Tubulin超快速Western检测试剂盒(试用装)
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产品编号 P0972FT
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1-3次
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碧云天研发生产的Tubulin超快速Western检测试剂盒(Superquick Western Assay Kit for Tubulin),是一种仅需10分钟就可以从完成转印的印迹膜到获得内参蛋白Tubulin条带的超快速Western检测试剂盒。本试剂盒包含了Anti-Tubulin-HRP、QuickBlock™封闭和抗体稀释液、Western洗涤液、以及BeyoECL Star化学发光试剂的试剂盒,一抗和二抗孵育合并为一步操作,使用便捷,背景低,包含从封闭到化学发光的整套试剂,转膜完成后通常10分钟就可以得到高质量的内参蛋白Western结果,可以极大加快内参蛋白的检测速度。

本试剂盒可以兼容检测人、小鼠、大鼠等的β-Tubulin。

内参是在各种组织和细胞中都组成性表达的蛋白,并且表达水平相对恒定,很少受外部诱导物的影响,因此被广泛用作Western蛋白质上样量是否一致的参照(Loading control)。但不同细胞、组织及不同条件甚至不同的蛋白上样量,对内参蛋白的检测会有一定的影响,所以建议进行一种或多种内参蛋白的检测[1-4]。

本系列产品目前包括Actin/GAPDH/Tubulin超快速Western检测试剂盒(P0970/P0971/P0972)。

本试剂盒中的QuickBlock™封闭和抗体稀释液,可同时用于印迹膜的封闭和抗体的稀释。封闭时间仅需1分钟,总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液。本产品稀释和配制的内参抗体工作液,可以在4ºC保存和使用不少于1个月,并且可以重复使用。

本试剂盒使用了Anti-Tubulin-HRP,因此一抗和二抗的孵育仅需一步即可完成。抗体特异性高、灵敏度极佳,使用浓度经过优化,按照1:500比例稀释,室温通常孵育5分钟即可进行后续的洗涤和检测。

本试剂盒中提供的BeyoECL Star化学发光试剂,灵敏度高、背景极低、发光时间长,适用于大多数常规的Western检测。特殊情况下,如果成像效果需要优化,可根据当前实验结果选择灵敏度更高的BeyoECL Moon (P0018F)或BeyoECL SuperMoon (P0018H)。

使用本试剂盒从完成转印的印迹膜开始实际操作约10分钟,检测获得的Tubulin条带的效果,请参见图1。

图1.碧云天Tubulin超快速Western检测试剂盒(P0972)的检测效果图。其中293T细胞裂解液蛋白浓度为2.7mg/ml。QuickBlock™封闭和抗体稀释液封闭1分钟,抗体稀释比例为1:500,抗体孵育5分钟。Western印迹成像由BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)完成。曝光时间:293T样品为10秒,小鼠肝脏组织为4秒。Tubulin的分子量约50kDa。根据灰度分析,各蛋白裂解液样品的Tubulin条带灰度与上样量成相应的比例关系。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

如果检测的是6.6×8.5cm印迹膜,按照每次Western封闭需要QuickBlock™封闭和抗体稀释液5ml,稀释抗体需要QuickBlock™封闭和抗体稀释液5ml,抗体10μl,稀释后的抗体共计可以使用3次,洗涤液每次使用10ml,化学发光试剂工作液每次需要1ml计算,本试剂盒小包装和中包装分别可以进行6次和30次Tubulin的Western快速检测。如果检测的是更常见的裁切后的约2×8.5cm印迹膜,按照封闭以及抗体孵育液体用量为每次2ml,洗涤液用量每次4ml,发光试剂工作液用量每次0.4ml计算,小包装和中包装分别可以检测15次和75次。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0972FT-1 Anti-Tubulin-HRP 4μl
P0972FT-2 QuickBlock™封闭和抗体稀释液 8ml
P0972FT-3 Western洗涤液 40ml
P0972FT-4 BeyoECL Star A液 600μl
P0972FT-5 BeyoECL Star B液 600μl
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P0972S-1 Anti-Tubulin-HRP 20μl
P0972S-2 QuickBlock™封闭和抗体稀释液 40ml
P0972S-3 Western洗涤液 200ml
P0972S-4 BeyoECL Star A液 3ml
P0972S-5 BeyoECL Star B液 3ml
- 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P0972M-1 Anti-Tubulin-HRP 100μl
P0972M-2 QuickBlock™封闭和抗体稀释液 200ml
P0972M-3 Western洗涤液 2×500ml
P0972M-4 BeyoECL Star A液 15ml
P0972M-5 BeyoECL Star B液 15ml
- 说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,一年有效。QuickBlock™封闭和抗体稀释液、Western洗涤液以及BeyoECL Star A液和B液,4ºC保存,至少6个月有效。

注意事项:

本产品可用于人、小鼠、大鼠的β-Tubulin的检测,其它种属建议先进行预实验。

请注意回收使用过的抗体工作液。回收的抗体工作液可以再重复使用2次。稀释后的抗体,包括使用过的抗体工作液,请4ºC保存。

回收后重复使用的抗体工作液,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10,000×g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体工作液出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。

使用本产品,通常10分钟可得到高质量的内参蛋白Western结果,即封闭1分钟、抗体孵育5分钟、洗涤30秒3次、BeyoECL试剂孵育1分钟、成像通常0.5分钟之内。

对于6.6×8.5cm的印迹膜,推荐使用碧云天的Western洗膜盒(FFX050)进行洗涤和孵育;对于裁切后的条形印迹膜,推荐使用碧云天的5格Western洗膜盒(FFX055)进行洗涤和孵育。

个别情况,如果希望获得到更好的Western结果,可适当增加封闭、抗体孵育及洗涤的时间,并适当优化成像的曝光时间。

BeyoECL Star A液和B液均对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
以6.6×8.5cm的印迹膜为例:
1.膜的封闭。
a.完成转膜后,立即把印迹膜(约6.6×8.5cm)放置到预先加入5ml QuickBlock™封闭和抗体稀释液的Western洗膜盒(FFX050)中,置于翘板摇床上缓慢摇动,室温封闭1分钟。推荐使用BeyoShaker™数字式翘板摇床(E6673)。后续如果无特殊说明,各种试剂的用量都以约6.6×8.5cm大小的印迹膜为例进行说明。
注1:经反复测试,室温封闭1分钟即可达到理想的封闭效果,但也可以根据实际情况酌情延长封闭时间。如果需要更多的封闭液,推荐碧云天的QuickBlock™ Western封闭液(P0252)。
注2:如果使用裁切后的约2×8.5cm印迹膜,推荐使用2ml QuickBlock™封闭和抗体稀释液。
2.抗体孵育。
a.Anti-Tubulin-HRP抗体工作液的配制。推荐抗体稀释比例为1:500,例如在5ml QuickBlock™封闭和抗体稀释液中加入10μl Anti-Tubulin-HRP,即可得到5ml Anti-Tubulin-HRP抗体工作液。
注:通常1:500稀释可以适用于大多数情况,但如果遇到样品中目的蛋白过少或过多时,也可以根据实际情况在1:250~1:1000范围内进行调整。如果需要更多的抗体稀释液,推荐碧云天的QuickBlock™ Western一抗稀释液(P0256)。
b.用微型台式真空泵、移液器或滴管等吸尽用于封闭的QuickBlock™封闭和抗体稀释液。推荐使用BeyoVac™基础型台式真空吸液器(E6878)或BeyoVac™调速型台式真空吸液器(E6883)。
c.加入5ml Anti-Tubulin-HRP抗体工作液。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,推荐用量为2ml。
d.置于翘板摇床上缓慢摇动,室温孵育5分钟
注:经反复测试,室温孵育5分钟即可达到理想检测效果,但也可以根据实际情况酌情延长抗体孵育时间。
e.回收抗体工作液,留待后续重复使用。
f.使用Western洗涤液洗涤3次,每次的用量为10ml,每次30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,每次的推荐用量为4ml。
注:经反复测试,洗涤3次,每次30秒,即可达到理想效果,但也可以根据实际情况每次酌情延长洗涤时间或增加洗涤次数。如果需要更多的Western洗涤液,推荐碧云天的Western洗涤液(P0023C)或Western洗涤液(10X) (P0023C3/P0023C6)。
3.蛋白检测。
a.BeyoECL Star工作液的配制:混合0.5ml BeyoECL Star A液和0.5ml BeyoECL Star B液,配制成1ml BeyoECL Star工作液,室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,BeyoECL Star工作液配制0.4ml即可。
b.用WB专用镊子(FS035)将膜取出,用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面),然后置于一洁净保鲜膜上。
c.滴加1ml BeyoECL Star工作液到膜上,确保使工作液均匀覆盖在膜上,放置1分钟。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,BeyoECL Star工作液的推荐用量为0.4ml。
注:通常放置1分钟就可以进行后续的成像或压片检测,但也可以根据实际情况酌情延长放置时间。如果需要更多的BeyoECL Star,推荐碧云天的BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) (P0018A)。
d.取膜,弃BeyoECL Star工作液,用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间,随后进行化学发光成像仪检测或压片检测。
注:详细的Western实验步骤可以参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Taylor S. C, Berkelman T, Yadav G, Hammond M. Mol. Biotechnol. 2013. 55, 217–226.
2.Lee, Hyun-Gwan, et al. Proteomics. 2016. 16(13): 1863-1867.
3.Ferguson R E, Carroll H P, Harris A, et al. Proteomics. 2005. 5(2): 566-571.
4.Chen W, Xu W H. Electrophoresis. 2015. 36(17): 2046-2049.
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