RNAeasy™血液RNA抽提试剂盒(离心柱式)
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产品编号 R0091L
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¥ 1598.00
产品包装:
12次 50次 200次
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碧云天的RNAeasy™血液RNA抽提试剂盒(离心柱式),即RNAeasy™ Blood RNA Isolation Kit with Spin Column,是一种基于离心柱法从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提长度大于200个核苷酸(Nucleotide, nt)的RNA的试剂盒。抽提获得的大于200个核苷酸的RNA (也常被称为总RNA)可以用于各种常规用途。

本试剂盒抽提得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析(Microarray)、高通量测序(High throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。

RNA按照长度可以分为长链RNA (Long RNA)和小RNA (Small RNA),长链RNA通常大于200nt,而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA (Long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA (Ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA (Transfer RNA)、microRNA (miRNA)、siRNA (Small interfering RNA)、piRNA (Piwi-associated small RNA)、tsRNA (tRNA-derived small RNA)、srRNA (Small rDNA-derived RNA)等[1]。

本试剂盒抽提RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解,释放出总RNA,然后让RNA特异性地结合到纯化柱上,而基因组DNA和蛋白质等其它组分通过高速离心被有效去除,再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质,最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。

图1.碧云天RNAeasy™血液RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0091) RNA抽提流程示意图。

本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行RNA分离纯化,能有效避免传统的TRIzol LS法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。

本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒无需使用红细胞裂解液去除无核的红细胞,避免RNA降解;采用柱纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,抽提操作过程仅15-20分钟。相比于传统的TRIzol LS抽提法,本试剂盒的操作流程显著简化,缩短了抽提时间,降低了RNA被降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比,所需操作步骤和操作时间基本一致。

本试剂盒抽提得到的RNA得率高、纯度高。纯的RNA其A260/A280约为2.0,但在很多仪器上测定时会高于2.0,低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染;纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高,低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。本试剂盒效果经反复测试,抽提得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2,A260/A230通常为1.9-2.1。本产品对于小鼠血液样品的抽提效果如图2所示。

图2.碧云天RNAeasy™血液RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0091)对小鼠血液样品的抽提效果。小鼠全血新鲜样品(ctrl)和用RNALater™血液RNA稳定保存液(R0116)分别在4℃保存30天、室温保存7天以及37℃保存1天后,使用本产品抽提RNA,随后取相同体积的RNA样品进行电泳。电泳条件为:RNA样品变性处理后,在含6.67%甲醛和适量NA-Red (D0128)的1%变性琼脂糖凝胶中进行电泳检测。实测效果可能有所不同,本图仅供参考。

本产品适用于纯化200nt以上的RNA,对小于200nt的small RNA即小RNA (如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、miRNA、piRNA等)被选择性地去除,如果希望抽提得到小于200nt的小RNA,推荐使用碧云天的BeyoMag™磁珠法血液RNA提取试剂盒(R0093)

本试剂盒适用于新鲜、冻存、经EDTA、肝素等抗凝处理或经过RNALater™血液RNA稳定保存液(R0116)保存的血液RNA的抽提,推荐的血液样品量为200μl。本试剂盒小、中和大包装可分别用于12、50和200个样品的RNA抽提。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R0091S-1 裂解液 8ml
R0091S-2 结合液 8ml
R0091S-3 洗涤液I 8ml
R0091S-4 洗涤液II 15ml
R0091S-5 洗脱液 1.2ml
R0091S-6 RNA纯化柱及废液收集管 12套
R0091S-7 RNA洗脱管 12个
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R0091M-1 裂解液 32ml
R0091M-2 结合液 32ml
R0091M-3 洗涤液I 32ml
R0091M-4 洗涤液II 63ml
R0091M-5 洗脱液 5ml
R0091M-6 RNA纯化柱及废液收集管 50套
R0091M-7 RNA洗脱管 50个
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R0091L-1 裂解液 125ml
R0091L-2 结合液 125ml
R0091L-3 洗涤液I 125ml
R0091L-4 洗涤液II 125ml×2
R0091L-5 洗脱液 15ml
R0091L-6 RNA纯化柱及废液收集管 200套
R0091L-7 RNA洗脱管 200个
说明书 1份
保存条件:

室温保存,一年有效。

注意事项:

血液样品推荐使用RNALater™血液RNA稳定保存液(R0116)进行保存以保持RNA的完整性。

通过本试剂盒抽提得到的RNA已经去除绝大多数DNA,通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时,可以在使用说明中步骤4离心后,在纯化柱中加入适量DNase I进行消化,具体请参考使用说明。

本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。

对于操作环境中RNA酶的去除,推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。

本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。

废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。

结合液、洗涤液中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.按照1:3的比例在血液样品中加入裂解液,例如200µl的血液样品中加入600µl的裂解液,轻轻吹打5-10次。
注:保存在RNALater™血液RNA稳定保存液(R0116)中的血液样品,请参考RNALater™血液RNA稳定保存液的使用说明步骤1、2对血液样品进行处理。
2.加入等体积结合液至裂解液中,轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生,属于正常现象。
3.将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内,12,000×g离心30秒,倒弃收集管内液体。
注:当裂解液的体积大于300µl时,在加入等体积结合液后,总体积会超过纯化柱的容量,这时应分成2次过柱,即将一半的混合物过柱后,再将剩余的混合物重复步骤3一次。
4.加入600µl洗涤液I,12,000×g离心30秒,倒弃收集管内液体。选做:通过本试剂盒抽提得到的RNA已经去除绝大多数DNA,通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时,可在本步骤离心后,在纯化柱中加入80µl含10U DNase I的酶溶液(推荐使用碧云天RNase-free的DNase I,D7073D7076,每80µl酶溶液按照71.8µl水加8µl 10X Reaction Buffer再加0.2µl 50U/μl DNase I混合配制而成),室温放置消化15分钟。消化结束后,不需要进行离心等任何额外的操作,直接进入步骤5。
5.加入600µl洗涤液II,12,000×g离心30秒,倒弃收集管内液体。
6.重复步骤5一次。
7.最高速(约14,000-16,000×g)离心2分钟,去除残留的液体。
8.将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中,加入30-50µl洗脱液,室温放置2-3分钟,最高速离心30秒,所得溶液即为纯化的RNA。本试剂盒抽提得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2,A260/A230通常为1.9-2.1。
注:洗脱液需要加到纯化柱柱面中央,使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品,可把洗脱液的体积减小至20µl,但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时,洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA。
参考文献:
1.Joyce GF. Nature. 2002. 418(6894):214-21.
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