碧云天生产的Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)，即RNA寡核苷酸退火缓冲液，是一种经过我们多次实验证实、可以用于RNA oligo退火的缓冲液。用于siRNA而合成的互补的RNA oligo可以用该退火缓冲液进行退火，以形成双链RNA。使用碧云天生产的Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)，可以有效避免RNA oligo自身形成发夹结构，有利于退火的正确进行。
使用本试剂盒操作非常简单，只需把待退火的RNA oligo和Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约60分钟即可完成。
Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)经过特殊处理，不含RNase，可避免RNA的降解。
如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0051 | Annealing Buffer for RNA Oligos(5X) | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)只适合于RNA oligo的退火，不适合用于DNA oligo 的退火。
由于RNA非常容易被降解，一定要严格遵守RNA的操作规范，防止RNase污染。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 把待退火的RNA oligo用DEPC水配制成200μM。溶解Annealing Buffer for RNA Oligos(5X)，混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系：
| DEPC水 | 30μl |
| Annealing Buffer for RNA Oligos(5X) | 20μl |
| RNA oligo A(200μM) | 25μl |
| RNA oligo B(200μM) | 25μl |
| 总体积 | 100μl |
按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果用的PCR仪没有热盖，在反应体系上加入一滴矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 90℃ | 1分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每5秒下降0.1℃，降至25℃ | 约60分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1：每5秒下降0.1℃，降至25℃的程序设置，以Bio-Rad的T100为例为：1. 90℃, 2:00; 2. 90º, 0.05, -0.1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 650X; 4. 4℃, ∞。
注2：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每60秒下降1℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为：1. 90℃, 1:00; 2. 90℃, 1:00, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 65X; 4. 4℃, ∞。
注3：如果条件有限，也可以将水浴锅加热至90℃，把PCR管放在水浴锅中，或者把煮沸的热水加入到保温杯或保温瓶中，待水温降到90℃时放入PCR管。所用水量控制在1-2小时内自然降温至25℃左右。此方法的退火效果可能会比使用PCR仪略差一些。
4. 退火结束后可以直接用于转染细胞，也可以-20℃冻存备用。
