SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)
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产品编号 P0015A
数量
¥ 37.00
产品包装:
10ml
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SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer,1X),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的蛋白上样缓冲液。
可以直接用于细胞或组织样品的裂解,并用于后续常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。使用SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷;缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的Bradford法或BCA法测定蛋白浓度。这样蛋白上样量的均一性就较难控制,需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或Western的检测结果,来调整上样量。当细胞量或组织用量能控制得比较均一时,使用本裂解液直接裂解获取蛋白样品会比较便捷。
本产品也可以用于SDS-PAGE时待上样蛋白样品的稀释等。 
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P0015A SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X) 10ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,至少一年有效。
注意事项:
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)中含少量DTT,有轻微刺激性气味,但不含剧毒的巯基乙醇。 
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)必须完全溶解后再使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(1X)。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间 置于水浴中。
2.对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升SDS-PAGE上样缓冲液(1X)的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使SDS-PAGE上样缓冲液(1X)和细胞充分接触。通常SDS-PAGE上样缓冲液(1X)接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。裂解后的样品收集到一洁净离心管内。
3.对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升SDS-PAGE上样缓冲液(1X)的比例加入SDS-PAGE上样缓冲液(1X)。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再进行裂解。
4.对于组织样品
a.把组织剪切成细小的碎片。
b.按照每20毫克组织加入150-250微升SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)的比例加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)。(如果裂解不充分可以适当添加更多的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X),如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)的用量。)
c.用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
d.充分裂解后,将样品收集到一洁净离心管内。
说明:如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5.100℃或沸水浴加热5-10分钟,以充分变性蛋白。说明:煮沸前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体,通常在本上样缓冲液内沸水浴煮沸8-10分钟后可以确保该粘稠的半透明状物体消失,以便于后续的上样操作。
注意:如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组DNA含量较高,煮沸5-10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸5-10分钟或者加入适量1X的蛋白上样缓冲液后再煮沸3-5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放,同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作了。
6.冷却到室温后,室温稍离心一下以沉淀可能出现的杂质等,上清即可直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

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