PLK5基因敲除慢病毒
收藏
产品编号 L29721
数量
¥ 6999.00
产品简介
使用说明
说明书下载
相关产品
相关论文
产品问答

PLK5 Knockout Lentivirus(PLK5基因敲除慢病毒)是一种感染动物细胞后可以同时表达Cas9、目的基因sgRNA和puromycin抗性基因的慢病毒。本产品用于在动物细胞中基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因,并且本慢病毒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。

本慢病毒基因序列的关键图谱信息请参考图1。本慢病毒可用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。

图1. 可同时表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的本慢病毒其基因序列的关键图谱信息。

用于包装本慢病毒的质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得,sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。

本慢病毒用于实验时,建议同时选购无任何靶向的对照慢病毒Control Knockout Lentivirus (L00015)或靶向GFP的对照慢病毒GFP Knockout Lentivirus (L00017)

碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的PLK5基因敲除的质粒(L29720 pLenti-PLK5-sgRNA)慢病毒(L29721 PLK5 Knockout Lentivirus)HEK293T细胞(L29722 PLK5 Knockout HEK293T Cells)HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L29723 PLK5 Knockout HEK293T RIPA Lysate)HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L29724 PLK5 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品,具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。

PLK5基因的基本信息如下:

Species Gene Symbol Gene ID GenBank Accession Transcript
Human PLK5 126520 BC100792 NR_026557

 

About the gene
Official Symbol PLK5
Previous Symbol PLK5P
Official Full Name polo like kinase 5
Synonyms SgK384ps
Location 19p13.3
Gene Type protein-coding gene
Uniprot ID Q496M5
Pathway/Library others
Gene Summary Inactive serine/threonine-protein kinase that plays a role in cell cycle progression and neuronal differentiation. PLK5_HUMAN,Q496M5
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
L29721 PLK5 Knockout Lentivirus 108 TU
说明书 1份
保存条件:

-80℃保存,至少一年有效。

注意事项:

碧云天拥有sgRNA序列的知识产权,如果需要sgRNA序列,请在订购后发送邮件向info@beyotime.com索取。sgRNA序列信息与本慢病毒,未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。使用者在发表研究论文或结果时,应注明来源。

对于非目录产品的CRISPR基因敲除用的慢病毒的定制,可联系碧云天技术服务service@beyotime.com

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 慢病毒的感染:
a. 确定puromycin的筛选浓度:待感染的细胞按一定密度铺在12孔或24孔中,按照0、0.2、0.5、1、1.5、2、3、4、5µg/ml这样的浓度测试细胞对puromycin的敏感性,推荐使用碧云天的Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) (ST551)。两天后细胞全部死亡的最低浓度即为该细胞的puromycin筛选浓度,具体步骤参考碧云天该产品的使用说明:https://www.beyotime.com/product/ST551-10mg.htm
b. 慢病毒感染细胞:按实验需要将细胞铺板(如12孔板),细胞数以第2天密度约50%为宜。设置非感染细胞组、对照组和基因敲除组。37℃培养过夜后,培养液中加入5~10μg/ml的Polybrene (C0351/ST551)。病毒感染前,从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值加入适量病毒,对于未浓缩的病毒,可以直接按0.5ml/孔加入细胞,对于浓缩或测定滴度的病毒,一般100µl/孔或107 TU已经足够,轻轻摇匀,37℃继续培养。两天后,吸除含病毒的培养液,换为新鲜的含一定浓度的puromycin的培养液进行筛选,一般筛选2天后,非感染细胞组细胞逐渐死去,加入病毒组存活率比较高,就可以收集部分细胞检测目的蛋白的表达或进行其它实验。培养过程中,可以将细胞转至6孔板或10cm培养皿进行扩大培养。一周之后,puromycin浓度可减半。如果有必要后续可以通过将细胞稀释至2.5个/ml,然后按照每孔200µl接种到96孔板中(每孔平均0.5个细胞),筛选单克隆细胞株。病毒感染的方法可参考Polybrene (C0351)的使用说明:https://www.beyotime.com/product/C0351-1ml.htm
2. 基因编辑的鉴定:
a. 对于多克隆细胞,可以通过T7 Endonuclease I (T7EI)进行鉴定,即提取细胞的基因组DNA,在sgRNA序列两边设计引物进行PCR扩增,然后进行T7EI酶切,具体请参考碧云天的T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) (D7080)基因组编辑突变检测试剂盒(D0508);也可以通过相应的抗体进行检测。
b. 对于单克隆细胞,可通过PCR扩增出sgRNA靶向的基因片段后进行常规测序的方式进行验证,同时也可以使用相应的抗体进行检测。
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
L00015 Control Knockout Lentivirus 108 TU
L00017 GFP Knockout Lentivirus 108 TU
C0222 青霉素-链霉素溶液(100X) 100ml
C0351-1ml Polybrene (Hexadimethrine Bromide) 1ml
C0351-50mg Polybrene (Hexadimethrine Bromide) 50mg
D0508S/M 基因组编辑突变检测试剂盒 25/100次
D7080S/M/L T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) 250/1250/5000U
ST551-10mg Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) 10mg/ml×1ml
ST551-50mg Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) 10mg/ml×5ml
ST551-250mg Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) 250mg
ST1380-500mg Polybrene (≥94%, Reagent grade) 500mg
ST1380-2g Polybrene (≥94%, Reagent grade) 2g
ST1380-10g Polybrene (≥94%, Reagent grade) 10g
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献: