碧云天研发生产的Thioredoxin Glutathione Reductase (smTGR),即曼式血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Schistosoma mansoni Thioredoxin Glutathione Reductase, smTGR),是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于曼式血吸虫(Schistosoma mansoni)的黄素酶(Flavoenzyme)。曼式血吸虫中没有硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin reductase)和谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase),硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin glutathione reductase, TGR)兼具硫氧还蛋白还原酶和谷胱甘肽还原酶的活性。本产品可以依赖于NADPH将氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原为还原型谷胱甘肽(GSH),也可以将硫氧还蛋白(Thioredoxin, Trx)和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid), DTNB)还原[1]。
smTGR催化的反应原理如下:以NADPH作为电子供体,将GSSG、Thioredoxin (Trx)和DTNB还原,分别生成GSH、Trx-(SH)2和TNB,同时生成NADP+。可利用smTGR对DTNB的还原反应,检测smTGR的活性。
图1. Thioredoxin Glutathione Reductase (smTGR) (P2383)反应原理图。
smTGR是一种特殊的硒蛋白(Selenoproteins),其羧基末端为GCUG基序,倒数第二个氨基酸为硒半胱氨酸(Selenocysteine, Sec, U),被称为第21种天然存在的氨基酸。硒半胱氨酸与半胱氨酸的结构高度相似,是一种高活性的氨基酸,与半胱氨酸相比,Sec具有更强的亲核能力和更低的还原电势,对于smTGR的催化活性是必需的[1, 2]。smTGR是抗氧化防御系统中的关键酶,能将GSSG还原为GSH,而GSH可用于降低细胞内的氧化水平,从而缓解氧化应激[3];另外它还可以通过还原Thioredoxin维持胞内氧化还原平衡并调节信号转导,从而控制细胞增殖、分化、死亡以及其他重要的生理过程。通过RNA干扰使TGR基因沉默可导致寄生虫快速死亡,因此它还是治疗血吸虫病的关键药物靶点[1]。
碧云天smTGR催化DTNB还原的效果请参考图2。
图2. 碧云天Thioredoxin Glutathione Reductase (smTGR) (P2383)催化DTNB还原的效果图。配制200μl反应体系:50mM Tris-HCl, 2mM EDTA (pH7.5 @ 25ºC), 0.3mM NADPH, 2.5mM DNTB, 40/20/10/0μg/ml smTGR。将除smTGR以外的组分充分混匀,分装到96孔板中,每孔180μl,然后用移液器分别取20μl 400/200/100/0μg/ml smTGR加入到对应的孔中,并吹打混匀,迅速将96孔板放入酶标仪中,震荡10秒,然后立即检测产物TNB在波长412nm的吸光度OD412。每分钟检测1次,共检测15分钟,酶标仪温度设为25ºC。不同酶浓度下,OD412随时间的变化的曲线如图所示。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
用途:将GSSG催化还原为GSH;将DTNB还原为TNB以检测NADPH;筛选Thioredoxin Glutathione Reductase抑制剂;治疗血吸虫病和其它吸虫病药物的研发。
来源:由大肠杆菌表达的重组蛋白,表达基因为曼式血吸虫TGR基因。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to reduce 1μmol DTNB per minute in 0.5ml standard DTNB assay with 2.5mM DTNB and 0.3mM NADPH in TE Buffer (50mM Tris-HCl, 2mM EDTA, pH7.5 @ 25ºC).
比活力:0.1U/mg。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。
酶储存液:50mM Tris-HCl (pH7.5 @ 25ºC), 2mM EDTA, 50% Glycerol.
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2383S | smTGR (1mg/ml) | 250μl |
P2383M | smTGR (1mg/ml) | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,至少一年有效。
注意事项:本产品检测时涉及氧化还原反应,因此所有氧化剂或还原剂都会干扰产品的测定。如果在样品中的还原剂无法避免,例如DTT、巯基乙醇等,这些还原剂的总浓度应至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。另外,硫酸钠、硫酸铵和铁氰化物等都会干扰本产品的酶活性,请尽量避免。
NADPH稳定性较差,请注意低温保存或新鲜配制。
一定要严格控制反应时的温度,否则会引起较大误差。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
FPT010 | 96孔板(平底, 带盖) | 1个/袋 |
FPT011 | 96孔板(平底, 带盖) | 100个/箱 |
P2372 | Glutathione Reductase (Yeast, Recombinant) | 60U/300U/1500U |
P2383 | Thioredoxin Glutathione Reductase (smTGR) | 250μg/1mg |
S0052 | 总谷胱甘肽检测试剂盒 | 100次 |
S0053 | GSH和GSSG检测试剂盒 | 共100次 |
S0055 | 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法) | 100次 |
ST038 | DMSO | 100ml/500ml |
ST360 | NADPH | 10mg/50mg/200mg/1g |
ST761 | Tris (Molecular Biology Grade) | 100g/500g/2.5kg |
ST876 | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 100ml/500ml |
ST2033 | 氧化型L-谷胱甘肽(≥98%, Reagent grade) | 200mg/1g/5g |
ST2035 | 氧化型L-谷胱甘肽(≥98%, BioPremium) | 200mg/1g |
ST2474 | 还原型L-谷胱甘肽(≥98%, Reagent grade) | 1g/5g/25g |
ST2479 | 还原型L-谷胱甘肽(≥98.0%, BioPlus) | 5g/25g/100g |