碧云天研发生产的RNAeasy™石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒(离心柱式) (RNAeasy™ Paraffin-embedded Tissue RNA Purification Spin Kit),也称石蜡包埋组织RNA提取试剂盒、石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒、FFPE组织RNA抽提试剂盒等,是一种采用环保脱蜡方式去除石蜡后抽提切片样品中RNA的试剂盒。抽提获得的RNA长度通常大于200个核苷酸(nucleotide, nt),可以应用于反转录、RT-PCR、qRT-PCR或转录组测序等下游实验。
本试剂盒也可以用于福尔马林、多聚甲醛等固定的组织的RNA抽提。
福尔马林固定石蜡包埋(Formalin fixation and paraffin embedding, FFPE),常应用于癌症等疾病研究中保存离体组织的形态学和组织学结构,以便于运输和储存,是病理样品长期保存的主要方法之一[1]。组织样品经福尔马林固定时,组织内细胞中的核酸和蛋白质等分子间随机交联,核酸出现片段化,因此难以获得高质量核酸。本试剂盒采用环保脱蜡法去除石蜡,以特殊的裂解条件释放FFPE组织样本中的RNA分子,最大程度地降低了福尔马林固定时组织内细胞中RNA与其它分子交联的不利影响,经本试剂盒抽提获得的RNA纯度高、完整性好、质量稳定。
本试剂盒抽提RNA的实验流程如图1所示。首先使用环保的脱蜡剂和蛋白酶K将FFPE样品脱蜡、消化,随后加入适合RNA结合到纯化柱上的缓冲液,然后加入到纯化柱内。通过高速离心,使RNA在穿过纯化柱的瞬间,结合到纯化柱上,随后通过四次洗涤去除各种杂质,最后通过洗脱液把RNA洗脱下来。
图1.碧云天RNAeasy™石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0033)的实验流程图。
本试剂盒抽提获得的石蜡包埋组织样品RNA纯度高。抽提获得的RNA A260/A280的范围通常在1.8-1.9之间。本试剂盒与C品牌同类产品的抽提效果对比图参见图2。
图2.碧云天RNAeasy™石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0033)与同类产品(Competitor C)的RNA抽提效果对比图。样品为小鼠肝脏和肾脏组织石蜡切片,样品用量为6片10μm厚切片。抽提后洗脱体积均为100μl,取10μl的洗脱样品与2μl BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) (D0072)混合均匀后,在1%琼脂糖凝胶中电泳30分钟后拍照。如图所示,本试剂盒用于抽提小鼠肝脏、肾脏FFPE样品的RNA时,抽提得到的RNA的量与C品牌的同类试剂盒基本一致或略好。注:抽提得到的RNA经DNase I处理。实际结果会因样品、实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本试剂盒使用安全、高效。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行RNA分离纯化,能有效避免常规方法抽提RNA时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
本试剂盒操作快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,纯化RNA操作过程仅需约15分钟即可完成。和国外同类柱纯化产品相比,所需操作步骤和操作时间基本一致。碧云天同时提供更加便捷的BeyoMag™石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒(磁珠法) (R0085),且磁珠法抽提得到的RNA包含<200nt的小RNA或部分降解、断裂RNA,抽提更完全。
本试剂盒的标准操作步骤抽提得到的RNA含有少量DNA,但如果按照可选步骤加入DNase I,就可以获得不含DNA的高纯度RNA。
本试剂盒小包装可用于50个样品的RNA抽提。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R0033S-1 | 脱蜡剂 | 50ml |
R0033S-2 | 裂解液 | 10ml |
R0033S-3 | 结合液 | 15ml |
R0033S-4 | 洗涤液I (首次使用前加9ml无水乙醇) | 51ml (+9ml) |
R0033S-5 | 洗涤液II (首次使用前加48ml无水乙醇) | 16ml (+48ml) |
R0033S-6 | 洗脱液 | 12ml |
R0033S-7 | 蛋白酶K | 0.6ml |
R0033S-8 | RNA纯化柱及废液收集管 | 50套 |
R0033S-9 | RNA洗脱管 | 50个 |
— | 说明书 | 1份 |
蛋白酶K -20ºC保存,其余均室温保存,一年有效。蛋白酶K室温(15-25ºC)存放一周,活力无明显下降。
注意事项:如果希望获得更高质量的RNA,宜尽量使用新鲜固定和包埋的组织样品。拿到组织样品后尽快在4-10%福尔马林中固定,固定时间最好在8-24小时之间或更短时间,长时间固定会使RNA断裂更为严重。
样品包埋前应确保彻底脱水,残留的甲醛可能抑制蛋白酶K的消化等相关实验步骤。
本试剂盒抽提RNA依赖于样品类型、储存时间以及固定条件。样品固定时间和保存时间过长(>1年)易破坏RNA完整性,无法抽提出长片段。
石蜡包埋组织抽提得到的RNA,由于样品的特殊性,存在可能的断裂或降解,通常不建议用于需要全长RNA的下游应用。
如需制备不含DNA的高纯度RNA,需自备DNase I,推荐使用碧云天的DNase I (D7073/D7076)。
温度较低时裂解液或结合液中可能会有沉淀产生,属正常现象。使用前必须检查一遍,如有沉淀,55ºC水浴孵育使沉淀溶解,混匀后使用。
第一次使用前小包装洗涤液I需添加9ml无水乙醇,洗涤液II需添加48ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
本试剂盒须将FFPE样品56ºC和80ºC孵育,推荐使用碧云天的BeyoBath™干式恒温金属浴(1.5/2ml×40) (E6662)。
使用本试剂盒须提前备好无水乙醇和异丙醇。
除特别说明外,每次Vortex应控制在5-10秒左右,推荐使用碧云天的BeyoVortex™调速式涡旋混匀仪(E6699)或BeyoVortex™基础型涡旋混匀仪(E6788)。
本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
脱蜡剂和蛋白酶K对人体有呼吸道、生殖等特定器官毒性,或致畸致癌毒性,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
洗涤液I对人体有害或有刺激性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R0024 | RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 12次 |
R0026 | RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 50次 |
R0027 | RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 200次 |
R0028 | RNAeasy™动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 50次 |
R0032 | RNAeasy™ Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 50次 |
R0033S | RNAeasy™石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 50次 |
R0035 | RNAeasy™病毒RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 12次/50次/200次 |
R0077 | BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提试剂盒 | 10次/50次/200次 |
R0091 | RNAeasy™血液RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 12次/50次/200次 |
R0073 | BeyoMag™磁珠法动物mRNA抽提试剂盒 | 50次/200次/800次 |
R0083 | BeyoMag™磁珠法病毒RNA/DNA抽提试剂盒 | 10次/50次/200次 |
R0085S | BeyoMag™石蜡包埋组织RNA抽提试剂盒(磁珠法) | 50次 |
ST533 | Proteinase K (20mg/ml) | 0.2ml/1ml/5ml |
ST535 | Proteinase K | 100mg/500mg/2g |
D7073 | DNase I | 200U |
D7076 | DNase I | 1000U |
ST975 | 环保脱蜡剂(二甲苯替代品) | 50ml/250ml/1L |
FMS012 | BeyoMag™磁分离架(12孔) | 1个/袋 |
FMS024 | BeyoMag™磁分离架(24孔) | 1个/袋 |
FMS004 | BeyoMag™磁分离架(4孔, 1.5ml/2ml, 蓝) | 1个/盒 |
FMS008 | BeyoMag™磁分离架(8孔, 1.5ml/2ml, 蓝) | 1个/盒 |
FMS016 | BeyoMag™磁分离架(16孔, 1.5ml/2ml, 蓝) | 1个/盒 |
FMS009 | BeyoMag™磁分离架(8孔, 1.5ml/2ml, 铝合金) | 1个/盒 |
FMS015 | BeyoMag™磁分离架(16孔, 1.5ml/2ml, 铝合金) | 1个/盒 |
FMS025 | BeyoMag™磁分离架(24孔, 1.5ml/2ml, 铝合金) | 1个/盒 |