液样品中RNA的无毒无害液态试剂。本产品广泛用于新鲜血液样品中RNA的稳定保存。

本产品的使用效果和液氮冻存的效果一致。本产品可以迅速渗透到血液细胞内部,完全抑制RNase,避免RNA降解,保持血液样品RNA的完整性,从而完美保存血液细胞的基因表达谱和细胞外的RNA谱,并且和液氮一样可以长期保存样品中的RNA。

本产品安全便捷。本产品无任何毒性和刺激性,可室温使用,确保了使用时的安全和便捷。和使用液氮相比,可以有效避免因使用超低温的液氮而可能引起的冻伤、离心管爆裂等安全隐患,并且携带、运输非常方便。

本产品可稳定血液样品的RNA表达谱。常见的血液样品保存方式是4℃短时间保存,但此时血液中细胞的生命活动还在进行,基因表达谱还会发生变化,RNA提取时与血液样品收集时的基因表达谱很可能已经出现显著差异,这种显著的差异很可能会导致实验结果的不确定性。而使用血液RNALater™试剂保存后,血液中细胞的生命活动几乎立即被终止,RNA谱也被固定,且RNA完整性更佳(图1B)。经测试,直接将全血置于-80℃条件下保存会导致部分RNA降解(图1B),可能原因是在冻存和解冻过程中细胞受到破坏,细胞内的RNase释放而导致部分RNA降解。因此,不建议直接将全血置于-80℃条件下保存。

本产品适用于普通新鲜血液样品中RNA的稳定和保存,更加适合样品收集后不能够立即进行RNA抽提(包括miRNA等小RNA)的情况,特别适用于野外或临床采集的样品、大批量采集的血液样品和不能立即冻存的血液样品RNA的稳定与保存。

在本产品中样品的保存时间和存储温度相关,例如37℃可保存1-2天,室温可保存一周,4℃可以保存1个月,-20℃或更低温度可以更长时间保存。具体如下表所示:

存储温度 37℃ 25℃ 4℃ -20℃或更低温度
保存时间 1-2天 1周 1个月 >6个月

抽提得到的病毒RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection30 assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。

本产品对于小鼠血液样品的保存效果如图1所示。全血样品用本产品分别在4℃分保存30天、室温保存7天以及37℃保存1天后,抽提获得的RNA与新鲜样品(Control, ctrl)一样均能够保持完整性,几乎无降解;而直接将血液在25℃保存7天,大部分RNA都已经被降解(图1A)。在4℃条件下保存,血液RNALater™试剂的保护效果更好;而直接将全血置于-80℃条件下保存,3天时RNA已有部分降解,但血液RNALater™试剂保护的样品几乎无降解。

图1. RNALater™血液RNA稳定保存液对于小鼠全血中RNA的稳定保存效果图。按照图中所示条件保存后,使用碧云天的RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024/R0026/R0027)抽提RNA,随后取相同体积的RNA样品进行电泳。其中图A为RNA样品变性处理后,在含6.67%甲醛和适量NA-Red (D0128)的1%变性琼脂糖凝胶中进行电泳检测,图B为含NA-Red (D0128)的1%琼脂糖凝胶电泳检测。本图仅供参考。

本产品也可用于血液样品中蛋白和DNA的稳定和保存,但血液RNALater™试剂会导致蛋白变性,后续可进行Western blot、SDS-PAGE等实验,而不适用于检测酶活力等须保持蛋白活性的实验。

按照每200µl血液样品使用1ml本产品来计算,本产品100ml包装可以用于约100份血液样品的保存, 500ml包装可以用于约500份血液样品的保存。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R0116FT RNALater™血液RNA稳定保存液(试用装) 15ml
R0116-100ml RNALater™血液RNA稳定保存液 100ml
R0116-500ml RNALater™血液RNA稳定保存液 500ml
说明书 1份
保存条件:

室温或4℃保存,两年有效。

注意事项:

本产品适合新鲜血液的保存,血液样品获得后需要尽快使用本产品保存。

样品如果需要-20℃或-80℃长期保存,应先置于4℃保存过夜或更长时间后才能再转移至-20℃或-80℃保存,以保证血液RNALater™试剂充分有效地完全渗透血液细胞内部。

-20℃或-80℃保存情况下,样品解冻时血液RNALater™试剂中可能有结晶析出,属正常现象,可待结晶完全溶解后使用,不会影响后续RNA的抽提效果。

所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。

对于操作环境中RNA酶的去除,推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.对于全血样品。
a.全血的收集:收集100-300µl新鲜的血液样品,加入含抗凝剂的抗凝管中,颠倒混匀。抗凝剂推荐使用EDTA钠盐或钾盐,肝素和柠檬酸盐也可以。
b.保存:按照1:5的比例加入血液RNALater™试剂,例如200µl的血液加入1000µl的血液RNALater™试剂,颠倒混匀。此时血液样品在室温可以保存一周,4℃可以保存一个月,4℃保存(过夜或更长时间)后转移至-20℃或-80℃可以至少保存6个月。
c.RNA抽提时样品的处理:RNA抽提前,加入等体积的DEPC水(DNase、RNase free)或其它适当的不含RNase的水,混匀,10,000×g室温离心5分钟,小心去除上清。沉淀物或剩余体积按照1:3的比例加入RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024/R0026/R0027)中的裂解液,如200µl的沉淀物或剩余体积加入600µl的裂解液。随后按照步骤3或RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。如果希望同时抽提细胞内和细胞外的RNA,直接按照1:3的比例加入RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024/R0026/R0027)中的裂解液,例如200µl含血液RNAlater™试剂的样品加入600µl的裂解液。随后按照步骤3或RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。
2.对于白细胞样品:
a.白细胞的收集:取100-300µl新鲜的血液样品,加入含抗凝剂的抗凝管中,颠倒混匀。1500-2000×g,4℃离心10-15分钟。此时可见管中的液体分3层,上层为淡黄色血浆,底层为红细胞,在紧贴红细胞层上有一层灰白色的白细胞。吸掉上层的血浆,小心收集白细胞至新的离心管中,然后加入1ml PBS (C0221A)洗涤,5000×g 4℃离心2分钟,小心吸除PBS,由于白细胞比较少,可以适当残留微量液体。
b.保存:小心加入100-200µl的血液RNAlater™试剂,避免吹散沉淀。此时的白细胞样品在室温可以保存一周,4℃可以保存一个月,4℃保存(过夜或更长时间)后转移至-20℃或-80℃至少可以保存6个月。
c.RNA抽提时样品的处理:
方法1:直接按照1:3的比例加入RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024/R0026/R0027)中的裂解液,例如200µl含血液RNAlater™试剂的样品加入600µl的裂解液。随后按照步骤3或RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。本方法简单,抽提获得的总RNA质量尚可,得率高,几乎没有损失,但由于没有去除血液RNAlater™试剂,纯度上可能会稍差一些。
方法2:加入等体积的DEPC水(DNase、RNase free)或其它适当的不含RNase的水,10,000×g室温离心5分钟,小心去除上清,由于白细胞比较少,可以适当残留微量液体,然后加入RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024/R0026/R0027)中的裂解液300µl。随后按照步骤3或RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。本方法稍复杂,由于通过离心去除了血液RNAlater™试剂,纯度好,但在离心过程中可能会损失部分白细胞。
3.血液样品总RNA的抽提:
对于使用碧云天RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024/R0026/R0027)裂解液和抽提试剂盒的样品,建议按照以下步骤进行总RNA的抽提,或参考产品使用说明。其它RNA抽提试剂盒如Trizol LS等请按其说明书进行总RNA的抽提。
a.加入等体积结合液至裂解液中,轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生,属于正常现象。
b.将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内,12,000×g离心30秒,倒弃收集管内液体。
注意:当裂解液的体积大于300µl时,在加入等体积结合液后,总体积会超过纯化柱的容量,这时应分成2次过柱,即将一半的混合物过柱后,再将剩余的混合物重复步骤b一次。
c.加入600µl洗涤液I,12,000×g离心30秒,倒弃收集管内液体。
d.加入600µl洗涤液II,12,000×g离心30秒,倒弃收集管内液体。
e.重复步骤d一次。最高速(约14,000-16,000×g)离心2分钟,去除残留的液体。
f.将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中,加入30-50µl洗脱液,室温放置2-3分钟,最高速离心30秒,所得溶液即为纯化的RNA。用分光光度计测浓度。本试剂盒抽提得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2。A260/A230通常为1.9-2.1。
注意:洗脱液需要加到纯化柱柱面中央,使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品,可把洗脱液的体积减小至20µl,但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时,洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA。
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
R0011 Beyozol (总RNA抽提试剂) 100ml
R0016 Trizol (总RNA抽提试剂) 100ml
R0021 DEPC水(DNase、RNase free) 100ml
R0022 DEPC水(DNase、RNase free) 500ml
R0024 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 12次
R0026 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次
R0027 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 200次
R0028 RNAeasy™动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次
R0032 RNAeasy™ Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次
R0046-50ml 裂解液(RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒用) 50ml
R0046-250ml 裂解液(RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒用) 250ml
R0116-100ml RNALater™血液RNA稳定保存液 100ml
R0116-500ml RNALater™血液RNA稳定保存液 500ml
R0118-100ml RNALater™动物组织RNA稳定保存液 100ml
R0118-500ml RNALater™动物组织RNA稳定保存液 500ml
R0121-25ml AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液 25ml
R0121-100ml AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液 100ml
R0123 RNase and DNase Away 250ml
R0125 RNase, DNase and DNA Away 250ml
R0141-100ml RNALater™病毒RNA稳定保存液 100ml
R0141-500ml RNALater™病毒RNA稳定保存液 500ml
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献: