碧云天的Human CA15-3 ELISA Kit (Human Carbohydrate Antigen 15-3 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人糖抗原15-3酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中CA15-3的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为0.38U/ml，与小鼠CA15-3、大鼠CA15-3、马CA15-3、狗CA15-3、猫CA15-3等均没有交叉反应。板内、板间变异系数均小于10%。
糖抗原15-3 (Carbohydrate antigen 15-3,CA15-3)是黏蛋白1 (Mucin-1,MUC-1)在血液中的游离形式，目前作为乳腺癌检测的血清标志物被广泛使用。MUC-1是一种跨膜糖蛋白，通常以异质二聚体形式存在。其胞外域N端链具有超过1000个氨基酸残基，其中具有20个氨基酸的串联重复片段，能够发生O连接的糖基化修饰；MUC1-C包括58个氨基酸的胞外域、28个氨基酸的跨膜域以及72个氨基酸的胞质域，能够与MUC1-N通过非共价键相连形成复合物。MUC1-N端会发生脱落，称为CA15-3，在乳腺癌中其血清浓度会明显上升。MUC1-C的胞质域能够与多种激酶受体相互作用，从而对下游信号通路进行调节。MUC-1几乎在所有的上皮细胞表达，在结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌和胰腺癌中表达升高。
CA15-3主要在肿瘤诊断和判断预后方面具有一定临床意义。CA15-3是第一个发现并且现在仍在使用的乳腺癌相关血清标志物。CA15-3水平升高往往预示着患者处于癌症晚期、肿瘤体积增大，并伴有淋巴结或其它部位的转移发生。但在用于乳腺癌的早期诊断时，CA15-3敏感性较低，仅有15-35%，因此更多的是用于患者预后监测。目前常用的CA15-3单克隆抗体主要有两种：115D8和DF3。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CA15-3的浓度，其原理见图1。人CA15-3特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人CA15-3会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记人CA15-3抗体后，辣根过氧化物酶标记人CA15-3抗体与人CA15-3结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CA15-3浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人CA15-3浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| PC108-1 | 人CA15-3抗体预包被板 | 8孔×12条 |
| PC108-2 | 标准品稀释液 | 10ml |
| PC108-3 | 人CA15-3标准品 | 2-4瓶 |
| PC108-4 | 辣根过氧化物酶标记人CA15-3抗体 | 10ml |
| PC108-5 | 洗涤液(20X) | 30ml |
| PC108-6 | TMB溶液 | 10ml |
| PC108-7 | 终止液 | 5ml |
| PC108-8 | 封板膜(透明) | 2张 |
| PC108-9 | 封板膜(白色) | 2张 |
| - | 说明书 | 1份 |
使用说明：
1.样品准备
a. 样品的准备请按下列流程进行操作：
(a)细胞上清样品离心取上清即可(如100-500×g，5分钟)。
(b)对于血清样品，将全血在室温下放置30分钟至2小时，不要剧烈摇晃以免溶血，待全血自然凝固并析出血清后，4℃约1000-2000×g离心10分钟，取黄色上清即得血清，注意不要吸取白色或淡黄色沉淀。制备好的血清需置于冰上待用。
(c)对于血浆样品，采集的全血建议使用EDTA进行抗凝处理，混匀后置冰上，4℃约1000-2000×g离心10分钟，取黄色或淡黄色上清即得血浆，注意不要吸取白色沉淀。制备好的血浆需置于冰上待用。
(d)若待测样品不能及时检测，样品制备后请分装，冻存于-20℃或-80℃，并注意避免反复冻融。
b.血清样品不应添加任何防腐剂或抗凝剂。
c.样品应清澈透明，检测前样品中如有悬浮物应通过离心去除。
d.请勿使用溶血、高血脂或污染的样品检测，否则结果将不准确。
注：血清或血浆样品可能需要用标准品稀释液适当稀释后再检测。
2.检测前准备工作
a.试剂盒从冰箱中取出后应置室温(25-28℃)平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时置于4℃保存。
b.配制适当量的洗涤液：将洗涤液(20X)用双蒸水或去离子水稀释至1X，例如10ml洗涤液(20X)加190ml水混匀后即为1X的洗涤液。
c.按标准品标签上标注的体积加入标准品稀释液至1瓶标准品中，室温孵育15分钟(为确保标准曲线的准确性，切勿缩短孵育时间)。随后轻轻混匀并用移液枪吹打几次使标准品彻底溶解，此时标准品的浓度为500U/ml。
d.标准品倍比稀释时，先将上述配制好的标准品溶液稀释10倍，再取5个洁净的1.5毫升离心管，每管预先加入250μl的标准品稀释液(通常每个浓度的标准品需要检测2个孔，每个孔的标准品用量为100μl，共需200μl)，并参考图2进行标准品的倍比稀释，最终得到50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625U/ml共六个标准品浓度，最后将稀释好的标准品依次加入预包被板孔中，标准品稀释液直接加入作为0U/ml浓度，共七个标准品浓度。
图2. 标准品倍比稀释示意图。按标准品(STANDARD)标签上标注体积加入标准品稀释液溶解并混匀后的浓度为标准品的母液浓度。母液稀释十倍后的浓度为标准品的起始浓度，其它倍比稀释后的浓度依次为起始浓度的1/2、1/4、1/8、1/16和1/32。
3.洗涤方法
自动洗板机或手工洗板：每孔洗涤液为300μl，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣在厚吸水纸上适当用力拍干。
4.实验过程需自备的材料和仪器
a.不同规格的移液枪及相应的吸头
b.酶标仪
c.自动洗板机(如果没有也可以手工洗板)
d.去离子水或双蒸水
5.操作步骤
a.计算并确定一次实验所需的预包被板条数，取出所需板条放置在96孔框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
b.每次实验都需配制标准品并绘制出标准曲线，同时建议设置本底较正孔，即空白孔，设置方法为该孔只加TMB溶液和终止液。
c.将稀释后的标准品按100μl/孔加入相应孔中，样品建议按照10μl/孔加入相应孔中，再加入90μl/孔的标准品稀释液(注：此时样品已被稀释10倍，计算时请注意记录好样品稀释倍数)，用封板膜(透明)封住反应孔，室温孵育120分钟。如果样本检测值超出检测范围，请稀释后再检测，请注意记录好样品的稀释倍数。
注：请先查阅相关文献确定样品中待检测蛋白的大致浓度，如果该浓度大于或者小于本试剂盒的最高或者最低标准品浓度，请适当稀释或浓缩后再进行检测。
d.洗板5次，且最后一次置于厚吸水纸上拍干。
e.加入辣根过氧化物酶标记人CA15-3抗体100μl/孔(注：此辣根过氧化物酶标记人CA15-3抗体已经预先配制好，无需进行稀释，可直接使用)。用封板膜(白色)封住反应孔，室温避光孵育60分钟。室温偏低时(低于25ºC)，需要适当延长孵育时间。
f.洗板5次，且最后一次置于厚吸水纸上拍干。
g.加入显色剂TMB溶液100μl/孔，用封板膜(白色)封住反应孔，室温避光孵育15-20分钟。室温偏低时需要适当延长孵育时间，此时可以孵育至标准品出现非常显著的颜色变化，若样品浓度足够高也会出现显著的颜色变化。
h.加入终止液50μl/孔，混匀后立即测量A450值。
6.结果分析
a.复孔的值通常在20%的差异范围内结果才有效，复孔平均值可作为测量值。
b.每个标准品或样品的吸光度值应减去本底校正孔的吸光度值(如果没有做校正孔，则不需要减去)。
c.绘制标准曲线。以标准品浓度为横坐标，A450值为纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过样品的吸光度值和标准曲线计算出样品的相应浓度。
图3. Human CA15-3 ELISA Kit的标准曲线。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
d.若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重新测定，计算浓度时需注意乘以样品的稀释倍数。
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| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| PC108 | Human CA15-3 ELISA Kit | 96次 |
