Mouse Klhl1 qPCR Primer Pair
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产品编号 QM47434S
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¥ 22.00
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200次
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Mouse Klhl1 qPCR Primer Pair,即小鼠Klhl1 qPCR引物对,主要用于基于SYBR Green的qPCR、One-Step qRT-PCR或semi-quantitative PCR。本引物为预先设计、经过qPCR验证、预混的引物对。

qPCR (Quantitative PCR)即定量PCR,也称实时荧光定量PCR或实时定量PCR (Real-time quantitative PCR)、实时PCR (Real-time PCR),是一种在DNA扩增反应过程中,以荧光定量测定每个聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。qPCR常用的两种方法是SYBR Green等荧光染料法和探针法。SYBR Green等荧光染料法是使用带有荧光的、非特异的DNA结合染料SYBR Green等以检测PCR过程中积累的PCR扩增产物;而探针法(Probe method),也常被称为TaqMan探针法,不使用荧光染料,而采用荧光基团和淬灭基团(Quencher)标记的DNA探针靶向拟通过PCR检测的目标序列[1,2]。

对于SYBR Green等染料法,引物至关重要。本系列引物产品采用碧云天开发的引物设计算法,优化了序列并经过验证,特异性佳,扩增效率高,引物二聚体形成发生率低,qPCR数据可靠;本系列引物对一般都跨外显子(Span exon junctions),避免了对基因组DNA (gDNA)的扩增[3,4];本系列的引物产品非常丰富,几乎包含了所有人和小鼠的基因;引物的Tm值约60ºC,大多数扩增产物(Amplicon)的长度约90-160bp。同时碧云天还提供针对各个信号通路的引物组合(Primer Panel/Primer Array)。

本产品为预混冻干粉,每管含正向引物(Forward primer,也称上游引物)和反向引物(Reverse primer,也称下游引物)各1nmol,共2nmol,不含核酸酶(Nuclease-free),只需加入400μl超纯水溶解成2.5μM each,即可使用。按20μl或25μl体系使用2μl引物,本产品每管可以用于200次qPCR实验。

Gene Information
Gene Name kelch-like 1
Gene Symbol Klhl1
Synonyms mKIAA1490
Organism Mouse
Gene ID 93688
UniProt ID Q9JI74
Main Accession No. NM_053105
Other Accession No. BC094584, NM_053105, NM_053105.1, NM_053105.2
Map Location 14; 14 E2.1
Pathway -
Gene Summary Predicted to enable actin binding activity. Acts upstream of or within adult walking behavior; cerebellar Purkinje cell layer development; and dendrite development. Located in dendrite and neuronal cell body. Is expressed in central nervous system and extrinsic ocular muscle. Orthologous to human KLHL1 (kelch like family member 1). [provided by Alliance of Genome Resources, Apr 2022]

 

Amplicon Information
Amplicon Length (bp) 92
NCBI mRNA ID NM_053105.2
NCBI Protein ID NP_444335.2
Ensembl Transcript ID ENSMUST00000022666.9
Ensembl Gene ID ENSMUSG00000022076.11
Ensembl mRNA ID Klhl1-201
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
QM47434S Mouse Klhl1 qPCR Primer Pair 1nmol each
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。建议复溶后进行适当分装,避免反复冻融。

注意事项:

PCR扩增产物的长度可能会因基因转录后存在多种剪接形式而有所差异。

虽然本系列引物产品的特异性非常好,但仍建议进行熔解曲线(Melt curve)分析以确定扩增反应的特异性。如果只有一个熔解曲线峰(对应的退火温度即双链DNA产物的Tm值),说明只有一种单一产物;如果熔解曲线出现双峰、多峰或杂峰峰,可能是引物二聚体或非特异性扩增、存在基因组DNA污染、试剂及环境被污染等。建议设置不含模板的对照(No template control, NTC),即反应体系中包含除模板以外的所有反应组分,根据样品孔和无模板对照孔熔解曲线的差异,可判断是否存在引物二聚体或其它的非特异性扩增。

若反应体系存在扩增产物污染,推荐使用防污染型qPCR Mix。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. PCR反应体系的设置:
a. 开启本产品前,3000-8000×g离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失。每管加入400μl超纯水,先盖好盖子颠倒混匀数次,然后离心机快速离心几秒,开盖后再轻轻吹打混匀,即得400μl 2.5μM each的Primer Mix。超纯水推荐使用BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
b. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。SYBR Green qPCR Mix需完全融解并混匀后置于冰浴上或冰盒内。推荐使用BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X) (D7260/D7262/D7265)、BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit (D7268)、BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, 防污染型) (D7501/D7503/D7507)或BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit (防污染型) (D7509)。
c. 参考下表在室温或冰浴上设置PCR反应体系,以96孔板和BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X)为例。
Reagent Volume for One PCR Reaction
SYBR Green qPCR Mix (2X) 10µl
Primer Mix (2.5μM each) 2µl
Template DNA 2µl
RNase-Free Water 6µl
Total Volume 20µl
注1:通常引物的终浓度为0.2-0.5μM each时可获得良好的检测效果,也可根据情况在0.1-1.0μM each范围内调整引物的终浓度。
注2:通常DNA模板的量以1-10ng cDNA为参考用量。因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,如有必要,可加大模板用量或对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。RT-PCR反应得到的cDNA直接作为模板时,其添加量不要超过PCR反应总体积的10%。
注3:96孔板的推荐反应体系为20µl,也可以根据实际实验需求,按比例扩大或缩小反应体系。
注4:建议设置不加模板的阴性对照组。
d. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。推荐使用BeyoFuge™基础型微孔板离心机(垂直式, 2500rpm) (E6758)进行快速离心。
e. 将设置好的PCR反应管或PCR反应板置于荧光定量PCR仪上,开始定量PCR反应。
2. PCR反应程序:
在Real-time PCR反应前进行模板的预变性,通常设定为95ºC 2分钟,复杂或高GC模板适当延长时间至5-10分钟。本程序是以ABI QuantStudio™ 6 Flex荧光定量PCR仪为例:
a. 预变性:95ºC 2分钟;
b. 变性:95ºC 15秒;
c. 退火/延伸:60ºC 15-30秒;
d. 重复步骤b和步骤c,总共40个循环;
e. 熔解曲线分析(可选):95ºC 15秒, 60ºC 15秒, 95ºC 15秒;
f. 使用荧光定量PCR仪提供的软件分析结果。
注:以上举例为常规qPCR反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。上述为两步法qPCR,如果采用三步法qPCR,只需在退火/延伸后加一步72ºC 30秒,随后重复步骤b、c及增加的这一步骤共40个循环即可。

参考文献:
1. Marilynn R Fairfax, Hossein Salimnia. Molecular Diagnostics. 2010. Pages 3-14.
2. Cao H, Shockey JM. J Agric Food Chem. 2012. 60(50):12296-303.
3. Thornton B, Basu C. Methods Mol Biol. 2015. 1275:173-9.
4. Bustin SA, Mueller R, Nolan T. Methods Mol Biol. 2020. 2065:5-22.
5. Kozera B, Rapacz M. J Appl Genet. 2013. 54(4):391-406.
6. da Conceição Braga L, Gonçalves BÔP, Coelho PL, et al. Acta Histochem. 2022. 124(1):151821.
7. Laurell H, Iacovoni JS, Abot A, Svec D, Maoret JJ, et al. Nucleic Acids Res. 2012. 40(7):e51.
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1. 人内参引物对:
产品编号 产品名称 包装
QH00001 Human ACTB qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QH00005 Human B2M qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00009 Human GAPDH qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QH00013 Human GUSB qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00017 Human HCK qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00021 Human HMBS qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00025 Human HPRT1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00029 Human HSP90AA1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00033 Human HSP90AB1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00037 Human LDHA qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00041 Human NONO qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00045 Human PGK1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00049 Human PPIA qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00053 Human RPL30 qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00057 Human RPLP0 qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QH00061 Human RPLP1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00065 Human SDHA qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00069 Human TBP qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00073 Human TFRC qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00077 Human YWHAZ qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00081 Human PPIH qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00085 Human RPL13A qPCR Primer Pair 200/1000次
QH00089 Human TUBB qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QH00093 Human RNA18S5 qPCR Primer Pair 200/1000次
注:推荐使用GAPDH、RPLP0、ACTB、TUBB和B2M作为内参,但如果这三者无法满足实验需求,可以尝试使用HPRT1或RNA18S5作为内参。为达到满意的实验效果,上述引物均可尝试使用[5-6]。
2. 小鼠内参引物对:
产品编号 产品名称 包装
QM00002 Mouse Actb qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QM00006 Mouse Rplp0 qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QM00010 Mouse B2m qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00014 Mouse Gapdh qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QM00018 Mouse Hck qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00022 Mouse Hmbs qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00026 Mouse Hprt qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00030 Mouse Hsp90ab1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00034 Mouse Hsp90aa1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00038 Mouse Ldha qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00042 Mouse Pgk1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00046 Mouse Rn18s qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00050 Mouse Rpl30 qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00054 Mouse Tbp qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00058 Mouse Tfrc qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00062 Mouse Rpl13a qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00066 Mouse Tubb4a qPCR Primer Pair 200/1000/5000次
QM00070 Mouse Ywhaz qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00074 Mouse Nono qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00078 Mouse Rplp1 qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00082 Mouse Ppih qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00086 Mouse Sdha qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00090 Mouse Gusb qPCR Primer Pair 200/1000次
QM00094 Mouse Ppia qPCR Primer Pair 200/1000次
注:推荐使用Gapdh、Rplp0、Actb、Tubb和B2m作为内参,但如果这三者无法满足实验需求,可以尝试使用Hprt1或Rn18s作为内参。为达到满意的实验效果,上述引物均可尝试使用[5-6]。
3. 基因组DNA (gDNA)引物对(用于gDNA污染检测):
产品编号 产品名称 包装
QH00101 Human HGDC Primer Pair 200/1000次
QM00098 Mouse MGDC Primer Pair 200/1000次
注:To obtain reliable qPCR data, genomic DNA contamination should be tested by qPCR with genomic DNA contamination primer pair [7]。
4. SYBR Green qPCR Mix及耗材:
产品编号 产品名称 包装
D7260 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X) 1/5/25ml
D7262 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, Low ROX) /5/25ml
D7265 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX) 1/5/25ml
D7268 BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit 100/500次
D7501 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, 防污染型) 1/5/25ml
D7503 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, Low ROX, 防污染型) 1/5/25ml
D7507 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX, 防污染型) 1/5/25ml
D7509 BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit (防污染型) 100/500次
FASA011-1pc BeyoGold™封板膜刮板 1个/袋
FSF002 荧光定量PCR用封板膜(ABI分装) 20片/包装
FSF035-100pcs BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型) 100片/包装
FSF039-20pcs BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型, 进口分装) 20片/包装
FSF039-100pcs BeyoGold™荧光定量PCR用封板膜(压敏型, 进口分装) 100片/包装
FTUB325-1box BeyoGold™ qPCR八联排管(0.2ml, 平盖, 透明) 125排/盒
FTUB325-10bxs BeyoGold™ qPCR八联排管(0.2ml, 平盖, 透明) 125排/盒, 10盒/箱
FTUB333 荧光定量PCR用96孔板(ABI原装) 20片/包装
FTUB384 荧光定量PCR用384孔板(ABI分装) 20片/包装
FTUB335-1box BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 无裙边, 透明) 10个/盒
FTUB335-5bxs BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 无裙边, 透明) 10个/盒, 5盒/箱
FTUB337-1box BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 半裙边, 透明) 10个/盒
FTUB337-5bxs BeyoGold™荧光定量PCR用96孔板(0.2ml, 半裙边, 透明) 10个/盒, 5盒/箱
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