QuickBlock™无蛋白Western封闭液(5X)
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产品编号 P0242-500ml
数量
¥ 349.00
产品包装:
100ml 500ml
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碧云天生产的QuickBlock™无蛋白Western封闭液(5X) (QuickBlock™ Protein-Free Blocking Buffer for Western Blot, 5X)是最新一代不含任何蛋白组分的5倍浓缩型高效低背景的Western快速封闭液。本封闭液的总体效果显著优于传统的基于BSA (牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液,实测效果优于国内外多个同类产品。本产品主要用于Western blot (WB)实验中聚偏二氟乙烯膜(Polyvinylidene fluoride membrane, PVDF膜)或硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane, NC膜)的封闭,也可以用于Western实验中一抗或二抗的稀释[1-3]。

本封闭液不含蛋白。本封闭液不含动物源性物质(Animal origin-free, AOF)且不含蛋白,能有效避免封闭液中的外源蛋白质与蛋白样品之间可能的相互作用,提高目的蛋白检测的准确性。

本封闭液快速高效。本产品的封闭时间短,仅需5-10分钟即可完成封闭,时间与QuickBlock™ Western封闭液(P0252)相近,比5% BSA的封闭时间大幅缩短。

本封闭液背景值低。本产品不含任何蛋白质成分,原则上与抗体无交叉反应,提高了抗体检测灵敏度,因此Western blot的条带更清晰、杂带少、背景值极低、信噪比更高。

本封闭液应用范围广。本产品不含碱性磷酸酶、酪蛋白和生物素成分,尤其适用磷酸化(Phosphorylation)、糖基化(Glycosylation)等蛋白修饰的检测,以及生物素(Biotin)的检测。

本封闭液兼容性好。本产品兼容辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AP)和生物素标记的二抗。

本封闭液使用便捷。本产品无需添加任何额外的试剂,5倍稀释后可直接用于印迹膜的封闭。

本封闭液稳定性高。本产品由于不含蛋白,不易滋生微生物,可室温长期稳定保存。

本封闭液与QuickBlock™ Western封闭液(P0252)、5% BSA及国内外同类产品的封闭效果对比参见图1。在相同样品和同等实验条件下,本产品(配制成1X后与P0240完全一致)与QuickBlock™ Western封闭液(P0252)的效果相近或对于特定的样品和抗体各有优劣,与5%BSA以及国内外的两个品牌的同类无蛋白封闭液产品(Y、Z)相比,碧云天的QuickBlock™无蛋白Western封闭液封闭后的背景更低,目标条带更强,杂带更少,信噪比更好。

图1.碧云天QuickBlock™无蛋白Western封闭液(P0240)、QuickBlock™ Western封闭液(P0252)与5% BSA和国内外同类无蛋白封闭液品牌(Y、Z)的封闭效果比较图。每个膜左侧和右侧泳道分别为30µg和10µg蛋白量的293细胞裂解液,封闭时间均为10分钟,使用Histone H3 Mouse Monoclonal Antibody (AF0009)、GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (AF0006)和Hsp70 Rabbit Monoclonal Antibody (AF1156)进行Western检测。Western印迹成像使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统完成(EI600)。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

由于没有任何一种封闭液能完美适用于所有实验体系,不同样品、不同抗体的差异也会比较大,因此对于一些特殊的实验,可能需要根据具体情况考虑尝试使用其它更合适的封闭液,例如QuickBlock™ Western封闭液(P0252)、Western封闭液(P0023B),甚至是BSA (ST023/ST025/ST2249/ST2254)或脱脂奶粉(P0216)等配制的封闭液。关于不同封闭液的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/support/blocking-buffer.htm

按照每张膜封闭需要5-10ml QuickBlock™无蛋白Western封闭液(1X)计算,一个100ml包装的本产品可以配制成500ml的QuickBlock™无蛋白Western封闭液(1X),可以封闭50-100张膜,一个500ml包装的本产品可以封闭250-500张膜。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P0242-100ml QuickBlock™无蛋白Western封闭液(5X) 100ml
P0242-500ml QuickBlock™无蛋白Western封闭液(5X) 500ml
说明书 1份
保存条件:

室温保存,一年有效。长期不使用,可以4ºC或-20ºC保存。

注意事项:

本产品推荐仅一次性使用,重复使用可能会导致封闭效果下降。

本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-10分钟。对于一些背景较高的抗体,可以尝试延长封闭时间至20分钟。本产品封闭时间不宜超过20分钟。

取放PVDF膜和NC膜建议使用WB专用镊子(FS035),并仅轻轻夹取其边角,操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。

PVDF膜一经浸润和活化,需一直保持湿润,根据Western进行到的具体步骤可放置于Western转膜液或洗涤液等适当溶液中,否则可能会产生难以封闭的异常背景。

本封闭液也可以用于一抗、二抗的稀释,但为进一步提高信噪比,推荐使用QuickBlock™无蛋白Western一抗稀释液(P0244)和QuickBlock™无蛋白Western二抗稀释液(P0246)进行一抗和二抗的稀释。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.QuickBlock™无蛋白Western封闭液的准备。
取适量的QuickBlock™无蛋白Western封闭液(5X),按照1:4的比例用超纯水或双蒸水稀释。例如10ml QuickBlock™无蛋白Western封闭液(5X)加入40ml超纯水或双蒸水配制成50ml QuickBlock™无蛋白Western封闭液(1X)。超纯水推荐使用碧云天生产的ST872 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile)。
2.完成转膜后,用Western洗涤液洗涤印迹膜1-2分钟。
3.根据膜的大小,在平皿或者其它适当容器中倒入一定体积的QuickBlock™无蛋白Western封闭液(1X),确保封闭液后续能充分覆盖膜即可。对于常规的Western,一张约6.6×8.5cm的膜推荐使用10ml左右的封闭液。
4.用WB专用镊子(FS035)夹住膜的一角,将膜放置在QuickBlock™无蛋白Western封闭液(1X)中,使封闭液完全浸没膜,置于水平摇床上封闭约5-10分钟(经多种抗体的测试封闭10分钟的效果很多时候会显著优于常规的BSA封闭1小时的效果)。
5.封闭后的膜无须洗涤即可用于一抗孵育等后续实验。推荐使用QuickBlock™无蛋白Western一抗稀释液(P0244)和QuickBlock™无蛋白Western二抗稀释液(P0246)进行一抗和二抗的稀释。详细的Western操作可以参考如下的相关网页:
https://www.beyotime.com/support/western.htm
参考文献:
1.Batteiger B, Newhall WJ 5th, Jones RB. J Immunol Methods. 1982. 55(3):297-307.
2.Haycock JW. Anal Biochem. 1993. 208(2):397-9.
3.Rodda DJ, Yamazaki H. Immunol Invest. 1994. 23(6-7):421-8.
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