3X Flag Peptide (3X Flag多肽)是一种常用于通过竞争性结合Anti-Flag抗体,从而在免疫沉淀时洗脱与Anti-Flag抗体结合的Flag融合表达蛋白的多肽。本产品不仅可以用于Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶)免疫沉淀时Flag融合表达蛋白的洗脱,也可以用于常规的Anit-Flag抗体免疫沉淀时Flag融合表达蛋白的洗脱。
本产品竞争性洗脱Flag融合表达蛋白后,洗脱后的样品中不含Anti-Flag抗体的轻链和重链,可以有效解决免疫沉淀后Western检测时轻链和重链的干扰问题。普通的免疫沉淀,通常是通过加入上样缓冲液煮沸从而时Flag融合表达蛋白进入到溶液中,但此时Anti-Flag抗体的轻链和重链也会进入到溶液中,并很可能会干扰后续的Western检测。
3X Flag Peptide (3X Flag多肽)由23个氨基酸组成,含有3组Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp重复多肽。在C端的8个氨基酸组成经典的Flag标签(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys; DYKDDDDK)。
3X Flag Peptide (3X Flag多肽)的主要参数如下:
About this protein | |
Product name | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) |
Alternative names | Poly Flag Peptide; ddddk肽; dykddddk肽 |
Description | 3X Flag Peptide consists of 23 amino acids. The 8 amino acids at the C-terminus form the classic Flag tag. 3X Flag Peptide is a synthetic polypeptide containing three repeats of the DYKXXD amino acid sequence. |
Purity | ~98% by HPLC analyse |
Molecular Formula | C120H169N31O49S |
Molecular Weight | ~ 2862 |
Sequence (Three-Letter Code) | Met-Asp-Tyr-Lys-Asp-His-Asp-Gly-Asp-Tyr-Lys-Asp-His-Asp-Ile-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys |
Sequence (One-Letter Code) | MDYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK |
Source | Synthetic |
Reconstitution | TBS (50mM Tris-HCl, pH7.4, 150mM NaCl) |
本产品5mg/ml包装产品配制在TBS中,可以直接使用。25mg为粉末装。3X Flag Peptide (3X Flag多肽)常用储存液浓度为5-25mg/ml,常用使用浓度为100-400μg/ml。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P9801-1mg | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) | 5mg/ml×0.2ml |
P9801-5mg | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) | 5mg/ml×1ml |
P9801-25mg | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) | 25mg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,至少一年有效。P9801-25mg粉末装也可以4℃保存,一年有效。
注意事项:
由于蛋白的每次冻融均会引起部分失活,所以溶液装或粉末装配制成溶液后须分装后于-20℃或更低温度冻存,以避免反复冻融。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1.对于粉末装,由于微量的多肽在冻干过程中沉积在管内,形成很薄或不可见的多肽层,所以在打开管盖前,建议在离心机中约8,000-12,000×g离心10-30秒,使附着在管盖或管壁上的多肽聚集于管底。
2.对于粉末装,使用TBS进行溶解,一般用移液枪的枪头轻吹几下或者轻轻摇晃瓶子,即可使多肽完全溶解。请勿用vortex剧烈振荡,以免多肽变性而失活;溶液装可直接用于后续配制。
3.免疫沉淀样品的3X Flag竞争洗脱法:本方法为非变性法,洗脱效率高,且洗脱后的样品中不含Flag抗体的轻链和重链。
1)3X Flag多肽洗脱液的配制:根据样品量确定洗脱液的用量,取一定量3X Flag多肽储存液用TBS溶液进一步稀释3X Flag多肽溶液至150μg/ml。
2)每个免疫沉淀样品加入100μl 3X Flag多肽洗脱液(150μg/ml),冰浴并摇晃孵育30分钟-2小时,为了提高洗脱效率,可延长孵育时间或重复洗脱。3X Flag多肽洗脱液体积一般为凝胶悬液的5倍。
3)4℃,6000×g离心30秒,小心转移上清至新管中,上清即为洗脱的Flag融合蛋白。注意不要吸到凝胶。
4.洗脱的Flag融合蛋白置于4℃待用,或者-20℃长期保存。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2271-0.5ml | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 0.5ml |
P2271-2ml | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 2ml |
P2271-10ml | Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) | 10ml |
P9801-1mg | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) | 5mg/ml×0.2ml |
P9801-5mg | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) | 5mg/ml×1ml |
P9801-25mg | 3X Flag Peptide (3X Flag多肽) | 25mg |