TEV Plus Protease (His-tag)是一种在大肠杆菌中重组表达的带His标签(6X His tag)的高特异性、高活性和高稳定性的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。本产品的用途和使用方法和常规的TEV Protease (His-tag) (P2307)一致，识别和酶切的多肽序列也完全一致。
TEV Plus Protease (His-tag)经过优化改造，与TEV Protease (His-tag) (P2307)以及TEV Protease (GST/His-tag) (P2310)相比，具有更好的位点识别特异性、更高的酶活性、更高的稳定性以及较低的酶自切割活性。
建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，并在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Plus Protease专一性识别与酶切的上述七肽序列。这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。构建含有TEV Plus Protease专一性识别位点的目的蛋白表达质粒，可以考虑选购碧云天的质粒pET-N-His-TEV (D2905)。
TEV Plus Protease的最佳酶切温度是30ºC，在29-34ºC范围内均具有较高的酶活性，但当温度达到或高于37ºC时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4ºC用TEV Plus Protease酶切过夜。TEV Plus Protease在pH6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。
TEV Plus Protease还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV Plus Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中，在4ºC边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Plus Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白，溶液中带有His标签的本TEV Plus Protease以及切除下来的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。His标签蛋白的纯化可以考虑选购碧云天的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及碧云天的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)或His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229)。
TEV Plus Protease的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor)如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Plus Protease的酶活力，因为天然的TEV Plus Protease含有其维持酶活力所必需的Cys151。
碧云天TEV Plus Protease (His-tag)比较适用于酶切带His标签的蛋白，因为酶切后没有完全酶切的His标签重组蛋白、切除下来的His标签以及TEV Plus Protease (His-tag)都可以结合于镍柱上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白。
酶活性单位定义：30ºC，pH8.0条件下反应1小时，能够切割3µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。
碧云天TEV Plus Protease (His-tag)酶活性鉴定结果可参考图1。
图1. TEV Plus Protease (His-tag) (P2305)切割GST标签蛋白的效果图。含有TEV Plus Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与TEV Plus Protease进行反应，底物的用量为3μg，酶的用量依次为0、0.03、0.04、0.06、0.13、0.25U，30ºC在1X TEV Plus Buffer中反应1小时后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白(Recombinant protein)和约26kD的GST标签。
TEV Plus Protease (His-tag)是一种经酶工程改造和优化，具有多个突变位点的高活性和高稳定性，以及较低的酶自切割活性的烟草蚀纹病毒蛋白酶。本产品带有His标签(6X His tag)，分子量大小约28kDa，纯度：≥95%。
TEV Plus Protease (His-tag)储存液组成为：25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50% (v/v)甘油，pH8.0。
10X TEV Plus Buffer组成为：500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 5mM EDTA, 10mM DTT, pH8.0。
本产品每毫升含有1000单位的酶，可用于约3mg带有TEV Plus Protease (His-tag)识别位点的融合蛋白的切割。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2305S-1 | TEV Plus Protease (His-tag) (1U/µl) | 1ml |
| P2305S-2 | 10X TEV Plus Buffer | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2305M-1 | TEV Plus Protease (His-tag) (1U/µl) | 10ml |
| P2305M-2 | 10X TEV Plus Buffer | 20ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，两年有效。
注意事项：本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 组分 | 体积(μl) |
| H2O | X |
| 10X TEV Plus Buffer | 5 |
| 标签蛋白(8μg) | Y |
| TEV Plus Protease (His-tag) (1U/μl) | 0、1.5或2.5 |
| 总体积 | 50 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2210 | BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) | 10ml |
| P2218 | BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) | 100ml |
| P2220 | BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) | 1000ml |
| P2226 | His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) | 10ml |
| P2229S | His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) | 10ml |
| P2251 | BeyoGold™ GST-tag Purification Resin | 10ml |
| P2253 | BeyoGold™ GST-tag Purification Resin | 100ml |
| P2255 | BeyoGold™ GST-tag Purification Resin | 1000ml |
| P2262 | GST标签蛋白纯化试剂盒 | 10ml |
| P2233 | BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) | 10/100/1000ml |
| P2302 | PreScission Protease | 100U |
| P2303 | PreScission Protease | 500U |
| P2305 | TEV Plus Protease (His-tag) | 1000/10000U |
| P2306 | TEV Plus Protease (GST/His-tag) | 1000/10000U |
| P2307 | TEV Protease (His-tag) | 1000U |
| P2308 | TEV Protease (His-tag) | 10000U |
| P2310 | TEV Protease (GST/His-tag) | 1000/10000U |
| P2311 | WELQ Protease (5U/μl) | 500U/2500U/10KU |
| P2312 | SUMO Protease | 200/1000/5000U |
| P2313 | 重组SENP2蛋白酶(His-tag) | 500U/2KU/10KU/50KU |
| P2314 | 重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) | 500U/2KU/10KU/50KU |
| P2526 | IdeZ Protease (IgG-specific) | 1/5/20KU |
| P2528 | IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) | 1/5/20KU |
