碧云天的Human CXCL1/GROα ELISA Kit (Human CXCL1/GROα Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人趋化因子1酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的CXCL1/GROα的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。多次重复检测结果表明,最小检出量为27pg/ml,与人的ENA-78、GROβ、IL-8、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、NAP-2、RANTES及小鼠KC没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。
CXCL1,又称GROα,属于趋化因子家族,最初在成瘤细胞中被发现,其作为一种生长调节基因在成瘤细胞中出现高水平表达。GROα的cDNA编码产生107个氨基酸的前体蛋白,在酶切作用下,最终得到73个氨基酸的成熟GROα。成熟的GROα分子中不存在潜在的N连接糖基化位点,因此成熟的GROα也没有经历转录后修饰的过程。作为趋化因子家族成员之一,GROα与IL-8相同,也被认为是人中性粒细胞的化学趋化物,能够引起中性粒细胞的脱粒,同时还能够刺激细胞松弛素B处理的中性粒细胞释放胞内酶。在小鼠的体内研究中,GROα能够引起小鼠的急性炎症反应。
GROα主要表达在单核细胞、成纤维细胞、黑色素细胞、乳腺上皮细胞和脐静脉内皮细胞中,其表达会受到PDGF和多种炎性因子的调控。GROα能够与IL-8受体结合,目前研究人员发现在滑膜成纤维细胞和Hs294T细胞中存在GROα的特异性受体,该受体只能识别GROα,不能与IL-8结合。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CXCL1/GROα的浓度,其原理见图1。人CXCL1/GROα特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的人CXCL1/GROα会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人CXCL1/GROα抗体后,生物素化抗人CXCL1/GROα抗体与人CXCL1/GROα结合,形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合,因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CXCL1/GROα浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中靶蛋白浓度。
图1.双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒,包括标准品检测,可以进行96次检测。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
PC177-1 | 人CXCL1/GROα抗体预包被板 | 8孔×12条 |
PC177-2 | 样品分析缓冲液 | 5ml |
PC177-3 | 标准品稀释液 | 10ml |
PC177-4 | 人CXCL1/GROα标准品 | 2-4瓶 |
PC177-5 | 人CXCL1/GROα生物素化抗体 | 10ml |
PC177-6 | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 10ml |
PC177-7 | 洗涤液(20X) | 30ml |
PC177-8 | TMB溶液 | 10ml |
PC177-9 | 终止液 | 5ml |
PC177-10 | 封板膜(透明) | 2张 |
PC177-11 | 封板膜(白色) | 2张 |
— | 说明书 | 1份 |
标准品4℃保存,1-2周内有效,-20℃保存6个月内有效,试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外,试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项:由于标准品一般是冻干粉,在制备后需要严格校准,所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶,如果发现有结晶,请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性,标准品配制使用后,如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属,否则容易失效。
加样时,请注意每个样品或标准品必须更换枪头,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试,所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分,即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时,请独立使用各个试剂盒中的试剂,请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要,在加液后请轻轻晃动整个96孔板,以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行,要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔,以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
PC173 | Mouse CXCL1/KC/N51 ELISA Kit | 96次 |
PC175 | Rat CXCL1/CINC-1 ELISA Kit | 96次 |
PC177 | Human CXCL1/GRO α ELISA Kit | 96次 |